Вакцина против сибирской язвы животных

(2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(54) ВАКЦИНА ПРОТИВ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к области микробиологии, в частности, к биотехнологии вакцинных препаратов и может быть использовано при изготовлении вакцин против сибирской язвы. Вакцина против сибирской язвы животных,содержащая штамм 55-ВНИИВВиМ, дополнительно содержит протективный сибиреязвенный антиген в конечной концентрации 15-110 к споровой суспензии. Использование предложенной вакцины против сибирской язвы животных обеспечивает повышение иммуногенности примерно в два раза, значительное снижение количества заболевших животных вследствие более высокой защиты.(72) Саханин Владислав Сергеевич Иванов Николай Петрович Хусаинов Дамир Микдатович Наутиев Назымбек Ибатуллаевич 17522 Изобретение относится к области микробиологии, в частности, к биотехнологии вакцинных препаратов, и может быть использовано при изготовлении вакцин против сибирской язвы. Известна вакцина против сибирской язвы животных, содержащая штамм 55-ВНИИВВиМ (А.с. СССР 1791449, кл. 12 3/00, 1993). Основной недостаток этой вакцины заключается в недостаточной защитной силе вакцины при возникновении заболевания. Задачей настоящего изобретения является получение вакцины против сибирской язвы животных, обладающей высокими защитными свойствами. Вакцина против сибирской язвы животных содержит штамм 55-ВНИИВВиМ, при этом она дополнительно содержит протективный сибиреязвенный антиген в конечной концентрации 15-110 к споровой суспензии. Способ получения вакцины осуществляют следующим образом. Пример 1. Для изготовления вакцины используют бескапсульный сибиреязвенный штамм 55 ВНИИВВиМ, обладающий типичными культурально-морфологическими (стройные, неподвижные,спорообразующие палочки,расположенные одиночно или в виде цепочек, на МПБ-рост в виде рыхлого зонтика или комочка ваты на дне пробирки,бульон прозрачный или слегка опалесцирует, на МПА-серовато-белые, шероховатые на вид колонии-формы (на среде ГКИ и в организме животных капсул не образует),тинкториальными(граммположительная окраска) и биохимическими свойствами (не гемолизирует эритроциты барана в течение 2-х ч инкубирования на кровяном агаре,ферментирует с образованием кислоты сахарозу,глюкозу и мальтозу). Штамм не патогенен для морских свинок и кроликов и слабовирулентен для белых мышей, безусловно смертельная доза для мышей составляет 5-108 спор. Для изготовления очередной серии вакцины берут одну пипетку с культурой в 30 -ном растворе глицерина,либо ампулу лиофилизированного штамма 55-ВНИИВВиМ,которую разводят в 10 см 3 физиологического раствора. Суспензию спор высевают в пробирки(флаконы) с МПБ и дробно на чашки Петри с МПА. Посевы инкубируют при 36-37 С в течение 24 ч. При наличии в пробирках (флаконах) с МПБ характерного роста, на чашке Петри с МПАоднородных сибиреязвенных колоний -формы,бульонную культуру высевают в колбы (четверти) с картофельным агаром из расчета 4-6 мл культуры на каждую колбу. Посевы на картофельном агаре инкубируют при 34-35 С в течение 4-5 сут. К этому времени спорообразование культуры достигает 80100 . Процент спорообразования определяют путем выборочной микроскопии мазков из выращенной в колбах культуры. Смыв спор производят дистиллированной водой,споровую культуру отсасывают в стеклянную посуду с бусами через сифон с марлевым фильтром. 2 Смытую культуру шуттелируют в течение 1-1,5 ч,после чего из нее берут пробу для определения концентрации жизнеспособных спор и проверки ее на чистоту роста. Концентрацию определяют методом рассева на чашках Петри с МПА и последующим подсчетом выросших колоний. После определения концентрации, которая должна составлять 4-5 млрд. спор в 1 см 3, в случае изготовления сухой вакцины,полученную суспензию смешивают со стерильной,инактивированной сывороткой лошади, либо обезжиренным пастеризованным молоком в соотношении 11, тщательно перемешивают,разливают в ампулы по 1,0 мл, закрывают стерильным ватным тампоном и лиофилизируют. Для получения протективного антигена расплодки делают посев штамма 55 во флаконы с МПБ (рН 7,2-7,4) и ставят в термостат на 18-20 часов при температуре 36-37 С. Одновременно, для контроля, делают посев на МПА, МПБ и МППБ под вазелиновым маслом и среду Сабуро. Бульонную культуру спор сибирской язвы засевают на чашки Петри или матрасные колбы с 3-ным агаром, затем тщательно распределяют по поверхности агара. Посевы ставят в термостат при 36-37 С на 24 часа. Выросшую культуру снимают шпателем, готовят 5 млрд. споровую взвесь на буферном физиологическом растворе с рН 8,0. Полученную взвесь подвергают воздействию (с помощью ультразвукового диспергатора УЗДН-1 при частоте 20-30 кГц, мощности 50-70 Вт/см 2) ультразвуковых волн до просветления (25-30 минут). По окончании озвучивания микробный дезинтеграт