Способ определения стадий дифференцировки буккальных эпителиоцитов в мазке слизистой оболочки полости рта

(51) 61 10/00 (2006.01) 01 33/48 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Задача - создание способа повышения эффективности определения 3-ей, 4-ой и 5-ой стадий дифференцировки буккальных эпителиоцитов полуавтоматизированным методом. Технический результат - повышение точности определения 3-ей, 4-ой и 5-ой стадии дифференцировки буккальных эпителиоцитов по оптической плотности интерфазного ядра. Новизна способа определения буккальных стадий дифференцировки в мазке слизистой оболочки полости рта, заключается в том, что с целью повышения качества диагностики, определяют оптическую плотность интерфазных ядер в условных единицах, и при значениях ниже 0,060 клетки относят к 3-ей стадии, от 0,061 до 0,120 к 4 ой стадии, от 0,121 и выше к 5-ой стадии дифференцировки. Достоверность полуавтоматизированного способа дефиниции буккальных эпителиоцитов 3-ей, 4 ой и 5-ой стадий дифференцировки в мазке слизистой оболочки полости рта с определением оптической плотности интерфазных ядер по сравнению с визуальной оценкой выполняется с большой точностью (ошибка измерения не более 3-5).(72) Куркин Александр Валерьянович Рыбалкина Дина Хабибуллаевна(73) Республиканское государственное казенное предприятие Карагандинская государственная меди-цинская академия Министерства здравоохранения Республики Казахстан(56) Асамбаева Д.Э. Цитологическая характеристика суточного ритма слизистой оболочки полости рта в норме и при гастроэзофагеальной рефлюксной болезни. Автореф. дис. канд. мед. наук.- Алматы,с.10-11(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТАДИЙ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ БУККАЛЬНЫХ ЭПИТЕЛИОЦИТОВ В МАЗКЕ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ РТА(57) Область применения предлагаемый способ может применяться для оценки цитологического статуса слизистой оболочки рта человека в научноисследовательских и практических учреждениях Республики Казахстан,проводящих оценку действия факторов окружающей среды и с целью диагностики при патологии полости рта и соматических заболеваниях. 21838 Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для определения стадии дифференцировки буккальных эпителиоцитов в мазках при диагностике состояния слизистой оболочки полости рта в норме и патологии в эксфолиативной цитологии. Известен способ определения дифференцировки буккальных эпителиоцитов в мазках со слизистой оболочки ротовой полости путм вычисления отношения площади ядра к площади цитоплазмы Асамбаева Д.Э. Цитологическая характеристика суточного ритма слизистой оболочки полости рта в норме и при гастроэзофагеальной рефлюксной болезни. Автореф. дис. канд. мед. наук. - Алматы. с.10-11. Способ позволяет идентифицировать 1-ю,2-ю и 5-ю степень дифференцировки. В то же время в мазке со слизистой оболочки щеки в норме и патологии содержатся эпителиоциты 1-ой, 2-ой, 3 ей, 4-ой, 5-ой и 6-ой стадии дифференцировки. Клетки 1-ой и 2-ой стадии встречаются в патологии,имеют ядерно-цитоплазматическое отношение более 0,25 и легко дифференцируются. При ядерно-цитоплазматическом отношении в среднем от 0,012 и ниже определяются эпителиоциты 5-ой стадии. Клетки 6-ой стадии лишены ядер и регистрируются автоматически. Эпителиоциты 3-ей и 4-ой стадии дифференцировки находятся в интервале ЯЦО от 0,03 до 0,043 и не дифференцируются. Задача - создание способа повышения эффективности определения 3-ей, 4-ой и 5-ой стадий дифференцировки буккальных эпителиоцитов полуавтоматизированным методом. Технический результат - повышение точности определения 3-ей, 4-ой и 5-ой стадии дифференцировки буккальных эпителиоцитов по оптической плотности интерфазного ядра. Новизна заключается в том, что в мазках слизистой щеки морфоденситометрически определяют оптическую плотность интерфазных ядер буккальных эпителиоцитов и, в зависимости от полученных показателей в условных единицах,вычисляют процентное содержание эпителиоцитов той или иной стадии дифференцировки. Способ осуществляется следующим образом. Мазки со слизистой оболочки щеки после фиксации окрашиваются метиленовым синим по Май-Грюнвальду (15 мин.) и азур-эозином по методу Романовскому-Гимза в течение 30 мин. В клетках морфоденситометрически, при помощи программы 1.2, определяют оптическую плотность интерфазных ядер. Оптическая плотность рассчитывается в условных единицах с учетом фона по выделенной области препарата, свободного от объектов, как средний десятичный логарифм отношения яркости фона