Способ повышения чувствительности микобактерий туберкулёза к лекарственным препаратам

(51) 61 33/00 (2006.01) 01 33/15 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ среду Сотона, содержащую субингибирующую концентрацию (0,0125 мкг/мл) бихромата калия. Через 10 дней пересевают микробную культуру на среду,содержащую противотуберкулзные препараты(изониазид, рифампицин, этамбутол, дигидрострептомицин). Последующее определение чувствительности микобактерий к противотуберкулзным препаратам доказывает существенное (в 1,4 раза) повышение чувствительности мультирезистентных штаммов возбудителя. Внедрение способа позволит усовершенствовать и сузить круг поиска способов повышения чувствиительности возбудителя туберкулза к противотуберкулзным препаратам, что является сегодня актуальнейшей мировой проблемой. Изменения биологических свойств бактерий под воздействием тяжлых металлов, в частности хрома, среди которых наиболее важным является чувствительность к антибактериальным препаратам, открывает перспективы для изучения интимных механизмов взаимодействия бактерий с антибиотиками и дезинфектантами. Доказательство повышения чувствительности микобактерий туберкулза к противотуберкулзным препаратам под влиянием бихромата калия может служить основой для изменения стратегии,а также тактики лечения и профилактики туберкулза у жителей экологически неблагополучных по хрому регионов.(72) Ордабаев Жангали Курмангалиевич Ажмуратова Мадина Асановна(73) Республиканское государственное казенное предприятие Западно-Казахстанская государственная медицинская академия имени Марата Оспанова Министерства здравоохранения Республики Казахстан(56) Белянин И.И. Снижение устойчивости полирезистентных микобактерий к изониазиду при лечении экспериментального туберкулеза озоном и изониазидом // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 2004, 3, с.95-98.(54) СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЗА К ЛЕКАРСТВЕННЫМ ПРЕПАРАТАМ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии и может быть использовано для повышения эффективности терапии и предупреждения туберкулза. Сущность способа заключается в выделении микобактерий туберкулза из мокроты больного в течение 8-10 дней по общепринятой методике. После определения исходной лекарственной чувствительности возбудителя стандартным методом абсолютных концентраций взвесь микробов вносят в стандартную 22148 Изобретение относится к медицине, а именно,микробиологии и может быть использовано для поисков методов борьбы с лекарственной устойчивостью возбудителя туберкулза. Известен способ повышения чувствительности микобактерий туберкулза к противотуберкулзному препарату изониазиду путм внутрибрюшинного введения растворнного озона(рО 3) при экспериментальном туберкулзе у мышей,вызванного внутривенным введением клинического штамма микобактерий, устойчивого к стрептомицину, изониазиду, рифампицину и канамицину.(Белянин И.И. Снижение устойчивости полирезистентных микобактерий к изониазиду при лечении экспериментального туберкулза озоном и изониазидом, Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии - 2004 г,3. с.95-98). К пяти месяцам все подопытные животные пали,кроме леченных рО 3. Установлено, что лечение изониазидом и внутрибрюшинным введением растворнного озона (рО 3) значительно уменьшало прогрессирование процесса, а при микробиологическом исследовании выявлено существенное снижение устойчивости, т.е. повышение чувствительности микобактерий к изониазиду. Считают, что парентеральное введение рО 3 может быть рекомендовано для повышения эффективности химиотерапии в тех случаях, когда лекарственная устойчивость возбудителя неизвестна, но предстоит лечение изониазидом. Недостатком этого способа является повышение чувствительности микобактерий только к изониазиду, что не доказано в опытах, т.е. прямое действие рО 3 на микобактерии не изучалось. Кроме того, растворнный озон, являясь газом, не может по механизму и спектру действия на микобактерии сравниться с металлами, например хромом. Задача изобретения - изыскание эффективного способа преодоления устойчивости (повышения чувствительности) микобактерий туберкулза к лекарственным препаратам путм предварительного взаимодействия бактерий с бихроматом калия. Таким требованиям наиболее соответствует испытанный метод воздействия бихромата калия(содержание шестивалентного хрома-39,4) на биологические свойства бактерий, осуществленный на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии Западно-Казахстанской государственной медицинской академии имени Марата Оспанова в 1970-80-х годах. Способ повышения чувствительности микобактерий туберкулза к