растворяют физиологическим раствором 110 и вносят в вакцинную взвесь в соотношении 15-110. При изготовлении сухой вакцины, перед лиофилизацией споры с протективным антигеном,разлитые по ампулам, замораживают при минус 5070 С в течение 10-12 ч. После замораживания ампулы с вакциной быстро переносят в предварительно охлажденную сушильную камеру. При загрузке температура полок должна быть не ниже - 10 С, температура конденсатора - 40 С и ниже, вакуума в первые часы лиофилизации не более 100 микрон. В течение 16 ч температуру материала постепенно повышают до нуля. Затем материал 8 часов высушивают при положительной температуре, повышаемой от 0 до 20 С. При 20 С материал досушивают 2 ч. Остаточная влажность препарата после высушивания должна составлять 23 . Затем ампулы с материалом запаивают без вакуума. Ампулы с сухой вакциной этикетируют и хранят в коробках при 4 С до окончания контроля. Каждую серию вакцины проверяют на стерильность(отсутствие контаминации),безвредность и иммуногенность. Для этого содержимое 5-10 ампул объединяют и используют для проверки. Каждую ампулу вакцины при проверке на безвредность растворяют в 10 см 3 физиологического раствора, а при проверке на иммуногенность - в 100 см 3. Вакцину считают пригодной для практического применения, если она 17522 стерильна, безвредна и обладает достаточно выраженной иммуногенностью. Пример 2. Иммуногенные свойства вакцины проверяют в опытах на морских свинках. С этой целью морским свинкам (10 голов) массой 300-400 г вводят подкожно, в паховую область, взвесь вакцины в дозе 5 млн. спор по оптическому стандарту мутности ГНИИСК им. Л.А. Тарасевича в объеме 1,0 см 3. Иммунизированных свинок через 30-60 суток заражают 5-10 минимальными летальными дозами 2 вакцины Ценковского. Суспензию штамма вводят под кожу в области паха со стороны,противоположной месту введения вакцины. Одновременно заражают 15 контрольных(невакцинированных) свинок в той же дозе. Через 35-40 суток зараженных свинок убивают и проводят бактериологические высевы из паховых,подчелюстных,шейных,параортальных лимфатических узлов, печени, селезенки, почки и костного мозга. При этом используют 1 пробирку с бульоном и две с агаром для каждого из 10 объектов и помещают на 15 суток в термостат при 37-38 С для инкубирования. Посевы учитываются трижды первый раз через 4-6 суток, второй раз на 14-е сутки и третий раз через 3-4 недели. Причем после первого учета пробирки с агаром дополнительно увлажняют посевным материалом. Препарат считают иммуногенным, если он предохраняет не менее 70 вакцинированных морских свинок. В случае заражения более 30 морских свинок проверку иммуногенных свойств повторяют. Если при повторном контроле иммунных животных окажется менее 70 , то такую вакцину бракуют. Результаты опыта, приведенные в таблице,свидетельствуют о высоких иммуногенных свойствах заявленной вакцины. Таблица Иммуногенные свойства комбинированной вакцины в сравнении с коммерческой Вид вакцины (состав) Штамм 55-ВНИИВВиМ с протективным антигеном Штамм 55-ВНИИВВиМ Контроль Пример 3. Вакцину применяют для профилактических и вынужденных прививок животным однократно,строго подкожно. Молодняку, не достигшему 3 месячного возраста, прививать вакцину не разрешается. Овцам и козам вакцину вводят в области внутренней поверхности бедра в бесшерстный участок в дозе 10-12,5 млн пор в объеме 0,5 см 3. Лошадям, крупному рогатому скоту, оленям,верблюдам и ослам вакцину вводят в области средней с трети шеи в дозе 20-25 млн спор в объеме 1,0 см 3, а свиньям в области внутренней поверхности бедра или предплечья в дозе 1,0 см 3. Кожу на месте введения вакцины предварительно дезинфицируют 70 -ным спиртом или 3 -ным раствором фенола. Профилактические прививки лошадям, крупному и мелкому рогатому скоту в неблагополучных по сибирской язве зонах рекомендуется проводить 2 раза в год - весной и осенью. Другие виды животных, а также всех животных благополучных по сибирской язве зон рекомендуется прививать Количество иммунных абсолютное число в 10 100 8 один раз в год в период наилучшего физиологического в год в период наилучшего физиологического состояния организма животных. Использование предложенной вакцины против сибирской язвы животных из высокоиммуногенного, ареактогенного бескапсульного штамма 55 ВНИИВВиМ с протективным антигеном обеспечивает по сравнению с существующим способом следующие преимущества- изготовление и внедрение в практику вакцины против сибирской язвы, в два с лишним раза превосходящей по иммуногенности- значительное снижение количества заболевших животных вследствие более высокой защиты. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Вакцина против сибирской язвы животных,содержащая штамм 55-ВНИИВВиМ,отличающаяся тем, что дополнительно содержит протективный сибиреязвенный антиген в конечной концентрации 15-110 к споровой суспензии.