Способ культивирования рекомбинантного штамма А/АстанаRG/6:2/2009

(51) 12 1/20 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Объектом изобретения является способ культивирования рекомбинантного штамма в развивающихся куриных эмбрионах для наработки биомассы вируса гриппа, используемой в приготовлении диагностических и профилактических препаратов. В способе культивирования используется рекомбинантный штамм//62/2009 вируса гриппа, который является безвредным и иммуногенным. Культивирование штамма вируса гриппа проводили в 9-10 сут РКЭ, инкубировали при температуре 33,00,5 С в течение 72 час, сбор вирусной биомассы проводили после предварительного охлаждения инфицированных РКЭ при 2-6 С в течение 16-18 ч. Наработанная указанным способом вирусная суспензия имеет высокие титры и пригодна для использования при приготовлении диагностических и профилактических препаратов.(72) Мамадалиев Сейдигапбар Мамадалиевич Абдураимов Ергали Орынбасарович Кыдырбаев Жайлаубай Кыдырбаевич Рыскельдинова Шолпан Жамбырбаевна Ершебулов Закир Джаппарович Табынов Кайсар Казыбаевич(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научноисследовательский институт проблем биологической безопасности Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ШТАММА А/АСТАНА/62/2009 Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии и вирусологии,может использоваться для культивирования и наработки биомассы вируса гриппа птиц в развивающихся куриных эмбрионах. Известен способ культивирования вируса в куриных эмбрионах (Ярыгина Е.И., Хашин О.В.,Кузнецов Д.П. Доклад РАСХН.-2004.- 6.-. 48-50 журнал Ветеринария, Реферативный журнал, 4,2005 год, с.1135). Отличием от вышеуказанного способа является то что, в заявленном способе культивирования используется рекомбинантный штамм//62/2009 вируса гриппа, полученный методом обратной генетики из высокопатогенного штамма-донора ///6/05 (51) и высокорепродуктивного штамма-донора //8/34 (51), который является безвредным,реактогенным и иммуногенным. Задачей изобретения является разработка параметров культивирования вируса гриппа/51 в развивающихся куриных эмбрионах. Техническим результатом изобретения является разработка способа культивирования вируса гриппа/51 в куриных эмбрионах для наработки активной вирусной биомассы, пригодной для изготовления диагностических наборов и профилактических препаратов для здравоохранения. Результаты, полученные в ходе выполнения проекта, будут внедрены в разрабатываемую технологию изготовления вакцинных препаратов против вируса гриппа /51. Культивирование рекомбинантного штамма//62/2009 проводится следующим образом, 9-10 сут. развивающиеся куриные эмбрионы инфицируют рекомбинантным вирусом. В автоматический шприц-автомат набирают расплодку вируса и проверяют правильность инфицируемого объема путем регулирования поршня до отметки 0,2 см 3. Инкубирование инфицированных развивающихся куриных эмбрионов проводят при температуре 330,5 С в течение 72 час (3 сут). Затем проводят охлаждение развивающихся куриных эмбрионов и сбор вируссодержащего материала путем отсоса аллантоисной жидкости. Для определения биологической (инфекционной) активности вируса используют 9-10 сут развивающиеся куриные эмбрионы. Десятикратно разведенным вирусом от 10-1 до 10-9 на стерильном физиологическом растворе заражают эмбрионы в аллантоисную полость по 0,2 см 3. Инкубируют при температуре 330,5 С с относительной влажностью воздуха 60-65 в течение 72 час. По окончании инкубирования эмбрионы охлаждают при температуре 2-6 С в течение 16-18 час. Затем каждый эмбрион проверяют в качественной реакции гемагглютинации. Титр вируса рассчитывают по Риду и Менчу (1938). Приготовленная по данному способу вирусная суспензия имеет биологическую активность не ниже 7,00 ЭИД 50/см 3. Предлагаемый способ культивирования рекомендован для наработки вирусной биомассы при приготовлении диагностических и профилактических препаратов. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ культивирования рекомбинантного штамма, включающий культивирование в куриных эмбрионах, инкубирование, отличающийся тем,что используют рекомбинантный штамм А/Астана/62/2009 вируса гриппа, полученный методом обратной генетики из высокопатогенного штамма-донора А///6/05 (51) и высокорепродуктивного штамма-донора /