лекарственным препаратам включает в себя поэтапное выделение клинических штаммов микобактерий туберкулза из мокроты больного, воздействия субтоксической дозы бихромата калия и определение лекарственной чувствительности к противотуберкулзным препаратам. Способ осуществлялся следующим образом 1 ый этап заключался в бактериоскопическом исследовании мокроты больного туберкулзом лгких. При обнаружении возбудителя производили 2 посев мокроты на среду Левенштейна-Йенсена. Контролировали рост бактерий в течение 8-10 недель. На 2-ом этапе определяли лекарственную чувствительность возбудителя туберкулза стандартным методом абсолютных концентраций к туберкулостатическим препаратам 1)изониазид 0,2 1 мкг/мл 2)рифампицин 40 мкг/мл 3)этамбутол гидрохлорид 2 5 мкг/мл 4)дигидрострептомицин сульфат 5 10 мкг/мл После определения исходной лекарственной чувствительности микобактерий туберкулза приступали к 3-му этапу исследований. Для исследования возможного влияния бихромата калия на чувствительность бактерий к противотуберкулзным препаратам взвесь микробов в разведении 110 по 0,2 мл вносили в 5,0 мл стандартной среды Сотона,содержащей субингибирующую концентрацию(0,0125 мкг/мл) бихромата калия. После инкубации в течение 10-ти дней пересевали культуру микробов на среду Левенштейна-Йенсена, содержащую указанные противотуберкулзные препараты. На 4-ом этапе исследований изучали через 28 и более дней чувствительность микобактерий к препаратам и сравнивали е с исходной. Изучена сравнительная чувствительность микобактерий туберкулза к противотуберкулзным препаратам. В целом 46,1 исследуемых штаммов микобактерий туберкулза обладали исходной множественной лекарственной устойчивостью. После воздействия бихромата калия устойчивыми к противотуберкулзным препаратам оказались 32,3 штаммов, т.е. резистентность к противотуберкулзным препаратам снизилась в 1,4 раза. Пример 1. Влияние бихромата калия на чувствительность к противотуберкулзным препаратам микобактерий туберкулза. 1)Исходная чувствительность микобактерий туберкулза выявлена к изониазиду (1 мкг/мл) и этамбутолу (5,0 мкг/мл). К остальным противотуберкулзным препаратам микобактерий были устойчивы. 2)После однократного воздействия бихромата калия(0,0125 мкг/мл) культуры оказались чувствительными ко всем остальным препаратам за исключением дигидрострептомицина сульфата. Полученные данные позволяют считать, что бихромат калия повышает чувствительность(снижает устойчивость) к рифампицину при сохранении исходной чувствительности к изониазиду и этамбутолу. Пример 2. Влияние бихромата калия на чувствительность к противотуберкулзным препаратам микобактерий туберкулза. Исходный мультирезистентный штамм микобактерий туберкулза (устойчивость к изониазиду,рифампицину и стрептомицину) после контакта с бихроматом калия изменил чувствительность вплоть до 100-ной ко всем испытуемым противотуберкулзным препаратам. Следует лишь отметить появление чувствительности микобактерий только к(10 мкг/мл) дигидрострептомицина сульфата. Этот пример в сравнении с примером 1 демонстрирует индивидуальную способность бихромата калия повышать чувствительность к противотуберкулзным препаратам. Обобщая результаты исследований можно констатировать, что субтоксическая доза бихромата калия (0,0125 мкг/мл) после взаимодействия с взвесью микобактерий туберкулза существенно снижала устойчивость к противотуберкулзным препаратам, т.е. повышала чувствительность к ним. Таким образом, можно утверждать, что у бихромата калия обнаружено свойство повышать чувствительность микобактерий к противотуберкулзным препаратам. Данный эффект в количественном и качественном отношении существенно выше такового прототипа с использованием растворнного озона (рО 3), что доказано в наших опытахи не только к изониазиду, но и ко всем другим противотуберкулзным препаратам. Внедрение способа позволит- усовершенствовать поиски способов и препаратов,повышающих чувствительность возбудителя туберкулза к противотуберкулзным препаратам- изучить механизмы действия тяжлых металлов на бактериальную клетку и повысить восприимчивость микобактерий к лекарственным и дезинфицирующим средствам- изменить стратегию и тактику лечения и профилактики туберкулза у жителей экологически неблагополучных по хрому регионов. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ повышения чувствительности микобактерий туберкулеза к лекарственным препаратам,отличающийся тем, что в условияхмикобактерий выращивают в питательной среде,содержащей 0,0125 мкг/мл бихромата калия в течение 10-ти дней с последующим определением чувствительности микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам стандартным способом.