Способ первичного отбора противоопухолевых препаратов

НАЦИОНАЛЬНОЕ ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО ПРИ КАБИНЕТЕ МИНИСТРОВКИЙ ИНСТИТУТ ОНКОЛОГИИ Н РЗДНОЛОГИН(56) Затула Д.Г. НсполЬзованиекультуры Вас. шеваегйит Н. для отбора противоопухолевых веществ. В кн. Микробиологические аспекты изучения злокачественных опухолей. Киев, Наукова думна,.1976 с. 52 т 18 О.шенне активности на перевиваемых(54) сносов первичного ОТБОРА пестиВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ(57) Изобретение относится к онкол 0 ГИН ЧЭСТНОСТИ К Способан ПРВНЧШ НОГО ОТбОр 3 ПРОТНВПОПУХОПЕЬШ препаратов,-н может Найти применение в Химиотерапии ЗЛОКЗЧВСТЕННЫХ НОВОобраэований. Цель изобретения ПОЗЫопухолях. для этого на микробной модели раковых клеток в качестве тест модели используется гриб ЦБЗГНШ Ьц 1 Ь 13 епцт наг. Ь 1 а 5 Е 1 со 1 а.Изобретение относится к онкологии н может найти применение в химиотерапии злокачественных новообразований. .Цель изобретения 1 повышение эффективности поиска противоопухолевых препаратов.Поставленная цель достигается тем,что в известном способе первичного отбора противоопухолевых препаратов на микробной модели раковых клеток согласно изобретению в качестветестмодели используется триб Рива 1 иш Ьи 1 Ь 13 епош наг. Ь 1 азс 1 со 1 а.Повышение точности появления противоопухолевой активности препаратов,достигаемое.предлагаемым способом, объясняется тем, что используется многоклеточный гриб (эукариот), ко торый на второй неделе роста насредеРидер с ФРУктозой формируетпеподобные образования. Эти образования легко выявляются невооруженным глазом по мозговидной складчатости, поверхностному расположенню обусловленномутенденцией клеток к многослойному росту, и размерам (пос перечник 1-10 мм, высота 15 мм). Клетки опухопеподобных образованийпроявляют сходство с клетками опухолей высших организмов по большему числЛУ признаков, ЧЕМ ВС РВНЕЕ ИЗВЕСТНЫЕНа второй неделе роста Риз. Ьи 1 Ь 1 депцт наг. Ь 1 а 1 со 1 а представляет собой.гетерогенную систему, в ко- торойнаряду с нормальными клеткамитестмикробы. Для них характерны наприсутствуют трансформированные,автономно делящиеся и формирующие опухолеподобиые образования. Эта осот бенность гриба, используемого в лагаеыом способе. создает возможность для выявления соединений, не действующих на нормальные клетки и иабирательио подавляющих клетки опуи-холеподобных образований с сочетан ными нарушениями дифференциации и клеточного деления.Клетки опухолеподобных образован ний гриба избирательно чувствительны к разным классам известных противоопухолевых препаратов-антибиотиков(сарколизин, хлорбутнн, циклофосфан, дивна, тиофосфаМид,Миелосан, фторура ЦНП, МЕТЗТРЗКСЗТ), ПРПЭРЗТОВ растительного происхождении (бефунгин вннбластнн, вннкристин.Кроме названных препаратов, выяв пено еще 121 соединение, избирательноподавляющее рост опухолепопобных об разований Риз. Ьц 1 Ь 13 епищ ваг. Ь 1 ав Ь 1 со 1 а. Всеотобраиные препараты(как с известной противоопухолевой активностью, так и впервые иссле дуемые)нспытаны на способность тормозить рост опухолей животных (карт цинома 755, саркома 180, саркома 37,карцинома Льиса карцинома Эрлиха). Рост-опухолей животных тормозили 123(90,4) из 136 отобранных препаратов. Кроме повышения до 90,42 точноетн, предлагаемый способ является ресурсосберегающим. В отличие от рад-нее известных микробных объектов, ис пользуемых для первичного отбора пррн тивоопунопевых препаратов, Роз. Ьц 1 весит наг. Ь 1 а 51 со 1 а растет на среде, не содержащей компонентов животного происхождения (перевар Хоттннт гера, гидролизат мяса, пептон).Способ иллюстрируется следующими примерами.