Применение иммуномодулирующего средства КФ-FI для коррекции гипотиреоза

(51) 61 36/00 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении биологически активного продукта, обладающего способностью к коррекции гипотиреоза. Средство для коррекции гипотиреоза,достигается тем, что получение биологического продукта, обладающего способностью к коррекции гипотиреоза, проводят путем культивирования гриба штамма- 166 на жидкой модифицированной среде Чапека, дополненной картофельным отваром,мицелий отделяют фильтрацией, фильтрат концентрируют в два раза под вакуумом,проводят дополнительную мембранную фильтрацию, полученный фильтрат концентрируют в пять раз и выдерживают на холоду до отделения высокополимерных фракции в виде осадка, который отделяют повторной фильтрацией,прозрачный очищенный раствор культурального фильтрата высушивают досуха под вакуумом,полученный порошок используют в качестве биологически активного продукта, обладающего способностью к коррекции гипотиреоза.(72) Сапко Ольга Александровна Михалев Александр Николаевич Утарбаева Айжан Шарельевна Кунаева Рауза Минлиахмедовна Колбай Ибрагим Сулейменулы Тобагабыл Ляззат Толепбергеновна Байдалинов Арслан Исаханович Джакибаева Гульнар Тураровна(73) Дочернее государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Институт молекулярной биологии и биохимии им. М.А. Айтхожина Республиканского государственного предприятия на праве хозяйственного ведения Центр биологических исследований Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) СРЕДСТВО ДЛЯ КОРРЕКЦИИ ГИПОТИРЕОЗА(57) Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в качестве средства для коррекции гипотиреоза. 22258 Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в качестве средства для коррекции гипотиреоза. Известен способ коррекции гипотиреоза путем введения фрагмента криоконсервированного фетального тканевого препарата ксеногенной ткани тимуса (патент Украины 31046 , кл. А 61 К 35/48,2007). Недостатком данного способа является то, что метод требует применения тканевого препарата,получаемого из специфической ткани специализированного органа животных - тимуса методом криогенной обработки, что обуславливает высокую стоимость препарата,сложность технологии получения препарата, его плохую стандартизуемость. Задачей изобретения является получение эффективного и дешевого средства для коррекции гипотиреоза из гриба рода . Поставленная задача, достигается тем, что получение биологического продукта, обладающего способностью к коррекции гипотиреоза, проводят путем культивирования гриба штамма- 166 на жидкой модифицированной среде Чапека, дополненной картофельным отваром,мицелий отделяют фильтрацией,фильтрат концентрируют в два раза под вакуумом, проводят дополнительную мембранную фильтрацию,полученный фильтрат концентрируют в пять раз и выдерживают на холоду до отделения высокополимерных фракции в виде осадка, который отделяют повторной фильтрацией, прозрачный очищенный раствор культурального фильтрата высушивают досуха под вакуумом, полученный порошок используют в качестве биологически активного продукта, обладающего способностью к коррекции гипотиреоза. Штамм гриба . - 166 используют для испытания средств защиты растений, резистентности различных сортов картофеля к фузариозам и др. Штамм - 166 был получен из Республиканской коллекции микроорганизмов РК. Пример 1. Культуру штамма гриба . 166,культивировали на жидкой модифицированной среде Чапека 2, дополненной картофельным отваром из расчета 1 часть отвара на 4 части среды, в конической плоскодонной колбе объемом 500 см 3 с содержанием питательной среды около 150 см 3 в термостате при температуре 25-27 С без перемешивания в течение 17-18 дней. Пример 2. Среду культивирования гриба отделяли от мицелия с помощью фильтрации через бумажный складчатый фильтр. Культуральный фильтрат концентрировали в роторном испарителе при температуре 38-40 С при разряжении 8 кПа до половины первоначального объема. Полученный концентрат фильтровали с помощью вакуумфильтрационной установки через мембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм. Фильтрат концентрировали в роторном испарителе при температуре 38-40 С при разряжении 8 кПа до 1/5 объема. Концентрированный фильтрат выдерживали в холодильнике при температуре 4 С в 2 течение 48 часов. Выпавший осадок отделяли с помощью фильтрации через бумажный складчатый фильтр. Получали прозрачный раствор, который высушивали досуха под вакуумом. Получали препарат КФ-1. Для препарата КФбыло проведено исследование его влияния на уровень тиреоидных гормонов (гормонов щитовидной железы) на модели белых крыс. Коррекция уровня тиреоидных гормонов представляет собой важный метод лечения гипотиреоза. Гипотиреоз - состояние организма, обусловленное длительным, стойким недостатком гормонов щитовидной железы. Пример 3. Для испытания влияния КФ- на уровень тиреоидных гормонов было сформировано 3 группы беспородных белых крыс обоего пола средним весом 95 грамм. Животные,содержащиеся в одинаковых условиях, были получены одновременно из питомника. Во время всего эксперимента крысы находились на одинаковом рационе питания. Введение вещества осуществляли в одно и то же время суток (утром). Пример 4. 