Вакцина против тейлериоза крупного рогатого скота

(51) 61 39/018 (2010.01) 61 31/00 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Вакцина против тейлериоза крупного рогатого скота, содержащая сыворотку крови новорожденных телят,бензилпенициллина натриевую соль,стрептомицина сульфат,микостатина,дополнительно содержит антиген из ЮжноКазахстанского штамма,питательную среду Лейбович и желатин при следующем соотношении компонентов, об. антиген Южно-Казахстанского штамма 4,5-5,5106 клеток в 1 мл сыворотка крови 15-20 бензилпенициллина натриевая соль 0,01-0,012 стрептомицина сульфат 0,01-0,012 микостатин 0,001-0,0012 желатин 1-1,05 среда Лейбович остальное Предлагаемая вакцина обладает высокой профилактической эффективностью против тейлериоза крупного рогатого скота и имеет перспективу широкого внедрения в практику ветеринарной медицины.(76) Бердикулов Максат Аманбекович Батырханов Мархабат Серикбаевич Кожабаев Мажит(56) Вакцина (ВИЭВ) против тейлериоза крупного рогатого скота жидкая культуральная // Степанова Н.И., Заблоцкий В.Т., Мутузкина З.П., Расулов И.Х. Иммунопрофилактика тейлериоза крупного рогатого скота, Ветеринария, 3.-М., 1987.-С.4-8(54) ВАКЦИНА ПРОТИВ ТЕЙЛЕРИОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА(57) Изобретение относится к области ветеринарной протозоологии, а именно к изготовлению вакцины для специфической профилактики тейлериоза крупного рогатого скота. Задачей изобретения является создание высокоиммунной вакцины против тейлериоза крупного рогатого скота из эпизоотически актуального аттенуированного штамма, выделенного в условиях южного Казахстана и удобным ее в применении. 25252 Изобретение относится к области ветеринарной протозоологии, а именно к изготовлению вакцины для специфической профилактики тейлериоза крупного рогатого скота. Известна вакцина против тейлериоза крупного рогатого скота,содержащая антиген среднеазиатского штамма,сыворотку крови новорожденных телят, а также бензилпенициллина натриевую соль, стрептомицина сульфат, микостатина и питательную среду Игла(Вакцина (ВИЭВ) против тейлериоза крупного рогатого скота жидкая культуральная // Степанова Н.И., Заблоцкий В.Т., Мутузкина З.П., Расулов И.Х.,Иммунопрофилактика тейлериоза крупного рогатого скота, Ж. Ветеринария, 3.- М., 1987.с.4-8.). Недостатком указанной вакцины является то, что для ее изготовления используется не региональный штамм возбудителя, и она обладает повышенной реактогенность. Кроме того вакцину необходимо хранить при -196 С в жидком азоте, что обуславливает технологическую сложность ее применения. Задачей изобретения является создание высокоиммунной вакцины против тейлериоза крупного рогатого скота из эпизоотически актуального аттенуированного штамма, выделенного в условиях южного Казахстана. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в повышении иммуногенности,устранении реактогенности вакцины и необходимостью применения жидкого азота. Вакцина против тейлериоза крупного рогатого скота, содержащая сыворотку крови новорожденных телят,бензилпенициллина натриевую соль,стрептомицина сульфат,микостатина,дополнительно содержит антиген из ЮжноКазахстанского штамма,питательную среду Лейбовйч и желатин при следующем соотношении компонентов, об. антиген из Южно-Казахстанского штамма 4,5-5,5106 клеток в 1 мл сыворотка крови 15-20 бензилпенициллина натриевая соль 0,01-0,012 стрептомицина сульфат 0,01-0,012 микостатин 0,001-0,0012 желатин 1-1,05 среда Лейбовйч остальное Предлагаемую вакцину изготавливают следующим образом. Для приготовления вакцины против тейлериоза используют штамм, выделенного из клещей семействовида, путем заражения подопытных животных. После чего из этих животных извлекают регионарные лимфатические узлы, селезенки и методом трипсинизации выделяют лимфоидные клетки, инвазированные шизонтами. Полученную культуральную массу культивируют при температуре 37 С в культуральной среде Лейбовйч, к которой перед 2 использованием добавляют 15 сыворотки теленка от общего объма, раствор антибиотиков,содержащий бензилпенициллина натриевую соль 100 МЕ/мл (0,01), стрептомицина сульфат 100 мкг/мл (0,01), микостатина 10 МЕ/мл (0,001). Пассирование культуры проводят два раза в неделю в следующем расчете к 1-2 мл старой культуры добавляют 8-9 мл свежей среды для роста, сохраняя общий объем до 10 мл. Подсчитывают среднюю скорость размножения клеток в каждом пассаже и рассчитывают на объем сосуда. В процессе пассирования лимфоидных клеток определяют жизнеспособность их методом субвитального окрашивания 0,5-ным трипановым синим. Срок пассирования культуры зависит от уровня аттенуации штамма, которую выявляют методом определение энзиматической (ферментативной) активности штамма. Пассирование прекращают при полном исчезновении энзиматической активности зараженных тейлериями клеток. При этом число пассажей должно быть не менее 100. После чего доводят концентрацию жизнеспособных клеток до 4,5-5,5106 клеток в 1 мл среды. Для защиты выращенных клеток добавляют стерильный желатин, в количестве 1 от общего объма