Способ диагностики аспиринорезистентности у больных ишемической болезнью сердца казахской популяции

МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНЬЮ СЕРДЦА КАЗАХСКОЙ ПОПУЛЯЦИИ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии и может быть использовано для диагностики аспиринорезистентности (АР) у больных ишемической болезнью сердца (ИБС) казахской популяции. У больных ишемической болезнью сердца определяют структуры полиморфизмов генов компонентов сосудисто тромбоцитарного гемостаза ( 33 Ро, 145 , С 786 Т, Н 1/Н 2,С 807 Т) и при наличии мутантной аллели 33,219,5 р 0,001 мутантной аллели 145,226,4 р 0,001 мутантной аллели С 786 Т - 85 диагностируют аспиринорезистентность. Способ позволяет диагностировать аспиринорезистентность у больных ИБС, что позволит снизить летальность от атеротромбоза,оптимизировать антиагрегационную терапию.(72) Каражанова Людмила Кусаиновна Есимбекова Эльмира Ирановна Жукушева Шолпан Турганбаевна Капакова Миргуль Амангалиевна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Государственный медицинский университет города Семей Министерства здравоохранения и социального развития Республики Казахстан(56) Каражанова Л.К. и др. Генетические тромбофилии и аспиринорезистентность при ишемической болезни сердца // Российский кардиологический журнал. 1-й международный образовательный форум Российские дни сердца. Материалы форума. Москва. 4-6 апреля 2013, с.63(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АСПИРИНОРЕЗИСТЕНТНОСТИ У БОЛЬНЫХ Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии и может быть использовано для диагностики аспиринорезистентности (АР) у больных ишемической болезнью сердца (ИБС) казахской популяции. Наиболее часто в основе сердечно-сосудистых осложнений лежит атеротромбоз. Атеротромбоз процесс тромбообразования на атеросклеротически измененных сосудах, который ведет к таким осложнениям, как инфаркт миокарда и инсульт. Клинические исследования показали эффективность применения ацетилсалициловой кислоты (АСК) как при первичной, так и при вторичной профилактике сердечно-сосудистых осложнений. Таким образом, целесообразна разработка унифицированной методики для оценки функции тромбоцитов, определение показаний для ее использования, разработка оптимальных критериев резистентности. При назначении антиагрегантной терапии важен индивидуализированный подход с учетом особенностей каждого пациента, который заключается в подборе препаратов различного механизма действия в различных дозировках. Известен способ определения аспиринорезистентности посредством агрегометрии тромбоцитов, при котором АР выявляют через 2-3 дня и через 5 дней после начала приема аспирина. В случае АР пациенту назначают другой препарат. Диагностическая ценность известного способа ограничена, так как метод не позволяет диагностировать АР до начала лечения препаратом(Момот А.П. Патология гемостаза. Принципы и алгоритмы клинико - лабораторной диагностики. Спб. ФормаТ, 2006. - .95). Задачей изобретения является разработка способа, позволяющего достоверно диагностировать аспиринорезистентность у больных ИБС до начала применения антиагрегационных препаратов. Технический результат значительно повышается точность диагностики аспиринорезистентности у больных ИБС на генетическом уровне, что позволит снизить летальность от атеротромбоза, оптимизировать антиагрегационную терапию. Указанный технический результат достигается тем, что определяют структуры полиморфизмов генов компонентов сосудисто - тромбоцитарного гемостаза ( 33 Ро, 45 , С 786 Т, Н 1/Н 2,С 807 Т) у пациентов с ишемической болезнью сердца казахской национальности и при наличии мутантной аллели 33 Ро, 219,5 р 0,001 мутантной аллели 145, 2 26,4 р 0,001 мутантной аллели С 786 Т - 85 диагностируют аспиринорезистентность. Способ осуществляется следующим образом В исследование включены больные с ишемической болезнью сердца,госпитализированных в кардиологические отделения больницы скорой медицинской помощи г.