к яркости точки объекта. Оптическая плотность интерфазных ядер складывается из наличия в них окрашиваемого хроматина, ядрышка и ядерно-белкового матрикса. В химическом отношении фибриллы хроматина представляют сложные комплексы дезоксирибонуклеопротеидов, в состав которых входят ДНК,гистоновые и негистоновые белки, а также РНК. 2 Ядрышко, которое интенсивно окрашивается основными красителями представлено рибонуклеопротеидами, а ядерно-белковый матрикс - негистоновыми белками. По предлагаемому способу проведено определение стадии дифференцировки эпителиоцитов слизистой оболочки щеки у 30 подростков мужского пола. В результате чего получены следующие данные. В 4,170,97 оптическая плотность интерфазных ядер имела значения ниже 0,060. Эти эпителиоциты к 3-ей стадии дифференцировки. К 4 ой стадии отнесены эпителиоциты, оптическая плотность интерфазных ядер которых находилась в пределах от 0,061 до 0,120. Они составили 22,611,54. Клетки 5-ой стадии составили 68,122,38, в них оптическая плотность интерфазных ядер была выше 0,121. Параллельно осуществлялась визуальная оценка стадии дифференцировки эпителиоцитов, согласно имеющимся в литературе рекомендациям. В цитограмме клетки 3 ей стадии составили -2,00,48, 4-ой - 20,21,48,5-ой стадии - 72,72,96, роговые чешуйки 5,10,47. Достоверность полуавтоматизированного способа дефиниции буккальных эпителиоцитов 3-ей, 4 ой и 5-ой стадий дифференцировки в мазке слизистой оболочки полости рта с определением оптической плотности интерфазных ядер выполняется с ошибкой в 3,05 случаев по сравнению с визуальной диагностикой. Пример 1. Мальчик В., 12 лет. Гигиенический индекс оценки состояния полости рта, равный 0, что соответствует пределам нормы. Относительно здоров. В цитограмме мазка с максилярной области слизистой щеки нашим способом выявлены эпителиоциты 3-ей стадии (оптическая плотность ниже 0,060) в 2,00,38, 4-ой стадии (оптическая плотность от 0,061 до 0,120) - 25,11,57 и 5-ой стадии (оптическая плотность выше 0,121) 70,31,25. Роговые чешуйки в цитограмме составили 2,60,11. Диагноз состояние слизистой оболочки ротовой полости в пределах нормы. Пример 2. Девочка А., 6 лет 7 мес. Гигиенический индекс оценки состояния полости рта, равный 0, что соответствует пределам нормы. У ребнка диагностирована ветряная оспа. Мазок взят в период высыпаний. В цитограмме мазка щеки нашим способом определены эпителиоциты 3-ей стадии (оптическая плотность ниже 0,060) 17,51,09 4-ой (оптическая плотность от 0,061 до 0,120) - 31,62,05 клетки 5-ой стадии (оптическая плотность выше 0,121) - 45,92,98. Роговые чешуйки в цитограмме составили - 2,30,19, клетки 1-ой и 2-ой стадии - 2,70,29 Диагноз в слизистой оболочке полости рта преобладают процессы пролиферации с омоложением клеточного состава. Пример 3. Мальчик С., 16 лет. Гигиенический индекс оценки состояния полости рта, равный 0, что соответствует пределам нормы. Из вредных привычек - курение с 15 лет. В цитограмме мазка щеки нашим способом определены эпителиоциты 3 ей стадии (оптическая плотность ниже 0,060)1,60,48 4-ой (оптическая плотность от 0,061 до 21838 0,120)-17,11,34 5-ой стадии (оптическая плотность выше 0,121) - 72,22,99, Роговые чешуйки в цитограмме составили - 9,11,38. Диагноз в слизистой оболочке полости рта выражен процесс кератинизации. Проанализированы результаты определения стадий дифференцировки по предлагаемому способу в интервале ЯЦО от 0,02 до 0,08. Данные приведены на графике. Видно, что при ЯЦО от 0,02 до 0,08 встречаются клетки всех трх стадий дифференцировки. При этом клетки 3-ей стадии имеют средние значения оптической плотности ядра от 0,020 до 0,036 4-ой стадии дифференцировки колеблется от 0,080 до 0,117 и клетки 5-ой стадии дифференцировки отличаются оптической плотностью в пределах от 0,173 до 0,199. Выводы предлагаемый способ может применяться для оценки цитологического статуса слизистой оболочки рта человека в научноисследовательских и практических учреждениях Республики Казахстан,проводящих оценку действия факторов окружающей среды и с целью диагностики при патологии полости рта и соматических заболеваниях. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ определения стадий дифференцировки буккальных эпителиоцитов в мазке слизистой оболочки полости рта, включающий определение морфоденситометрических параметров клеток,отличающийся тем, что определяют оптическую плотность интерфазных ядер в условных единицах и при значениях ниже 0,060 клетки относят к 3-ей стадии, от 0,061 до 0,120 к 4-ой стадии, от 0,121 и выше к 5-ой стадии дифференцировки.