712,5 мг препарата растворили в 100 см 3 физиологического раствора. Получили раствор для исследования, 1 см 3 которого содержал дозу препарата равную 1/10 50 для белых крыс, а 0,5 см 3 - дозу препарата равную 1/20 50 для белых крыс. Доза 50 для препарата была определена заранее на предварительном этапе и составила для белых крыс 750 мг на килограмм живого веса. Пример 5. Животным первой группы в количестве 12 белых крыс (6 самок и 6 самцов) ежедневно вводили внутрибрюшинно по 1 см 3 раствора препарата КФ- из примера 4 (1/10 50) в течение 10 дней. Через 24 часа после последнего введения вещества 6 крыс (3 самки и 3 самца) были подвергнуты убою путем декапитации. Кровь животных собирали в центрифужные пробирки, центрифугировали 10 минут при 1500 об/мин. Полученную сыворотку переносили в микропробирки и далее определяли в них содержание тиреоидных гормонов иммуноферментным методом. Оставшихся животных забивали на 21-е сутки после последнего введения вещества и проводили аналогичное, описанному выше, исследование крови. Результаты экспериментов обработаны и сравнены между исследуемыми группами статистически с использованием-критерия Стьюдента. Пример 6. Животным второй группы в количестве 12 белых крыс (6 самок и 6 самцов) ежедневно вводили внутрибрюшинно по 0,5 см 3 раствора препарата КФ- из примера 4 (1/20 50) в течение 10 дней. Через 24 часа после последнего введения вещества 6 крыс (3 самки и 3 самца) были подвергнуты убою путем декапитации. Кровь животных собирали в центрифужные пробирки, центрифугировали 10 минут при 1500 22258 об/мин. Полученную сыворотку переносили в микропробирки и далее определяли в них содержание тиреоидных гормонов иммуноферментным методом. Оставшихся животных забивали на 21-е сутки после последнего введения вещества и проводили аналогичное, описанному выше, исследование крови. Результаты экспериментов обработаны и сравнены между исследуемыми группами статистически с использованием-критерия Стьюдента. Пример 7. Животным третьей контрольной группы в количестве 12 белых крыс (6 самок и 6 самцов) ежедневно вводили внутрибрюшинно по 0,5 см 3 физиологического раствора в течение 10 дней. Через 24 часа после последнего введения физиологического раствора все животные были подвергнуты убою путем декапитации. Кровь животных собирали в центрифужные пробирки, центрифугировали 10 минут при 1500 об/мин. Полученную сыворотку переносили в микропробирки и далее определяли в них содержание тиреоидных гормонов иммуноферментным методом. Результаты исследования уровня тиреоидных гормонов в крови белых крыс при многократном применении препарата КФ- в различных дозах представлены в таблице 1. Как видно из таблицы 1 иммуноферментное тестирование концентраций тиреоидных гормонов в сыворотке крови белых крыс через 24 часа после последнего введения препарата КФ-1 в обеих испытуемых дозах показало увеличение концентрации тироксина. Иммуноферментное тестирование концентраций тиреоидных гормонов в сыворотке крови белых крыс через 20 дней после последнего введения препарата КФпоказало снижение его концентрации до уровня, наблюдаемого в контрольной группе животных. Концентрация трийодтиронина и тиреотропного гормона гипофиза во все сроки исследования изменениям не подвергалась. Таким образом,препарат КФпри многократном применении вызывает индукцию выработки тироксина, что может быть применимо для коррекции гипотериоза. Таблица 1 Влияние многократного применения препарата КФ- в различных дозах на уровень тиреоидных гормонов в крови белых крыс Средство для коррекции гипотиреоза, включающее введение биопрепарата, отличающееся тем,что получение биологического продукта,обладающего способностью к коррекции гипотиреоза, проводят путем культивирования гриба штамма- 166 на жидкой модифицированной среде Чапека, дополненной картофельным отваром,мицелий отделяют фильтрацией, фильтрат концентрируют в два раза Концентрация тиреотропного гормона гипофиза, мМе/л через 24 на 21 сутки часа 0,30,06 0,30,03 0,30,02 0,30,01 0,20,03 под вакуумом,проводят дополнительную мембранную фильтрацию, полученный фильтрат концентрируют в пять раз и выдерживают на холоду до отделения высокополимерных фракции в виде осадка, который отделяют повторной фильтрацией,прозрачный очищенный раствор культурального фильтрата высушивают досуха под вакуумом,полученный порошок используют в качестве биологически активного продукта, обладающего способностью к коррекции гипотиреоза.