Способ получения аллергена для диагностики эхинококкоза овес

(51) 61 39/00 (2011.01) 61 33/00 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ биологического материала из эхинококкового пузыря зараженных животных,фильтрацию биологического материала через фильтровальную бумагу, его концентрирование, замораживание концентрата, дефростацию полученной смеси,центрифугирование, отбор надосадочной жидкости и консервирование целевого продукта с последующей лиофилизацией,в качестве биологическою материала используют жидкость из эхинококковых пузырей в легких овец, которую фильтруют через фильтровальную бумагу,концентрируют в роторном испарителе, полученный концентрат замораживают при температуре -20 С в течение 20 мин., после чего проводят дефростацию в течение 12 часов, затем проводят денатурацию белков в автоклаве при 1 атм. в течение 40 мин.,полученную смесь двукратно центрифугируют при 5000 об/мин, осадок удаляют, а содержание азота в надосадочной жидкости доводят до 60,0 мгпутем добавления физиологического раствора, после чего полученную смесь консервируют в 0,2 растворе пропионовой кислоты и лиофилизирут.(72) Сулейменов Маратбек Жаксыбекович Аманжол Рафилбек Аманжоллы Тулеуханов Али Зулкарнаева Эльмира Кадиргалиевна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(56) Предварительный патент РК 12995, кл. А 61 К 39/00, 2003(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛЛЕРГЕНА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЭХИНОКОККОЗА ОВЕС(57) Изобретение относится к ветеринарной гельминтологии, в частности к способам получения аллергена,применяемого для диагностики эхинококкоза овец. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в повышении выявляемости больных эхинококкозом овец. Способ получения аллергена для диагностики эхинококкоза овец включающий взятие Изобретение относится к ветеринарной гельминтологии, в частности к способам получения аллергена,применяемого для диагностики эхинококкоза овец. Известен способ получения аллергена для диагностики эхинококкоза овец, включающий взятие биологического материала из эхинококкового пузыря в печени зараженных животных,фильтрацию биологического материала через бумажный фильтр,концентрирование,замораживание концентрата,дефростацию полученной смеси, центрифугирование, отбор надосадочной жидкости и консервирование целевого продукта с последующей лиофилизацией Предварительный патент РК 12995, кл. А 61 К 39/00. 2003 г Недостатком данного способа является применение канцерогенного консерванта и не высокая специфичность чувствительности получаемого аллергена. Способ получения аллергена для диагностики эхинококкоза овец включающий взятие биологического материала из эхинококкового пузыря зараженных животных,фильтрацию биологического материала через фильтровальную бумагу, его концентрирование, замораживание концентрата, дефростацию полученной смеси,центрифугирование, отбор надосадочной жидкости и консервирование целевого продукта с последующей лиофилизацией,в качестве биологического материала используют жидкость из эхинококковых пузырей в легких овец, которую фильтруют через фильтровальную бумагу,концентрируют в роторном испарителе, полученный концентрат замораживают при температуре - 20 С в течение 20 мин., после чего проводят дефростацию в течение 12 часов, затем проводят денатурацию белков в автоклаве при 1 атм. в течение 40 мин.,полученную смесь двукратно центрифугируют при 5000 об/мин, осадок удаляют, а содержание азота в надосадочной жидкости доводят до 60,0 мгпутем добавления физиологического раствора, после чего полученную смесь консервируют в 0,2 растворе пропионовой кислоты и лиофилизирут. Задачей изобретения является разработка способа получения высокоактивного аллергена для выявления эхинококкоза овец и снижения себестоимости и трудоемкости технологического процесса. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в повышении выявляемости больных эхинококкозом овец. Способ получения аллергена для диагностики эхинококкоза овец осуществляют следующим образом. Собирают жидкость из эхинококковых цист печени и легких убойных овец и проводят фильтрацию этой жидкости через фильтровальную бумагу, концентрируют до содержания белка 1,0 мг в 1,0 мл фильтрата на роторном испарителе и затем,полученный концентрат замораживают при -20 С. Затем проводят дефростацию полученной смеси и автоклавируют в течение 12 часов при 1,0 атм. в 2 течение 40 минут, центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 минут, удаляют осадок, сливают а надосадочную жидкость сливают и вновь центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 минут, затем осадок удаляют, а надосадочную жидкость сливают и разводят стерильным физиологическим раствором в 10 раз, при этом конечную концентрацию азота доводят до 60.0 мги используют в качестве целевого продукта. Полученный аллерген консервируют 0.02-ным раствором пропионовой кислоты и разливают в ампулы по 1,0 мл в стерильных условиях и лиофилизируют. Стерильность препарата проверяют путем посева на питательные среды МПА, МПБ в количестве 0,10,15 мл аллергена, который вносят стерильной пипеткой. Среды помещают в термостат при 37 С на 10 суток. При этом на поверхности питательных сред должен отсутствовать рост бактерий. Безвредность препарата проверяют на белых мышах весом 18-20 г в количестве 3 особей,которым препарат вводят подкожно в область брюшка по 0,5 мл. Наблюдение осуществляют в течение 5-10 суток. При осмотре места введения видимых изменений не обнаружено. Общее физиологическое состояние мышей удовлетворительное. Активность проверяют на 6 кроликах в возрасте 3-3,5 месяцев, разделенных на две группы по 3 в каждой. Животные первой группы служат контролем, они не подвергаются сенсибилизации,им в область спины подкожно вводят физиологический раствор. Кроликам второй группы в область спины подкожно вводят аллерген в дозе по 1,0 мл, двукратно, с интервалом двое суток. Через двое суток после последнего введения аллергена проводят аллергическое исследование. Для этого аллерген вводят внутрикожно в дозе по 0.1 мл всем опытным кроликам в область поясницы. Учет аллергической реакции осуществлялся через 3 ч. после введения препарата. У животных первой группы (контроль) видимых изменений не наблюдается. У кроликов второй группы (опытной) на месте введения аллергена отмечается гиперемия и утолщение кожной складки 12,0-19,0 мм. Активность и специфичность аллергена проверяется в производственных условиях. Животным препарат вводят шприцем объемом 1,02,0 см 3 с иглой для внутрикожного введения с соблюдением правил и асептики и антисептики. Препарат вводят внутрикожно в подхвостовую складку в дозе 0,2 мл. Результаты аллергической пробы учитывают через 3 ч., при утолщении кожной складки на 17,0-22,0 мм., аллергическая реакция считается положительной. Проведенные исследования позволят выявить больных эхинококкозом овец. Таким образом, применение способа получения аллергена позволит повысить выявляемость при диагностике больных эхинококкозом овец. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения аллергена для диагностики эхинококкоза овец,включающий взятие биологического материала из эхинококкового пузыря зараженных животных,фильтрацию биологического материала через фильтровальную бумагу, его концентрирование, замораживание концентрата, дефростацию полученной смеси,центрифугирование, отбор надосадочной жидкости и консервирование целевого продукта с последующей лиофилизацией, отличающийся тем,что в качестве биологического материала используют жидкость из эхинококковых пузырей в легких овец,которую фильтруют через фильтровальную бумагу,концентрируют в роторном испарителе, полученный концентрат замораживают при температуре -20 С в течение 20 мин., после чего проводят дефростацию в течение 12 часов, затем проводят денатурацию белков в автоклаве при 1 атм. в течение 40 мин.,полученную смесь двукратно центрифугируют при 5000 об/мин, осадок удаляют, а содержание азота в надосадочной жидкости доводят до 60,0 мгпутем добавления физиологического раствора, после чего полученную смесь консервируют в 0,2 растворе пропионовой кислоты и лиофилизируют.