Вакцина против бруцеллеза мелкого рогатого скота

(2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(54) ВАКЦИНА ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА МЕЛКОГО РОГАТОГО СКОТА(57) Изобретение относится к области иммунологии и может быть использовано при промышленном производстве живых вакцин против бруцеллеза мелкого рогатого скота. Сущность изобретения вакцина против бруцеллеза мелкого рогатого скота, включающая штамм-1, дополнительно содержит протективный антиген из бруцелл штамма-1. Преимуществом предложенной вакцины является ее высокая иммуногенная активность при низкой себестоимости производства.(72) Иванов Николай Петрович Хусаинов Дамир Микдатович 17523 Изобретение относится к области иммунологии и может быть использовано при промышленном производстве живых вакцин против бруцеллеза мелкого рогатого скота. Известна вакцина против бруцеллеза мелкого рогатого скота, включающая вакцинный штамм-1. (Вакцина против бруцеллеза мелкого рогатого скота/ Описание изобретения к предварительному патенту Республики Казахстан 5697). Недостатком существующей вакцины является недостаточная активность вакцины. Целью изобретения является разработка способа получения более иммуногенной вакцины, обладающей более высокими протективными свойствами. Эта цель достигается тем, что основой для приготовления вакцины служит вакцинный штамм-1 и протективный антиген. Техническим результатом изобретения является повышение иммуногенности вакцины. Технологический процесс предлагаемого способа осуществляется следующим образом. Пример 1. Приготовления вакцины против бруцеллеза. Сухую культуру штамма 1 засевают на эритрит-агар и культивируют в течение 48 ч при температуре 37-38 С. Далее засевают в биоферментеры из расчета 5-10 млрд. микробных клеток на 1,0 см 3 жидкой питательной среды. Культивируют 24-36 ч при температуре 37-38 С, поддержании растворенного кислорода на уровне 20-40 см 3/час, рН 6,8-7,1, перемешивании при 200-300 об/мин. Сокращение времени на концентрирование вакцины достигается использованием в качестве вспомогательного вещества натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы ( КМЦ) в оптимальной концентрации 0,2-0,3 . Кроме того, осаждение бактериальной массы осуществляют непосредственно в реакторе при температуре 15-20 С в течение 48-72 ч при рН 6,8-7,1. После осаждения часть бактериальной массы, с концентрацией 100 млрд микробных клеток, убивают в автоклаве при 120 С в течение 30 минут. Полученную взвесь подвергают воздействию (с помощью ультразвукового диспергатора УЗДН-1 при частоте 20-30 кГц, мощности 50-70 Вт/см 2) ультразвуковых волн до просветления (25-30 минут). Другую часть бактериальной массы разводят до концентрации 100 млрд микробных клеток, далее к ней добавляют сахарозо-желатиновую среду высушивания 11 и дезинтеграт бруцелл 5-10 к общему объему, разливают вакцину в ампулы или флаконы, подвергают лиофильной сушке, запаивают ампулы и укупоривают флаконы, этикетируют и упаковывают. На всех стадиях способа изготовления вакцины осуществляется биологический контроль на чистоту и специфичность культуры. Реализуемый биопрепарат также проверяется на чистоту, иммуногенность,безвредность и выживаемость. Преимуществом предлагаемого способа является повышение производительности, снижение себестоимости, повышение качества и сроков хранения сухой вакцины, повышение иммуногенности. Пример 2. Иммуногенные свойства вакцины проверяют в опытах на морских свинках. С этой целью морским свинкам (10 голов) массой 300-400 г. вводят подкожно в паховую область 2-3 суточную агаровую культуру вакцинного штамма-1 в дозе 1 млн микробных клеток по бруцеллезному стандарту мутности в объеме 1,0 см 3. Иммунизированных морских свинок через 8-9 недель заражают 5-10 минимальными инфицирующими дозами(ИД) вирулентной культуры бруцелл вида абортус 54. Суспензию вирулентного штамма бруцелл вводят под кожу в области паха со стороны, противоположной месту введения вакцинной культуры бруцелл. Одновременно заражают 10 контрольных (невакцинированных) свинок в той же дозе. Через 35-40 суток зараженных свинок убивают и проводят бактериологические высевы из паховых,подчелюстных, шейных, параортальных лимфатических узлов, печени, селезенки, почки и мозга. При этом используют 1 пробирку с бульоном и две с агаром для каждого из 10 объектов и помещают на 15 суток в термостат при 37-38 С для инкубирования. Посевы учитываются дважды первый раз через 4-6 суток, второй раз на 14-е сутки, причем после первого учета пробирки с агаром дополнительно увлажняют посевным материалом. Высевы должны быть стерильными не менее чем у 80 вакцинированных морских свинок. В случае,если заражается более 20 свинок, штамм подвергается повторной проверке. Если и при повторной проверке иммунных свинок окажется менее 80 , то культуру данного штамма заменяют более иммуногенной, с предварительной проверкой тем же методом. В высевах от контрольных невакцинированных свинок должна быть в 100 случаев получена культура бруцелл заражающего штамма. В единичных случаях допустимо, когда высевы от одной свинки остаются стерильными. Результаты опыта, приведенные в таблице 2, свидетельствуют о высоких иммуногенных свойствах заявленной вакцины. Таблица 1 Сравнительные данные по способам изготовления живой сухой вакцины из штамма-1 Существующий способ Предлагаемый способ По составу вакцины Штамм-1 Штамм-1 с протективным антигеном 2 17523 Таблица 2 Иммуногенные свойства комбинированной вакцины в сравнении с коммерческой Штамм (метод выращивания) Штамм-1 с фагом (глубинный) Штамм-1 (агаровая среда) прототип Контроль Количество морских свинок 10 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Вакцина против бруцеллеза мелкого рогатого скота, содержащая микробные клетки вакцинного Количество иммунных абсолютное число в 10 100 9 10 штамма-1, отличающаяся тем, что дополнительно она содержит протективный антиген из бруцелл.