Способ получения метаболитного антигена для серологической диагностики фасциолёза овец

КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ использовано при изготовлении эритроцитарного диагностикума для выявления больных фасциолезом овец. Предложенный способ получения метаболитного антигена для серологической диагностики фасциолеза овец включает извлечение фасциол из печени овец и их персистенцию в стерильном физиологическом растворе хлористого натрия,содержащем желчь овец в соотношении 120 при температуре 37,5-38,5 С в течение 48-72 часов, и центрифугирование взвеси фасциол при 5000-7000 об/мин. надосадочную жидкость используют в качестве целевого продукта. Способ технологически несложен и позволяет получить активный и специфичный антиген для серологической диагностики фасциолеза овец.(72) Халила Абдилах Нурлакович Сенкебаева Алтынай Анарбаевна Момынова Камила Шаккозовна Дуйсенова Сагыныш Сабитовна(73) Учреждение Шымкентское отделение Международного Казахско-Турецкого университета им. Х.А. Ясави(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕТАБОЛИТНОГО АНТИГЕНА ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ФАСЦИОЛЗА ОВЕЦ 13229 Изобретение относится к ветеринарии, а именно к паразитологии, и может быть использовано при изготовлении эритроцитарного диагностикума для серологической диагностики фасциолеза. Известен способ получения метаболитного антигена для серологической диагностики фасциолеза овец, включающий извлечение фасциол из печени овец, отмывание их от посторонних примесей и персистенцию в стерильной жидкости при комнатной температуре с встряхиванием через каждый час в течение 8 часов и дополнительным выдерживанием в течение 10 часов без встряхивания, удаление фасциол, центрифугирование оставшейся взвеси при 7000 об/мин в течение 30 мин, двукратное воздействие на надосадочную жидкость 98,8 спиртом для осаждения метаболитного антигена, разбавление осадка физиологическим раствором и 2-минутное воздействие ультразвуком с частотой 44 Кгц и мощностью 60 Вт/см 2(предварительный патент РК 9972, 2001). Недостатком известного способа является сложная технология получения метаболитного антигена,негативное влияние комнатной температуры и среды обитания при персистенции фасциол в жидкости. А также воздействие ультразвука на осажденный спиртом целевой продукт. Предложенный способ получения метаболитного антигена для серологической диагностики фасциолеза овец включает извлечение фасциол из печени овец и их персистенцию в стерильном физиологическом растворе хлористого натрия,содержащем желчь овец в соотношении 120 при температуре 37,5-38,5 С в течение 48-72 часов, и центрифугирование взвеси фасциол при 5000-7000 об/мин. В качестве целевого продукта используют надосадочную жидкость. Способ несложен технологически и позволяет получить активный и специфичный антиген для диагностики фасциолеза овец. Способ осуществляется следующим образом. Для изготовления антигена используют имагинальную стадию различных видов фасциол. С этой целью паразитов извлекают из пораженной фасциолезом печени от вынужденно убитых овец неблагополучного стада после лабораторных исследований фекалий овец и обнаружения яиц паразита по общепринятой методике. Извлечение фасциол из инвазированной печени осуществляют путем рассечения желчных ходов и смывания их в кювету физиологическим раствором хлористого натрия. Полученную массу паразитов отмывают трехкратно стерильным физиологическим раствором хлористого натрия путем центрифугирования при 500 об/мин в течение 7-10 мин. Отмытую массу фасциол разбавляют в соотношении 110 стерильным физиологическим растворомс содержанием овечьей желчи в соотношении 120 и добавляют пенициллин и стрептомицин в бактериостатической концентрации. Полученную взвесь фасциол разливают в чашки Петри в объеме 15-20 мл, помещают в термостат при температуре 37 С и выдерживают в течение 4872 часов. После термостатирования взвесь паразитов центрифугируют при 5000-7000 об/мин в течение 10-15 минут. Полученную надосадочную жидкость разливают в стерильные флаконы, хранят в условиях холодильника при -10-15 С и используют в качестве антигена для изготовления эритроцитарного диагностикума и постановки РНГА по общепринятой методике. Пример осуществления способа Для отбора доноров проводили копрологические исследования по общепринятой методике у овец неблагополучной по фасциолезу отары. Для получения одной серии метаболического антигена использовали 5 больных фасциолезом овец-доноров. Отобранных животных подвергали убою в убойном пункте, извлекали у них печень,рассекали желчные ходы и извлекали фасциол путем смывания физиологическим раствором хлористого натрия в стерильную кювету. Полученную массу паразитов в количестве 250-300 экземпляров трехкратно отмывали стерильным физиологическим раствором путем центрифугирования при 500 об/мин в течение 5-7 минут. Дальнейшее получение метаболического антигена осуществляли по предлагаемому способу. Из полученной серии метаболического фасциолезного антигена (МА-1) был изготовлен эритроцитарный диагностикум (ЭД) для постановки РНГА и испытан с положительным результатом с сывороткой крови 750 овец неблагополучной по фасциолезу отары в сравнении с известным антигеном (МА-2) (таблица). Сравнительная оценка активности и специфичности фасциолезного метаболитного антигена-1 (МА-1) с метаболитным антигеном-2 Результаты РНГА с сыворотками крови больных овец фасциолезом эхинококкозом число проб 25 25 Результаты РНГА с контрольными сыворотками крови овец позитивная сыворотка число положи проб т. реагиро вало 25 25 25 25 нормальная сыворотка число полож проб ит. реагир овало 25 25 13229 При контрольном убое 20 положительно реагировавших с антигеном МА-1 по РНГА овец и ветеринарно-санитарной экспертизе туш во всех случаях серологический диагноз был подтвержден обнаружением фасциол в печени. Предлагаемый способ позволяет получить для серологической диагностики фасциолеза овец метаболический антиген, обладающий повышенной активностью и специфичностью. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения метаболитного антигена для серологической диагностики фасциолза овец,включающий извлечение фасциол из печени овец и их персистенцию в стерильном физиологическом растворе хлористого натрия, отличающийся тем,что персистенцию фасциол осуществляют в стерильном физиологическом растворе хлористого натрия, содержащем жлчь овец в соотношении 120 при температуре 37,5-38,5 гС в течение 48-72 часов,затем взвесь фасциол центрифугируют при 50007000 об/мин, а надосадочную жидкость используют в качестве целевого продукта.