Способ получения зигот сельскохозяйственных животных на стадии двух пронуклеусов

(51) 61 19/00 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Технический результат,обеспечиваемый изобретением выражается в изыскании оптимального способа получения зигот на стадии двух пронуклеусов путем экстракорпорального оплодотворения яйцеклеток. Способ получения зигот сельскохозяйственных животных на стадии двух пронуклеусов,включающий гормональную стимуляцию животных-доноров, датированное осеменение и вымывание зигот, яйцеклетки получают из фолликулов яичника забитых животных,культивируют, оплодотворяюти через 14-16 часов получают зиготы с двумя пронуклеусами. 1 табл.(72) Батырханов Мархабат Серикбаевич Тореханов Айбын Адепханович Спанов Абзал Абушакипович Бакиров Нурбол Жумагадирович(56) Предварительный патент РК 3673, 61 19/04, 1996(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЗИГОТ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ НА СТАДИИ ДВУХ ПРОНУКЛЕУСОВ(57) Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения трансгенных животных. 22007 Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения трансгенных животных. Известен способ получения зигот животных на стадии двух пронуклеусов,включающий гормональную стимуляцию животных-доноров,датированное осеменение и вымывание зигот Предварительный патент Республики Казахстан 3673, кл. А 6119/04, 1996. Недостатком известного способа является то, что для его использования требуются материальные и временные затраты на гормональную стимуляцию животных-доноров и вымывание зигот. Задачей изобретения является получение и увеличение выхода зигот на стадии двух пронуклеусов. Технический результат,обеспечиваемый изобретением выражается в изыскании оптимального способа получения зигот на стадии двух пронуклеусов путем экстракорпорального оплодотворения яйцеклеток. Способ получения зигот сельскохозяйственных животных на стадии двух пронуклеусов,включающий гормональную стимуляцию животных-доноров, датированное осеменение и вымывание зигот, яйцеклетки получают из фолликулов яичника забитых животных,культивируют, оплодотворяюти через 14-16 часов получают зиготы с двумя пронуклеусами. Способ получения зигот животных на стадии двух пронуклеусов осуществляют следующим образом. Пример. Яичники, полученные с места убоя овцематок доставляют в лабораторию в пробирке со средой ДМЕМ с соблюдением температурного режима (37 С). В лабораторных условиях разрезают фолликулы под ламинарным боксом, извлекают яйцеклетки пипетором и переносят в чистую среду. Полученные яйцеклетки оценивают по морфологическим критериям, соответствия стадии развития правильности формы прозрачной оболочки, ее целостности, состояния цитоплазмы и прозрачности перивителлинового пространства. Яйцеклетки не достигшие стадии метафазы ,культивируют в инкубаторе при температуре 37 С с 5 СО 2 в среде - . После культивирования (созревания до стадии метафазы) ооцитов в инкубаторе в чашку с яйцеклетками переносят сперматозоиды полученные после процедуры капацитации и флотации. Капацитация в условияхпроводят следующим образом. Размороженную или свежеполученную сперму производителя в объеме 1 мл центрифугируют в течении 10 минут при 3000 об/м. в 15 мл пробирке, в среде 199, в расчете на 1 мл спермы 5 мл среды. После центрифугирования выливают надосадочную жидкость и в пробирку наливают 3 мл той же среды и ставят в инкубатор при температуре 37 С на 20 мин. После которого опять выливают надосадочную жидкость и в пробирку по стенке вливают 1 мл среды применяемая для культивирования яйцеклеток и ставят в инкубатор на 30 мин. По истечении 30 минут культивирования наиболее подвижные сперматозоиды находятся в надосадочной жидкости, которую и применяют для оплодотворения. Яйцеклетки со сперматозоидами культивируют в течении 10-12 часов, после которого ооциты переносят в чистую среду. Через 14-16 часов при исследовании под микроскопом,яйцеклетки с пронуклеусами свидетельствующие об их оплодотворении переносят в отдельную чашку со средой. При отсутствии пронуклеусов просмотр под микроскопом повторяют через каждые 1,5-2 часа. Вследствие неодинакового проникновения(оплодотворения) спермиев в яйцеклетку пронуклеусы могут появиться в разный промежуток времени. Результаты получения зигот сельскохозяйственных животных на стадии двух пронуклеусов представлены в таблице 1. Из данных таблицы 1 видно, что из 20 яичников овец, получено 300 фолликулярных ооцитов, после культивирования для оплодотворенияи морфологической оценки отобрано 276 яйцеклеток,что составило 92 . После экстракорпорального оплодотворения получено 198 морфологически полноценных зигот на стадии двух пронуклеусов или 71,76 от общего количества морфологически полноценных яйцеклеток. Применение способа получения зигот сельскохозяйственных животных на стадии двух пронуклеусов позволит получать большое количество зигот без больших материальных и временных затрат. Кроме того, при гормональной стимуляции животного-донора в среднем вымывают 5-8 зигот, а из яичников выделяется от 25 и более яйцеклеток. Таблица 1 Морфологическая оценка ооцитов и зигот на стадии двух пронуклеусов Показатели Кол-во яичников Кол-во вымытых ооцитов Оплодотворенные ооциты (на стадии двух пронуклеусов) 22007 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения зигот сельскохозяйственных животных на стадии двух пронуклеусов,включающий гормональную стимуляцию животных доноров, датированное осеменение и вымывание зигот, отличающийся тем, что яйцеклетки получают из фолликулов яичника забитых животных, культивируют, оплодотворяюти через 14-16 часов получают зиготы с двумя пронуклеусами.