Семей. После получения информированного согласия производился забор образцов биологического материала (кровь). Разработана карта участника 2 исследования, включающая паспортные данные,вопросы факторов риска, наследственный анализ и др. Материал исследования ДНК,экстрагированная из цельной крови. В работе были использованы выделение ДНК, определение ДНК,электрофорез в 1-1,5 агорозном геле для качественного анализа ДНК, ПЦР, анализ отсеквенированных участков. Сформирована выборка из 100 больных ИБС из которых у 40 проводилось исследования(33 мужчин, 7 женщин), средний возраст -57,61,8 лет, из них после реваскуляризации - 11 больных,семейный анамнез у 38 больных. Контрольную группу составили практически 100 здоровые лица(доноры), сопоставимые по полу и по возрасту с группой исследования. Клинической особенностью всех обследованных больных ИБС было предшествующее первичному обследованию длительное (не менее 6 месяцев подряд) постоянное применение в качестве антиагрегантного препарата ацетилсалициловой кислоты (аспирина). Нами проводилось исследование частоты распределения генотипов полиморфизмов 33 Ро гена 3, 145 гена 1, С 786 Т гена 3, Н 1/Н 2 гена 212 и С 807 Т ген 2 у больных ИБС с аспиринорезистентностью. В обследованной группе больных с гомозиготной мутацией частота встречаемости в генах 3(2) - 18. Гетерозиготный вариант генотипа полиморфизма е 33 Ро гена 3 встречался с частотой 32,СР 1 ВА - 47, 3 - 42, Н 1/Н 2 - 34, С 807 Т 30 (таблица 2). Нормальный гомозиготный вариант полиморфизма 33 Ро гена 3 встречался с частотой 54,(145 ) - 36, 3(2) - 52. Частота гомозиготного мутантного генотипов 1 (145 ) в контрольной группе составила 2, 3 (С 786 Т) - 16, С 807 Т (2)-8. Мутантных вариантов полиморфизмов гена 3 (33 Ро) и Н 1/Н 2 гена 212 - не встречалось. Гетерозиготный вариант полиморфизма 33 Ро гена 3 составил 23, 1 (145 ) 29, 3 (С 786 Т) - 51, Н 1/Н 2 (212) - 58,С 807 Т (2) - 12. Нормальный гомозиготный вариант встречался с частотой 77 для полиморфизма 3 (33 Ро),1 (145 ) - 69, 3 (С 786 Т) - 33,Н 1/Н 2 (212) - 42, С 807 Т (2) - 60. На основании полученных результатов анализа клинико-иммунологических известных генетических маркеров (точечных нуклеотидных полиморфизмов) предрасположенности к атеротромбозу, ишемической болезни сердца(инфаркт миокарда, инсульт) предположение о более выраженной резистентности к действию(47 гетерозиготы и 17 мутантных гомозигот),2 26,4 р 0,001 мутантной аллели С 786 Т - 85 среди 100 больных ИБС (42 гетерозиготы и 43 мутантных гомозигот), 219,9 р 0,001. Особенно,по наличию мутантной аллели Н 1/Н 2 различия между группами больных ИБС и здоровыми лицами оказались высоко значимыми (230,3, р 0,05). Сформирована значимая аналитическая панель по результатам анализа частоты генотипов и аллелей полиморфизмов 33 Ро в гене 3,145 в гене 1, С 786 Т в гене 3,Н 1/Н 2 в гене 212, С 807 Т в гене 2 в исследуемых группах больных и контроля в зависимости от моделей. Распределение генотипов полиморфизма 33 Ро в гене 3 соответствовало равновесию Харди-Вайнберга (р 0,018 и р 0,029 в группе больных и контроля, соответственно). Частота 33 Ро в гене 3 нормальная 33 Ро в гене 3 Клинический пример 2 Больной Я.Ф.,63 лет,пролечен в кардиологическом отделении Больницы скорой медицинской помощи г. Семей в июле 2012 г Клинический диагноз Ишемическая болезнь сердца. Нестабильная стенокардия В класса высокого риска. Постинфарктный кардиосклероз(2011). ХСН ФК . Артериальная гипертония ,риск . Страдает ишемической болезнью сердца в течение 2 лет. ЧСС - 88 уд. в мин.,АД - 140/80 мм рт. ст. На ЭКГ - рубцовые поля переднебоковой, задней стенке левого желудочка. Ухудшение на фоне антиагрегантной терапии(много лет принимает Т. Клопидогрель 75 мг). Таким образом, предлагаемый способ позволяет диагностировать аспиринорезистентность у больных мутантной аллели С в группе больных было выше в сравнении с контрольной группой (30 и 12 соответственно). Выявленные низкий процент ассоциативных связей с риском развития ИБС генотипов данного полиморфизма в независимости от модели анализа, что возможно связано с малым количеством участников исследования. Клинический пример 1 Больной Т.А.,67 лет,пролечен в кардиологическом отделении Больницы скорой медицинской помощи г. Семей в августе 2012 г. Клинический диагноз Ишемическая болезнь сердца. Двухсосудистое поражение коронарного русла. Стенокардия напряжения ХСН ФК . Состояние после стентирования (2008). АГст. Риск . Состояние после ОНМК (2004). СДтип,инсулинопотребная форма. Страдает ишемической болезнью сердца в течение 10 лет. ЧСС - 80 уд. в мин., АД - 140/80 мм рт. ст. На ЭКГ - нарушение внутрижелудочковой проводимости на нижней стенке. Ухудшение на фоне антиагрегантной терапии (много лет принимает Т. Плавикс 75 мг). ИБС на генетическом уровне, что позволит снизить летальность от атеротромбоза, оптимизировать антиагрегационную терапию. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ диагностики аспиринорезистентности у больных ишемической болезнью сердца казахской популяции,включающий клиникогемостазиологические исследования и определение генетических маркеров отличающийся тем, что определяют в сыворотке периферической крови структуры полиморфизмов генов компонентов сосудисто-тромбоцитарного гемостаза 33,145 , 786, 1/2, 807 и при их наличии диагностируют аспиринорезистентность.