Штамм бактериофага BV-0160 используемый для получения бруцеллезного антигена

(51) 12 7/00 (2011.01) 61 39/00 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и может быть использовано для серологической диагностики бруцеллеза животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в создании штамма бактериофага для получения эффективного бруцеллезного антигена. Указанный штамм бактериофага депонирован в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(КазНИВИ). Штамм специфического бактериофага -0160 КазНИВИ Тб-01, используемый для получения бруцеллезного антигена.(72) Барамова Шолпан Аузаровна Султанов Ахметжан Акиевич Тен Виктор Борисович Воробьев Александр Львович Оспанов Ержан Калиолдинович Алпысбаева Сабира Егизбаевна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(56) Островская Н.Н. К характеристике бруцеллезного бактериофага ТБ//ЖМЭИ, 1961,6,с. 70-78(54) ШТАММ БАКТЕРИОФАГА -0160 ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗНОГО АНТИГЕНА Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и может быть использовано для серологической диагностики бруцеллеза животных. Известен бруцеллезный фаг Тб, лизирующий культурыив -форме,применяемый для идентификации и типизации возбудителя бруцеллеза Н.Н.Островская. К характеристике бруцеллезного бактериофага Тб// ЖМЭИ.- 1961. -6. - с. 70-78. Недостатком данного фага является отсутствие способности к адсорбции и лизису- вариантов бруцелл. Задачей изобретения является создание специфического бактериофага для серологической диагностики бруцеллеза. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в создании штамма бактериофага для получения эффективного бруцеллезного антигена. Штамм специфического бактериофага- 0160 КазНИВИ Тб-01, используемый для получения бруцеллезного антигена. Указанный штамм бактериофага депонирован в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(КазНИВИ). Идентификацию штамма бактериофагов проводят по основным морфологическим,культуральным и физиолого-биохимическим свойствам,огласно справочного издания,2005.с. - . 370-386). Бруцеллезный бактериофаг- 0160 Штамм бактериофага получен из бактерий 19 под индуцирующим воздействием пенициллина. В последующем лизогенную культуру бруцелл фильтруют через керамический фильтр с диаметром пор 100-150 нм и в фильтрате определяют наличие фага нанося 1 каплю фильтрата на газон с индикаторной культурой бруцелл. Сравнен с типовым бруцеллезным фагом Тб(эталонный). Полученный штамм характеризуется следующими признаками. Назначение штамма бактериофага обладает высокой урожайностью. Повышает эффективность серологической диагностики бруцеллеза. Используют для приготовления комбинированных бруцеллезных антигенов,Состав среды и условия культивирования мясопептонный бульон, аэробные условия. Морфологические признаки. Корпускулы фага- 0160 имеют головку гексагональной формы,размером 605 нм, слабовыраженный отросток длиной 162 нм, базальная пластинка отсутствует. Фаг -0160 относится кморфологической группе,подгруппе, согласно классификации А.С. Тихоненко Ультраструктура вирусов бактерий. -М.,1968.-с.47-51. 2 Культуральнан свойства. На эритрит-агаре образовывает негативные колонии диаметром от 0,5 до 3-4 мм с прозрачным дном и зоной лизиса на периферии. Максимальная адсорбция фага отмечалась от 1 час до 3 час. 30 мин. Количество адсорбированных частиц колебалось от 33 до 72,5. Время латентного периода составило в среднем от 2 до 4 часов. Урожайность от 90 до ПО фаговых корпускул на 1 микробную клетку. Аэроб. Оптимальная температура выращивания 37 С, рН 6,8-7,0. Литическая активность. Лизирует культуры бруцелл в- формеи.проявляет активность в отношении культур,,. Антигенная структура.-0160 фаг в стабильной -форме. Серологические свойства. Комбинированный антиген, состоящий из бруцелл с адсорбированным корпускулами бруцеллезного фага- 0160 КазНИВИ Тб-01, обладает высокой эффективностью при исследовании сывороток крови животных из неблагополучных по бруцеллезу хозяйств. Выявляет от 3 до 8 инфицированных животных дополнительно к биофабричному антигену. Физиологические свойства. Фаг термостабилен,прогрев до 60 С в течение часа не снижает титра. Значительное снижения титров отмечено при прогреве в течение часа при 70 С и 75 С - 30 мин. Полная инактивация фагов наступала при прогреве 80 С - 1 час и выше. 8 М раствор мочевины не оказывал заметного влияния на фаги. Осмотическому шоку они не подвержены. Концентрации цитрата 0,5-1,0-1,5 не оказывала заметного влияния, а 2, 2,5, 3 вызывали полную задержку роста. Индол не образует. Хранение на питательной среде. Хранят при температуре от 4 С до 8 С в течение 3 мес,максимальная продолжительность хранения хорошая. Пример. В качестве индуцирующего агента используют пенициллин. С этой целью штамм 19 пересевают в питательном бульоне с постепенно увеличиваемыми концентрациями пенициллина (10, 50 Ед/см 3 и т.д. до 5000 Ед/см 3) до появление видимого роста,проявляющегося в помутнении бульона и образовании пристеночного кольца. В результате действия индуцирущего агента бруцеллы переходят в лизогенное состояние и при посеве на твердую питательную среду бактериальная масса становится слизистой, что является одним из критериев лизогенности. В дальнейшем лизогенную культуру выращивают в питательном бульоне в течение 3-4 суток до появления пристеночного кольца. Питательный бульон с лизогенными бактериями фильтруют через керамический фильтр и определяют титр фага нанесением 1 капли последовательно разведенного фильтрата (10-1, 10-2 и т.д. до 10-12) на газон с индикаторным штаммом 19. При титровании фага- 0160 устанавливают предельный титр 10-8. Хранят фаг -0160 при температуре от 4 С до 8 С. Предложенный штамм бактериофага эпизоотически актуален для Республики Казахстан,а приготовленный из штамма бруцеллезного фага В - 0160 комбинированный антиген является более эффективным в сравнении с биофабричным бруцеллезным антигеном. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм бактериофага -0160, депонирован в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(КазНИВИ), под номером КазНИВИ ТБ-01,используемый для получения бруцеллезного антигена.