продукции. Готовую вакцину контролируют на стерильность, безвредность, реактогенность и иммуногенность, тщательно перемешивают и разливают в стерильные флаконы или ампулы. Вакцина сохраняет активность при температуре хранения минус 4 С не менее 18 месяцев со дня изготовления, при температуре хранения плюс 24 С - до двух месяцев. Полученную вакцину вводят внутримышечно, в дозе 1 мл на голову животных. Иммунизируют телят с 3-х месячного возраста до сезона нападения клещей на животных. Иммунитет у привитых животных образуются не позже 21-25 дня после вакцинации. Продолжительность иммунитета пожизненно. Безвредность вакцины проверяют на 6 морских свинках массой по 300-400 г путем введения внутримышечно в области бедра с внутренней стороны по 1 мл вакцины, разведенной раствором Хенкса в соотношении 110. Наблюдение за животным ведут в течение 10 суток. Вакцина оценивается как безвредная, если в течение срока наблюдения все морские свинки остаются клинически здоровыми и на месте инъекции отсутствуют воспалительные явления. Реактогенность вакцины проверяют на 6 телятах в возрасте 9-18 месяцев не ниже средней упитанности, из благополучных по тейлериозу хозяйств. Вакцину в объеме 1 мл инъецируют телятам внутримышечно. Животных наблюдают в течение 30-35 суток с ежедневной термометрией. Спустя 14-22 дня после введения вакцины отбирают образцы периферической крови телят и микроскопируют мазки с интервалом 3-5 суток до конца наблюдения. Вакцина не должна вызывать заболевание и гибель привитых животных. Допускается у 25252 привитых животных на 12-20 дни после иммунизации проявление слабой реакции в виде 15-дневного повышения температуры тела на 0,5-2 С и увеличение регионарных лимфатических узлов при удовлетворительном общем состоянии. В мазках крови привитых животных пораженность эритроцитов тейлериями не должно превышать 1. Иммуногенность вакцины определяется заражением через 30-35 дней после вакцинации шести (опытных) и двух невакцинированных телят(контрольных) вирулентным штаммом возбудителя тейлериоза путем подсадки в область груди и паха по 20-25 экземпляров инвазированных клещей или введения стабилята (приготовленного из указанного количества клещей) животным подкожно в область средней трети шеи. Наблюдения за телятами ведут 25-30 дней с ежедневным измерением температуры тела и микроскопированием мазков крови от телят с периодичностью один раз в 3-5 дней за весь период испытания. Вакцина считается иммуногенной,если иммунизированные животные не заболели тейлериозом, а контрольные телята должны заболеть на 10-15 день после заражения и погибнуть или переболеть с клиническими признаками тейлериоза (повышение температуры тела на 1,52,5 С в течение 9-16 дней при пораженности эритроцитов тейлериями равной 8-35 и более). Пример 1. Процесс осуществляют по выше описанной методике, но после получения исходного материала для культивирования пассирование культуры проводят три раза в неделю при следующем расчете к 2-3 мл старой культуры добавляют 7-8 мл свежей среды для роста, сохраняя общий объем до 10 мл. При этом состав компонентов среды изменяют в следующем соотношении, об. сыворотка крови - 20,бензилпенициллина натриевая соль - 0,012,стрептомицина сульфат - 0,012, микостатина 0,0012, антиген из Южно-Казахстанского штамма 4,5-5,5106 клеток в 1 мл, желатин 1,05, питательная среда Лейбовйч -остальное. Пример 2. В эксперименте использованы 76 телята 3-5 месячного возраста, содержащиеся в одних пастбищных условиях Сайрамского района Южно-Казахстанской области. Ежегодная зараженность молодняка крупного рогатого скота тейлериозом в данном регионе составляет до 80, а взрослый скот на 85-90 является тейлерияносителем. Исследуемые животные разделены на опытные (38 голов) и контрольные группы (38 голов). За месяц до начало сезона заболеваемости тейлериозом животных опытной группы иммунизировали вышеизложенной вакциной против тейлериоза. Телята контрольной группы не вакцинировались. Наблюдения за телятами вели в течение 8 месяцев. Результаты исследований показали, что среди животных опытной группы заболевание тейлериозом не регистрировалось (эффективность 100), а среди животных контрольной группы заболели 26 телят (зараженность 68,4). Таким образом, предлагаемая вакцина является безвредной - не вызывает осложнений, гибели вакцинированных животных и проявляет высокую профилактическую эффективность против тейлериоза крупного рогатого скота. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Вакцина против тейлериоза крупного рогатого скота, содержащая сыворотку крови новорожденных телят,бензилпенициллина натриевую соль,стрептомицина сульфат,микостатина,отличающаяся тем, что она дополнительно содержит антиген южно-казахстанского штамма, среду Лейбович и желатин при следующем соотношении компонентов, мас. сыворотка крови новорожденных телят 15-20 бензилпенициллина натриевая соль 0,01-0,012 стрептомицина сульфат 0,01-0,012 микостатин 0,001-0,0012 антиген южно-казахстанского штамма 4,5-5,5106 клеток в 1 мл желатин 1-1,05 среда Лейбович остальное