Способ определения наличия трансформированных клеток и их локализации в организме

(51) 64 39/395 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ трансформированных клеток и выявления места их локализации в организме человека или животных достигается тем, что в способе определения наличия трансформированных клеток и их локализации в организме, включающем введение детектируемых физическими методами анализа препаратов,согласно изобретению,вводят иммуноспецифические компоненты полисахариды, пептиды, - или 1 и 2 фрагменты антител или цельные молекулы иммуноглобулинов, конъюгированные с изотопами,ионами металлов и красителями, избирательно взаимодействующие с антигенами измененных клеток, например с рецепторами к альфафетопротеину.(76) Францева Ирина Александровна , Францев Александр Павлович(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ ТРАНСФОРМИРОВАННЫХ КЛЕТОК И ИХ ЛОКАЛИЗАЦИИ В ОРГАНИЗМЕ(57) Изобретение относится к иммуногистохимическим способам определения наличия и локализации трансформированных клеток. Возможность использованияметодов иммуногистохимии для раннего обнаружения 21099 Изобретение относится к иммуногистохимическим способам определения наличия и локализации трансформированных клеток. Известно, что в клетке образуются тысячи различных соединений - пептиды, белки, жиры,углеводы, нуклеиновые кислоты и т.д. Существуют специальные приемы обнаружения различных клеточных метаболитов,основанные на избирательном,специфическом окрашивании компонентов клетки различными красителями,известные как методы гистохимии. В последнее время, в практике гистохимических исследований все более часто используют специфичные к тем или иным структурам клетки антитела,конъюгированные с красителями,атомами и молекулами различных веществ металлами, ферментами, радиоактивными метками и т.д. Такие молекулярные конструкции называют нано - биозондами. Использование нано биозондов не только значительно увеличило число исследуемых биологических структур клетки, но и повысило избирательность и чувствительность иммуногистохимических способов. Избирательность в таких способах исследования определяется специфичностью антител,а чувствительность зависит от физических принципов детекции метки, принадлежащей нанобиозонду и технических параметров использованного оборудования. Известен способ световой микроскопии с использованием в качестве нано - биозонда антител с конъюгированными ионами золота ( .,, 1989, . 444-467). Несмотря на высокую избирательность, данный способ гистохимии с использованием нанобиозондов с ионами золота характеризуется низкой чувствительностью, которую удалось преодолеть при использовании реакций усиления оптической плотности с помощью серебра. Наибольшее распространение получили нанобиозонды с ферментными метками, которые способны наработать большое количество окрашенных продуктов реакции фермента с метаболитами в зоне локализации исследуемых структур клетки ( ,// . . . 1981, . 29. . 129 - 141). Однако все выше перечисленные методы иммуногистохимии используются при световой микроскопии клеток или тонких срезов тканей в исследованиях, с использованием видимой или ультрафиолетовой части спектра. Использовать такие нано - биозонды для исследованийкрайне затруднительно или невозможно вовсе. Известна группа органических соединений содержащих в своем составе йод, которые используются как рентгеноконтрастные соединения при научных исследованиях и диагностике различных 2 заболеваний. К таким соединениям относятся Триомбраст, Йодамин, Билигност, Йогексол и др. Указанные выше соединения используются при рентгенои рентгенотомографических исследованиях (М.Д. Машковский, Лекарственные средства. Пособие для врачей -М. Новая волна,2007, с. 1016-1022). В последнее время к этой группе диагностических средств прибавились соединения, содержащие в своем составе ионы металлов, например, гадолиния , которые используют при ядерной магнитно-резонансной томографии - Магне-вист, Гадодиамид и др. (М.Д. Машковский, Лекарственные средства. Пособие для врачей - М. Новая волна, 2007, с. 1022 - 1024). Благодаря этим соединениям и методу резонансной магнитноядерной томографии удается визуализировать места локализации этих в исследуемом организме. Данный способ не обеспечивает возможности раннего обнаружения трансформированных клеток. Задачей изобретения является усовершенствование способа диагностики опухолевых заболеваний. Возможность использованияметодов иммуногистохимии для раннего обнаружения трансформированных клеток и выявления места их локализации в организме человека или животных достигается тем, что в способе определения наличия трансформированных клеток и их локализации в организме, включающем введение детектируемых физическими методами анализа препаратов,согласно изобретению,вводят иммуноспецифические компоненты - полисахариды,пептиды, - или 1 и 2- фрагменты антител или цельные молекулы иммуноглобулинов,конъюгированные с изотопами, ионами металлов и красителями, избирательно взаимодействующие с антигенами измененных клеток, например с рецепторами к альфа-фетопротеину. Способ осуществляют следующим образом. Поликлональные, антиидиотипические антитела к альфа-фетопротеину,избирательно взаимодействующие с рецепторами к альфафетопротеину, конъюгировались с йодом, ионы которого вводили в молекулу антител согласно одной из принятых методик для мечения иммуноглобулинов йодом(Л.А. Остерман,Исследования биологических макромолекул электрофокусированием,иммунофорезом и радиоизотопными методами - М. Наука, 1983, стр. 236 - 279). Отделение компонентов реакции от целевого продукта - меченных йодом антител, а также перевод конъюгированных с йодом антител в физиологический раствор(0,85), проводили на колонке с Сефадексом -25, предварительно уравновешенной указанным раствором хлористого натрия. Белковая фракция, содержащая меченные йодом антитела,использовалась для внутривенных инъекций экспериментальным животным. В качестве экспериментальных животных использовали крыс - самцов, весом 160-180 г, 21099 которые тремя сутками ранее были инокулированы клетками перевиваемой солидной опухоли Эрлиха в количестве 10 х 106 клеток, подкожно, в левую боковую область брюшной стенки. На третьи сутки, после трансплантации клеток опухоли, в месте введения инокулята, у крыс прощупывалось образование,со средними размерами, равными по величине сухой горошине 3,5 - 4,0 мм в диаметре. Животных подвергали рентгеноскопии, однако локализацию опухоли на рентгеноснимках обнаружить не удалось из-за низкой плотности новообразований для рентгеновских лучей. После первой рентгеноскопии животным в хвостовую вену вводили по 0,2 мл раствора меченных йодом антиидиотипических к альфафетопротеину антител и по истечении 12 часов экспозиции крысы подвергались повторной рентгеноскопии. При рентгеноскопии крыс, которым внутривенно вводили раствор конъюгированных с йодом антиидиотипических антител к альфа-фетопротеину(нано-биозонд), обнаруживалось белое пятно диаметром 3,0-4,0 мм, в районе локализации перевиваемой опухоли. Таким образом,нано-биозонды,сконструированные на основе специфичных к антигенам измененных клеток полисахаридов,пептидов, - или 1- и 2- фрагментов антител,или цельных молекул иммуноглобулинов и присоединенной к ним специальной метки,детектируемой инструментальными методами, могут быть использованы для выяснения мест локализации опухолей и их метастазов. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ определения наличия трансформированных клеток и их локализации в организме, включающий введение детектируемых физическими методами анализа препаратов,отличающийся тем,что вводят иммуноспецифические компоненты - полисахариды,пептиды, - или 1 и 2 - фрагменты антител или цельные молекулы иммуноглобулинов,конъюгированные с изотопами, ионами металлов и красителями, избирательно взаимодействующие с антигенами измененных клеток, например с рецепторами к альфа-фетопротеину.