Способ изготовления антительного эритроцитарного диагностикума для индикации Streptococcus equi

(51) 61 10/00 (2006.01) 61 39/09 (2006.01) 12 1/20 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ мыта лошадей и может быть использовано в микробиологии и иммунологии. Технический результат, обеспечиваемый изобретением, выражается в получении эффективного антительного эритроцитарного диагностикума для индикации. Способ изготовления антительного эритроцитарного диагностикума для индикациипутем сенсибилизации формалинизированных эритроцитов барана сывороткой в разведении 150 в присутствии конъюгирующего агента при температуре 45 С в течение 60 минут с последующим отмыванием эритроцитов, в качестве конъюгирующего агента используют 0,2 раствор глутарового альдегида.(72) Ибрагимов Даулет Умирзакович Каратаев Болат Шайзадаевич Тугамбаев Тлеули Идрисович(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт(54) СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ АНТИТЕЛЬНОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ИНДИКАЦИИ 22242 Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к лабораторной диагностике мыта лошадей и может быть использовано в микробиологии и иммунологии. Известен способ получения эритроцитарного антительного диагностикума для индикации бактерий путем сенсибилизации формалинизированных эритроцитов барана сывороткой в разведении 150 в присутствии конъюгирующего агента при температуре 45 С в течение 60 минут с последующим отмыванием эритроцитов А. с. СССР 889002, А 61 К 39/00, 1981. Недостатком известного способа является низкая чувствительность и специфичность препарата. Задачей изобретения является получение высокочувствительного, специфичного и стабильного антительного эритроцитарного диагностикума для индикации. Технический результат, обеспечиваемый изобретением, выражается в получении эффективного антительного эритроцитарного диагностикума для индикации. Способ изготовления антительного эритроцитарного диагностикума для индикациипутем сенсибилизации формалинизированных эритроцитов барана сывороткой в разведении 150 в присутствии конъюгирующего агента при температуре 45 С, экспозиции в течение 60 минут с последующим отмыванием эритроцитов, в качестве конъюгирующего агента используют 0,2-ный раствор глутарового альдегида. Для изготовления мытного антигена используют штаммВ-0064 КазНИВИ БЖ-111,который хранится в коллекции лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт (КазНИВИ). Штамм характеризуется следующими признаками. Морфологические признаки. ШтаммВ-0064 КазНИВИ БЖ-111 обладает морфологическими признаками,характерными для гемолитических стрептококков. Бактерии представляют собой грамположительные кокки шаровидной или овальной формы, диаметром 0,8-1,0 мкм, расположенные в цепочку. Культуральные свойства. Рост на твердых питательных средах - мелкие, округлой формы, прозрачные, гладкие росинчатые, вязкой консистенции,сливающиеся колонии, трудно снимаемые петлей,при осмотре на свет прозрачные с голубоватым оттенком, при хранении в течение 2-5 сут колонии становятся серовато-белыми, непрозрачными, но сохраняют гладкие очертания. Рост на жидких питательных средах -помутнение среды с образованием небольшого осадка на дне пробирки,при хранении в течение 3-4 сут бульон просветляется с образованием обильного сероватого осадка. Биохимическая активность штамма. Не изменяет молоко с метиленовой синью, не свертывает молоко,не редуцирует лакмус, не ферментирует маннит,сорбит, раффинозу, арабинозу, глицерин, лактозу,2 не растет в МПБ с 40 желчи, не разжижает желатин, ферментирует глюкозу, сахарозу и мальтозу с образованием кислоты без газа,гемолизирует эритроциты лошади (-гемолиз). Генетические особенности штамма. Гемолизирует эритроциты лошади и не лизирует эритроциты золотистых хомячков и кроликов, не ферментирует лактозу и маннит, не продуцирует стрептолизин-О, вызывает гибель белых мышей в течение 7-10 сут. Продукты синтезируемые штаммом. Гемолизин,лейкоцидин, токсин общего действия, агрессин. Активность (продуктивность) штамма. Лизис эритроцитов лошади. Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. Пример 1. Для разведения глутарового альдегида применяют водный раствор 0,2-ной концентрации. Концентрации свыше 0,2 обуславливают спонтанную гемагглютинацию эритроцитов,применение же растворов меньших концентраций не обеспечивает достаточно высокой чувствительности и специфичности диагностикума. Смешивают 2 объема 10 формалинизированных эритроцитов с 1 объемом водного раствора глутарового альдегида 0,2-ной концентрации и 1 объемом противомытной сыворотки в разведении 150. Для получения стабильного и эффективного эритроцитарного диагностикума при каждом его получении необходимо применение оптимальной концентрации глутарового альдегида в виде 0,2 с соблюдением при рН 6,4 сенсибилизации постоянной температуры 45 С, времени экспозиции- 60 минут и разведением иммунной противомытной сыворотки 150, смесь встряхивают и выдерживают в водяной бане при температуре 45 С в течение 60 минут, после чего эритроциты отмывают 0,9-ным раствором хлористого натрия и ресуспендируют. Пример 2. Ставят в штатив 2 ряда по 6 серологических пробирок. В пробирки первого ряда заливают по 0,5 см 3 10 формалинизированных эритроцитов, второго ряда - по 1 см 3 дистиллированной воды. Затем во все пробирки вносят 0,2 раствор глутарового альдегида. Пробирки помещают в водяную баню при температуре 45 С на 60 минут, затем дважды отмывают 0,9 раствором хлористого натрия и ресуспендируют в этом же растворе до 2,5-ной взвеси. Полученный таким образом эритроцитарный антительный мытный диагностикум позволяет в реакции непрямой гемагглютинации выявлять до 30 тысяч микробных клеток в 1 см 3 суспензии. Применение глутарового альдегида 0,2-ной концентрации способствует получению эритроцитарного антительного мытного диагностикума,который позволяет выявлять в реакции непрямой гемагглютинации мытных стрептококков в субстратах,приготовленных из различных патологических материалов, а также в объектах внешней среды, кормах, молочных продуктах. Таким образом,предлагаемый способ изготовления эритроцитарного антительного 22242 мытного диагностикума позволяет получить стабильный, высокочувствительный и специфичный препарат для диагностики мыта лошадей. Использование предлагаемого способа изготовления антительного эритроцитарного диагностикума для индикациипозволит диагностировать мыт лошадей на ранней стадии заболевания. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ изготовления антительного эритроцитарного диагностикума для индикациипутем сенсибилизации формалинизированных эритроцитов барана сывороткой в разведении 150 в присутствии конъюгирующего агента при температуре 45 С в течение 60 минут с последующим отмыванием эритроцитов, отличающийся тем, что в качестве конъюгирующего агента используют 0,2 раствор глутарового альдегида.