П р и м е р 1. Готовят питательную среду Рндер, состоящую из спе дующих компонентов, г/лСульфат аммония 3,0 Фосфат калия однозамещенный 1,0 фосфат калия дву- замещенные Сульфат магния 0 Натрий хлористый д Фруктоза 1Среду стерилизуют в автоклаве сахар отдельно текучим паром в виде дО 2 ного раствора. Стерильную расплавленную среду после добавления сахара разливают по 5 мл в стерильные пробирки и расставляют в штативы по 10 в ряду.В первую пробирку добавляют 12,5 мг сарколиаина в вндеводного раствора,содержащего 25 мг/мл. После тщательного перемешивания содержимое первой пробирки переносят во вторую, затем 5 мл смеси переносят в третью пробирку и так далее до 10-й пробирки. Получают ряд разведении 250 О 1250 625, 312, 156, 78, 39, 19,9, 4 мкгКмл. Пробирку со средой, содержащей сарколизин, а также без него (контроль), СКЗШИВЗЮТ И ПОСЛЕ ЗЗТВЕрДБЭННЯ засе вают конидиями изагйпт Ьо 1 Ь 1 депцт наг. Ь 1 а 51 со 1 а, выращенного на среде Чапека. Посевы ставят в термостатпри 28-30 . Видимый рост гриба появт ляется черезсутки на вторые пятые сутки он усиливается. После 5-7 суток н контрольных пробирках появляются первые опухолеподобные образования, их число на второйттретьей неделе увеличивается и достигает 12 15 на косяк. В пробирках, содержащих сарколизин, первичный рост гриба по является во всех пробирная, а опухолее подобные образования только в деся той. Следовательно, сарколизин избирательноподавляетростопухолеподобтВ первую пробирку добавляют 12,5 мг антибиотика дактиномицина в виде ра створа в этиловом спирте, содержащего 25 мгХмл. Как В примере 1, готовят десять разведении в стерильной расплавленной среде. Пробирки со средой,содержащей дактиномицин, а также без него (контроль), скашивают и послеЗЗТЕЕРДЕВЭНИЯ засевают КОНИДНЯМИ РЦватйит Ъц 1 Ь 1 депнт чаг. Ь 1 а 5 с 1 со 1 а выращенного на среде Чапека Посевы ставят В термостат при 28-3000. Видимый рост гриба появляется как в контрольных, так и в опытных пробиркахкн он усиливается. На пятые-седьмые сутки а контрольных пробирнахНачинают формироваться опунолеполобные образования, на второйтретьеи нелеле их число увеличивается до 14-15 на косяк. В пробирках, содержащих дактиномнцмн, рост гриба в первыепятые сутки не отличается от контроля, но в дальнейшем опухолеподоб ные образования появляются только в десятой пробирке. Следовательно,дактиномицин избирательно подавляет. рост опухолеподобных образований. Минимальная подавляющая концентрация составляет 9 мкг/мл.П р и м е р 3. Питательная среда состава, указанного в примере 1, разливается в пробирки по 5 мл н рас ставляется в штативы по ПО в ряду.В первую пробирку добавляют 12,5 мг винбластина (противоопухолевого препарата растительного происхождения) в виде водного раствора, содержашего 25 мг/мл. Как в примере 1, готовят десять разведений винбластина в стерильной расплавленной среде. Пробирки со средой, содержащей винбластин а также без него (контроль), скашивают и после затвердевания засевают конидиями Риаг 1 цт Ьи 1 Ь 1 депиш наг.Ь 1 авЕ 1 со 1 а выращенного на среде Чапека. Посевы ставят в термостат при 28-30 С. Характер роста гриба в опытах и контрольных пробирках не отличается от приведенного в примерахЕ н 2. Вннбластннтакже избирательно подавляет рост опунолеподобньш образований, но менее активен по сравнению с сарколизнном И дактилоОпухолеподобные образования появляются на второй неделе роста в 8-й, 9-й и 10-й пробирках, содержащих соответственно 99 иет 39-мкг/мл, Ф о р Н у л а н 3 об р е т ен Н я Бпособ первичного отбора противоопухолевых препаратов с помощью микробной модели раковых клеток, о тЛ Н Ч 8 Ю Щ И Й Ъ Я тем, что, с-целью повьшения эффективности поиска противоопунолевых препаратов, в ка честве модели используют опухолепо добные образования гриба Риваг 1 ишЬн 1 Ь 13 епит чаг. Ь 1 азс 1 со 1 ас куль тивиргванием их на среде Ридер при 28-30 С и рВ 5-6.