Бифлавоноид, проявляющий противоопухолевую и Р-витаминную активность

(51)707 311/32,61 35/00 ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(72) Сатаев Исак Коханбаевич Имангалиев Телжан Альжанович Ибрагимова Гулнар Назировна(73) Южно-Казахстанский государственный университет им. М.О. Ауезова Министерства образования и науки Республики Казахстан БИФЛАВОНОИД, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ(57) Изобретение относится к получению новых соединений - производных флавонов, в частности кверцетина, проявляющих физиологически активные свойства, которые могут быть использованы в медицине как лекарственные препараты. Бифлавоноид, проявляющий противоопухолевую активность и Р-витаминную активность, получен путем электрохимического синтеза на основе флавона - кверцетина в среде этилового спирта в электролизере с платиновым анодом и свинцовым катодом с добавками . Бифлавоноид проявляет противоопухолевую активность и Р-витаминную активность и не обладает токсичностью. 10548 Изобретение относится к получению новых соединений - производных флавонов, в частности кверцетина, проявляющих физиологически активные свойства, которые могут быть использованы в медицине как лекарственные препараты. В литературе отсутствуют сведения по производным кверцетина, проявляющим физиологически активные свойства. Задачей изобретения является синтез производных кверцетина, обладающих биологической активностью, в частности, противоопухолевыми свойствами и Р-витаминной активностью. Поставленная задача достигается путем электрохимического синтеза на основе флавона-кверцетина в среде этилового спирта в электролизере с платиновым анодом и свинцовым катодом с добавками аВ. Кверцетин имеет следующую структурную формулу 15107 Оптимальными условиями ведения процесса являются анодная плотность тока 0,15 /см 2, концентрация исходного кверцетина - 0,001 М концентрация электропроводящей добавки- 0,0016 температура - 20-30 С. После окончания электросинтеза электролизат отфильтровывают, растворитель отгоняют под вакуумом водоструйного насоса, оставшийся осадок промывают хлороформом, затем обрабатывают ацетоном для удаления побочных органических продуктов электросинтеза, опять растворяют в этиловом спирте и очищают в адсорбционной колонке оксидом алюминия ( степени активности по Брокману) с элюирующей смесью этиловый спирт, вода, уксусная кислота (210,5). Увеличение концентрации исходного кверцетина выше 0,001 М приводит к образованию веществ полимерного характера, при уменьшении концентрации исходного вещества ниже 0,001 М также снижается выход целевого продукта за счет уменьшения прианодной концентрации исходного вещества. При повышении температуры выше 30 оС увеличивается скорость десорбции адсорбированных молекул исходного кверцетина, что приводит к уменьшению выхода целевого продукта. Анализ и идентификация конечного продукта проводились методом тонкослойной хроматографии,определением элементного состава и снятием ИК- ,ЯМР- и масс-спектров. Установлено, что в ИК-спектре продукта сохраняется широкая полоса с центром пика 1640 см-1,характерная для колебаний лактамной 2 в положении 4 сохраняется в молекуле продукта. В области скелетных колебаний кольца при сравнении спектров кверцетина и продукта можно заметить, что полосы поглощения в этой области тождественны. Совпадение спектра продукта в низкочастотной области при полосе поглощения 920 см-1, 850 см-1,750 см-1 со спектром исходного вещества доказывает сохранение гетероциклической структуры для продукта. В ЯМР-спектре продукта обнаружены пики с центрами при м.д, равными 5,65 5,68 5,70 5,74 5,76. По данным литературы, колебания протонов в этой области можно отнести только к колебаниям гидроксильных групп. Наблюдаемые пики показывают наличие в структуре продукта только 10 -ОН групп. Это подтверждается и интегральным спектром, интенсивность которого при этих пиках в сумме равна 10. Такая величина интегральной интенсивности может отвечать колебаниям десяти про связи, тонов т.