Штамм бактерий Rhodococcus luteus AT2, используемый для очистки почвы и воды от нефти и нефтепродуктов

(51) 12 1/20 (2011.01) 12 1/00 (2011.01) 09 1/00 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ ОЧИСТКИ ПОЧВЫ И ВОДЫ ОТ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ(57) Изобретение относится к области биотехнологии и экологии и касается получения нового штамма бактерий, который может быть использован для очистки почвенных и водных экосистем от нефти и нефтепродуктов. Штамм бактерийАТ 2 используют для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов. Штамм депонирован в РГП Республиканская коллекция микроорганизмов под номером- 0295. Предлагаемый штаммАТ 2 активно утилизирует сырую нефть при концентрации 10 на 41,93. В полевых условиях снижает концентрацию нефти в почве на 82,2084,18, что улучшает экологическую обстановку окружающей среды.(72) Раманкулов Ерлан Мирхайдарович Нурлыбеков Кайрат Нурлыбекович Нурлыбеков Азамат Нурлыбекович Масалимов Жаксылык Каирбекович Кулжанова Камшат Арыстановна Апендина Гульжанат Серикбаевна Туякбаева Акмарал Усерхановна Курманбаева Асылай Бактыбаевна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Национальный центр биотехнологии Республики Казахстан Комитет науки Министерства образования и науки Республики Казахстан 25561 Изобретение относится к области биотехнологии и экологии и касается получения нового штамма бактерий, который может быть использован для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов. Известен штамм бактерий, используемый для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов ( 2133769 С 1, кл. 612 1/20,02 3/34, В 09 С 1/10, 12 1/20, 12 11, 1999),штамм устойчив к ионам тяжелых металлов. Недостатком данного штамма является неспособность к утилизации нефти и нефтепродуктов при их высоком содержании в почве. Известен штамм бактерий для разложения нефти и нефтепродуктов( 2299239 кл. В 09 С 02 12 12, 2007),штамм выделен из образца нефтезагрязненной воды с Западно-Сибирского месторождения. Недостатком указанного штамма является неспособность деградировать углеводороды нефти в среде со средней и высокой соленостью. Задачей изобретения является получение нового штамма бактерий,активно окисляющего нефтепродукты как в зоне контакта с водой, так и непосредственно в нефтяной пленке, способного утилизировать углеводороды нефти как в пресных,так и в засоленных экосистемах. Технический результат - биоремедиация средне и сильно загрязненных почв и воды в широком диапазоне солености. Характеристика штамма ШтаммАТ 2 выделен из нефтезагрязненной почвы Атырауской области. Штамм представляет собой грамположительные кокки-палочки-кокки. Палочки размером 2-3 мкм с округленными концами расположены одиночно и в скоплениях. Рост на СПА через 72-96 часов образует инкубации колоний округлой формы,размером 2-3 мм, красного цвета, слегка приподнятые, блестящие, с гладкой поверхностью,пастообразной консистенции и ровными краями. Аэроб. При росте на СПБ наблюдается небольшое помутнение, тонкая пленка, рост на глубине среды. Штамм не токсичен и не патогенен. Физиолого-биохимические признаки Образует щелочь из глюкозы, мальтозы и лактозы. Каталаза положительная,оксидаза отрицательная, уреаза отрицательная. Разжижает желатин,гидролизует крахмал,образует сероводород и нитраты,не образует ацетилметилкарбонил и индол, не дезаминирует фенилаланин. Хранят на скошенных агаризованных средах с 1 нефтью или с углеводородом при температуре 4 С. Пересев осуществляют 1 раз в 3 месяца. Растет при температуре в интервале от 15 до 37 С, оптимум температуры роста 2830 С. Штамм характеризуется высокой способностью к утилизации нефти и нефтепродуктов. Штамм бактерийАТ 2 депонирован в коллекции микроорганизмов РКМ под номером - 0295. Сущность изобретения поясняется следующими конкретными примерами Пример 1. Для оценки нефтеокисляющей активности культуру выращивали в минеральной среде следующего состава, г/л -10,0 431,0 24 - 1,0 КН 2 Р 4 - 1,0 472 - 0,2 СаС 12 - 0,02 дистиллированная вода,среды 7,07,2. Среду разливали по 100 мл в колбы объемом 250 мл и стерилизовали 30 мин. при давлении 1 атм. Суспензию бактерий получали путем смыва с поверхности скошенной среды 1 мл стерильной воды и затем вносили е в среду. В качестве единственного источника углерода использовали сырую нефть. Культивировали на качалке при е скорости 180 об./мин и температуре 28-30 в течение 14 суток. Контролем служил вариант без биомассы микроорганизмов. Остаточное количество нефти определяли гравиметрическим методом,экстрагируя нефть четыреххлористым углеродом(СС 14). Результаты исследования показали, что содержание нефти снизилось через 14 суток на 41,93. Изменение фракционного состава остаточной нефти после внесения бактерииАТ 2 проводили методом газожидкостной хроматографии. Полученные данные представлены в таблице 1. Пример 2. Проводили изучение нефтеокисляющей активности культуры микроорганизмовАТ 2 в полевых условиях. Объектом служил экспериментальный участок на территории Мангистауской области, тип почвы солонец-солончак. Территория была разделена на два участка первый участок был искусственно загрязнен нефтью месторождения Каражанбас, а второй - месторождения Жана Узень. Микроорганизмы вносили в количестве 1010 кл/г почвы. После внесения проводили рыхление и увлажнение. Контролем служили нефтезагрязненные участки без внесения микроорганизмов. Продолжительность эксперимента 3 месяца. Остаточное количество нефти в почве определили гравиметрическим методом,экстрагируя нефть гексаном и хлороформом. Результаты исследования показали,что содержание нефти через 3 месяца снизилось на участке, загрязненной нефтью из месторождения Каражанбас на 82,20, а на участке, загрязненной нефтью из месторождения Жана Узень, на 84,18(таблица 2). Таблица 1 Углеводородокисляющая активность штамма 2 Наименование Деструкция нефти в воде за 14 суток,культуры Алифатическая Ароматическая Смолы Асфаль- ПарафиОбщее фракция фракция тены ны содержание нефти Таблица 2 Степень деградации нефти в почве под воздействием штамма 2 Варианты Почва загрязненная нефтью м.р. Каражанбас Почва загрязненная нефтью м.р. Жана Узень ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм бактерий депонированный в коллекция микроорганизмов РГП НЦБ РК КН МОН РК, под номером - 0295,используемый для очистки почвы и воды от нефти и нефтепродуктов.