Способ получения антигена для серологической диагностики фасциолёза овец

(51) 61 39/00 (2011.01) 01 33/531 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Способ получения антигена для серологической диагностики фасциолза овец, включает отмывание фасциол физиологическим раствором, помещение в стерильный физиологический раствор, добавление в него антибиотика, периодическое встряхивание,гомогенизацию, центрифугирование полученной смеси, отбрасывание осадка и добавление к надосадочной жидкости охлажднного этилового спирта, полученную смесь охлаждают при 0 в течение 2 часов, периодически встряхивают, затем подвергают центрифугированию при 7000 об/мин при температуре 4 в течение 10 мин, осадок удаляют, а к надосадочной жидкости добавляют этиловый спирт 96,8 в соотношении 32 соответственно, полученную смесь встряхивают и выдерживают при температуре -5 в течение 2 часов, затем центрифугируют при 5000 об/мин в течение 10 мин при температуре 4, после чего надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют физиологический раствор и подвергают воздействию ультразвуком с частотой 22 кГц и интенсивностью 100 вт/см 2, в течение 2 мин.(72) Сулейменов Маратбек Жаксыбекович Аманжол Рафилбек Аманжоллы Тулеуханов Али(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(56) Бюллетень Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени института гельминтологии имени К.И. Скрябина. М., 1986, выпуск 44, с. 28-38(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕНА ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ФАСЦИОЛЗА ОВЕЦ(57) Изобретение относится к области ветеринарной паразитологии,точнее,к серологической диагностике и может быть использовано для изготовления антигенов,применяемых для выявления фасциолза овец. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в повышении выявляемости больных фасциолзом овец. 25405 Изобретение относится к области ветеринарной паразитологии,точнее,к серологической диагностике и может быть использовано для изготовления антигенов,применяемых для выявления фасциолза овец. Известен способ получения антигена для серологической диагностики фасциолза овец,включающий отмывание фасциол физиологическим раствором,помещение в стерильный физиологический раствор, добавление в него антибиотиках,периодическое встряхивание,гомогенизацию, центрифугирование полученной смеси, отбрасывание осадка и добавление к надосадочной жидкости охлажденного этилового спирта (Бюллетень Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени института гельминтологии имени К.И. Скрябина. - М., 1986. - выпуск 44. - с. 28 - 38). Недостатком данного способа является не высокая специфичность полученного антигена. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в повышении выявляемости больных фасциолзом овец. Задачей изобретения является разработка способа получения высокоактивного и специфичного антигена для серологической диагностики фасциолза овец. Способ получения антигена для серологической диагностики фасциолза овец, включает отмывание фасциол физиологическим раствором, помещение в стерильный физиологический раствор, добавление в него антибиотика, периодическое встряхивание,гомогенизацию, центрифугирование полученной смеси, отбрасывание осадка и добавление к надосадочной жидкости охлажднного этилового спирта, полученную смесь охлаждают при 0 в течение 2 часов периодически встряхивают, затем подвергают центрифугированию при 7000 об/мин при температуре 4 в течение 10 мин, осадок удаляют, а к надосадочной жидкости добавляют этиловый спирт 96.8 в соотношении 32 соответственно, полученную смесь встряхивают и выдерживают при температуре -5 в течение 2 часов, затем центрифугируют при 5000 об/мин в течение 10 мин при температуре 4, после чего надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют физиологический раствор и подвергают воздействию ультразвуком с частотой 22 кГц и интенсивностью 100 вт/см 2, в течение 2 мин. Изобретение осуществляется следующим образом. Живые половозрелые формы фасциолв количестве 55-60 экземпляров собирают из жлчных протоков печени, отмывают 5-6 раз стерильным физиологическим раствором и помещают в стерильный 0,85 раствор хлористого натрия, затем в них добавляют 250 тыс. ЕД пенициллина. Посуду с фасциолами встряхивают через каждый час в течение 8 часов, при этом визуально контролируют жизнеспособность гельминтов, затем оставляют на 10 часов при температуре 18. После чего фасциолы гомогенезируют. добавляют физиологический раствор 100,0 см 3, подвергают центрифугированию 2 при 7000 об/мин в течение 30 минут. Осадок отбрасывают, а в надосадочную жидкость добавляют охлажденный этиловый спирт 96,8 в соотношении 51 соответственно. Полученную смесь охлаждают при 0 в течение 2 часов,периодически встряхивают. Затем центрифугируют при 5000 об/мин при температуре 4 в течение 10 мин., осадок удаляют, а к надосадочной жидкости добавляют повторно этиловый спирт 96,8 в соотношении 32 соответственно, встряхивают и выдерживают при температуре -5 в течение 2 часов, затем центрифугируют при 5000 об/мин в течение 10 мин при температуре 4. После чего надосадочную жидкость сливают, а в осадок добавляют физиологический раствор до исходного объема 100.0 см 3 и подвергают воздействию ультразвуком с частотой 22 кГц и мощностью 100 вт/см 2 в течение 2 мин с целью полной гомогенизации осадка. Полученный после озвучивания раствор используют в качестве целевого продукта. Для определения активности и специфичности предлагаемого антигена была использована реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). В реакциях были использованы сыворотки крови больных овец, у которых при убое были обнаружены фасциолы у 5 голов, дикроцелии у 7 голов, эхинококки - 6 голов, смешанная инвазия(дикроцелии и эхинококки) у 2 голов. Были также использованы сыворотки крови кроликов,иммунизированных цельным фасциолзным антигеном(ЦФА) и заведомо известная отрицательная лиофилизированная сыворотка крови овец. Всего исследовано 22 пробы. При этом было обнаружено, что эритроцитарный диагностикум с ЦФА дает неспецифичную реакцию с сыворотками крови больных овец дикроцелиозом,эхинококкозом и смешанной инвазией, то есть выявляются антитела, реагирующие с ЦФА,поскольку при изучении сходства антигенной структуры у фасциол найдены общие компоненты с другими трематодами. В отличие от эритроцитарного диагностикума с ЦФА предлагаемый антиген, специфичный и более активный. Сыворотки крови больных фасциолзом овец и сыворотки иммунизированных кроликов дают положительный результат, а заведомо известная отрицательная сыворотка и сыворотки крови больных дикроцелиозом, эхинококкозом,смешанной инвазией овец показали отрицательный результат. Использование предлагаемого способа способствует повышению выявляемости при серологической диагностике фасциолза овец. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения антигена для серологической диагностики фасциолза овец, включающий отмывание фасциол физиологическим раствором,помещение в стерильный физиологический раствор,добавление в него антибиотика, периодическое встряхивание, гомогенизацию, центрифугирование 25405 полученной смеси, отбрасывание осадка и добавление к надосадочной жидкости охлажднного этилового спирта, отличающийся тем, что полученную смесь охлаждают при 0 в течение 2 часов, периодически встряхивают, затем подвергают центрифугированию при 7000 об/мин при температуре 4 в течение 10 мин, осадок удаляют,а к надосадочной жидкости добавляют этиловый спирт 96,8 в соотношении 32 соответственно, полученную смесь встряхивают и выдерживают при температуре -5 в течение 2 часов, затем центрифугируют при 5000 об/мин в течение 10 мин при температуре 4, после чего надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют физиологический раствор и подвергают воздействию ультразвуком с частотой 22 кГц и интенсивностью 100 вт/см 2 в течение 2 мин.