е. колебаниям только десяти -ОН групп. В масс-спектре продукта при электронном ударе образуются основные фрагменты с /е, равными 38,62, 71, 132, 156, 189, 216, 424, 546, 602. Максимальный ион составляет фрагмент с /е,равным 602(М), определен как молекулярный ион,относительная интенсивность которого от максимального иона составляет 31 . Основной фрагмент с /е, равным 602, может образоваться только при соединении двух молекул кверцетина. На основании результатов анализа нами была предположена следующая формула для конечного продукта - С 30 Н 18 О 14. Относительная интенсивность изотопного содержания М 1 и М 2 от молекулярного иона, по данным Бейнона (Д. Бейнон. Масс-спектроскопия и ее применение в органической химии. М. Мир, 1964, с. 63 и др.) для формулы С 30 Н 18 О 14 должны составлять соответственно 37,42 и 4,34 . Экспериментальные значения почти соответствуют расчетным величинам относительной интенсивности изотопного содержания. Совпадение этих величин подтверждает верность выбранной брутто-формулы для продукта С 30 Н 18 О 14. Четная масса пика молекулярного иона предполагает, что в соединении либо нет атомов кислорода,либо число четное (правило кислорода) (Д. Бейнон. Масс-спектроскопия и ее применение в органической химии. М. Мир, 1964, с. 108 и др.). По данным элементного анализа процентное содержание атомов кислорода составляет 37,12 , что соответ 10548 ствует двум атомам кислорода в молекуле и 10 атомам гидроксильных групп. В таблице приведены физико-химические характеристики полученного соединения. По совокупности данных физико-химических методов анализа, которые приведены в таблице, а так Название вещества Найдено Рассчитано же результатов сравнительного анализа ИК-, ЯМРи масс-спектров исходного вещества и продукта,описанных выше, продукт был идентифицирован как дикверцетин и тривиально назван - бифлавоноид. Бифлавоноид С 30 Н 18 О 14 имеет следующую структурную формулу. Бифлавоноид С 30 Н 18 О 14 представляет собой бежевый порошок. Он легко растворим в воде, этиловом, метиловом спиртах, нерастворим в хлороформе, ацетоне. Медико-биологические испытания проводились в НИИ онкологии и радиологии и Института физиологии АНРК. Р-витаминная активность бифлавоноида изучена на белых беспородных крысах 100-120 г массой,содержащихся на диете, лишенной витамина Р, следующего состава,казеин - 18, крахмал маисовый 65, дрожжи пекарские сухие - 8, лярд - 5, смесь солей - 4. Кроме того, один раз в неделю каждому животному давали витамин А - 10 м.е. и витамин Д 5 м.е. Из указанных компонентов выпекался хлеб и давался вволю. Вода давалась в неограниченном количестве. Препарат водили в дозе 10 мг/кг ежедневно в течение двух недель. Способ введения через зонд, непосредственно в желудок. Для определения Р-витаминной активности препарата применяли метод изучения капиллярной реакции, определяя время появления петехий (точечных кровоизлияний) на выстриженной поверхности кожи области бедра, вызванных наложением вакуумной присоски. Как показали результаты, время появления петехий увеличивается после введения препарата бифлавоноида. Если до опыта время появления петехий составляло 28,84 мин, то после введения бифлавоноида оно составило 52,36 мин. Это свидетельствует о том, что препарат бифлавоноид оказал положительное влияние на резистентность капилляров. Противоопухолевая активность бифлавоноида изучаласьи, согласно методическим указаниям Фармакологического комитета МЗ РК и РФ. К бифлавоноиду выявлена частичная агглютинация опухолевых клеток саркомы 180 и саркомы 45. Острую токсичность бифлавоноида изучали на интактных белых беспородных мышах массой 1822 г по методу Г.Н. Першина (при однократном их применении). Контрольные животные получали растворитель. Бифлавоноид вводили мышам внутрибрюшинно в дозах 1000, 5000 и 6000 мг/кг в виде 2 -ного водного раствора. Эксперименты показали, что бифлавоноид сравнительно малотоксичен. Даже в дозах 5000 и 6000 мг/кг при введении внутрижелудочно бифлавоноида не наблюдали гибели мышей. Состояние и поведение животных в течение 20 суток после введения веществ не отличалось от такового контрольных мышей. Зависимости их токсичности от пола животных не обнаружили. Патолого-анатомическое исследование внутренних органов мышей при их забое и вскрытии (в конце опыта) через 20 суток после введения веществ в вышеуказанных дозах не выявило с их стороны изменений в сравнении с контрольной группой. Таким образом, установлено, что бифлавоноид проявляет противоопухолевую активность и Рвитаминную активность и не обладает токсичностью. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Бифлавоноид формулы