Способ лечения гнойных ран мягких тканей

(51) 61 31/545 (2006.01) 61 31/04 (2006.01) 01 33/49 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ хирургических мероприятий по обработке и вскрытия гнойного очага в края и дно раны инъекционно вводят заранее приготовленные в стерильных условиях аутологичные эритроцитарные фармакоциты,содержащие разовую дозу антибиотика цефтриаксон и цитокинового препарата интерлейкин-1. Обработку аутологичными эритроцитарными фармакоцитами производят путем обкалывания дна и стенок раны в нескольких точках по разработанной схеме, обычно обкалывание производят в 3-4 точках с целью равномерного распределения инфильтрируемого препарата вокруг раны. Гнойная полость ушивается послойно с последующим наложением первичных швов на кожу. Через 24 часа и 48 часов в края раны вновь вводят аутологичные эритроцитарные фармакоциты,содержащих разовую дозу цефтриаксона и цитокинового препарата интерлейкин-1. Биотехнологические преимущества предлагаемого способа заключаются в уменьшении разовой и суточной дозы препарата и длительности курса лечения, уменьшении побочных эффектов антибиотиков и цитокинов (токсичность высоких концентрации, нежелательный системный эффект,иммунодепрессивное и аллергическое действие,формирование антибиотикоустойчивости штаммов микроорганизмов) по сравнению с традиционными методами лечения.(72) Жумадилов Жаксыбай Шаймарданович Берикханова Кульжан Еженхановна Омарбаев Рустам Токенович Гуляев Александр Евгеньевич Кеккель Вера Леонидовна Салиев Тимур Муйдинович(54) СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ГНОЙНЫХ РАН МЯГКИХ ТКАНЕЙ(57) Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к хирургии и может быть использовано при лечении гнойных ран мягких тканей. Задачей изобретения является разработка нового способа ускорения заживления гнойных ран,который показал бы более раннее заживление послеоперационной раны. Новый способ лечения гнойных ран мягких тканей заключается в том, что после стандартных Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к хирургии и может быть использовано при лечении гнойных ран мягких тканей. Увеличение хронических форм и рецидивов гнойной хирургической инфекции в эру антибиотиков связано с угнетением последними иммунологических процессов. При традиционном внутривенном введении иммуномодулирующая активность цитокинов весьма непродолжительная в связи с коротким периодом полувыведения (5-7 минут), что обуславливает потребность в непрерывной внутривенной инфузии на протяжении 5-8 часов. При этом наиболее высокая концентрация препарата создатся в крови и минимальная в очаге гнойного воспаления. У больных такими социально - значимыми заболеваниями как сахарный диабет, ВИЧ,туберкулез, особенности иммунопатогенеза острой хирургической инфекции выражаются в наслоении последней на изначально присутствующую вторичную иммунную недостаточность, что в результате приводит к увеличению процента осложнений и летальности от этих заболеваний. В связи с чем, есть необходимость разработки наиболее эффективных способов реализации иммуномодулирующего эффекта цитокинов непосредственно в очаге воспаления. Для решения этой проблемы, одним из перспективных направлений современной медицины является использование транспортных систем целенаправленной доставки лекарственных препаратов. При целенаправленной доставке лекарственного препарата в очаги воспаления создается локальная высокая концентрация препарата, пролонгация и локализация действия лекарственного препарата,которая обеспечивает значительную выраженность терапевтического эффекта. Наиболее близкими к заявляемому способу по назначению и совокупности существенных признаков являются способы лечения острых гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей является исследование в Республике Казахстан на базе Карагандинской государственной медицинской академии,выполненное по направленному транспорту антибиотиков(гентамицин),осуществляемому лейкоцитами Направленный транспорт антибиотиков при лечении больных диабетической гнойной остеоартропатией/ С.В. Лохвицкий, Ш.А. Ержанова, М.И. Балаболкин,И.М. Сарафанова // Сахарный диабет. 1999. -3 (4),с.1-5., Лохвицкий С.В., Кивман Г.Я., Гуляев А.Е.,Пьянов С.Г., Губенко Л.В., Зубцов В.Н. Способ лечения хирургической инфекции.1805390 А 1 Задачей изобретения является разработка нового способа ускорения заживления гнойных ран,который показал бы более раннее заживление послеоперационной раны. Новый способ ускорения заживления гнойных ран мягких тканей заключается в том, что после 2 стандартных хирургических мероприятий по обработке и вскрытия гнойного очага в края и дно раны инъекционно вводят заранее приготовленные в стерильных условиях аутологичные эритроцитарные фармакоциты,содержащие разовую дозу антибиотика цефтриаксон и цитокинового препарата интерлейкин-1. Обработку аутологичными эритроцитарными фармакоцитами производят путем обкалывания дна и стенок раны в нескольких точках по разработанной схеме, обычно обкалывание производят в 3-4 точках с целью равномерного распределения инфильтрируемого препарата вокруг раны. Гнойная полость ушивается послойно с последующим наложением первичных швов на кожу. Через 24 часа и 48 часов в края раны вновь вводят аутологичные эритроцитарные фармакоциты,содержащих разовую дозу цефтриаксона и цитокинового препарата интерлейкин-1. Новым в заявленном способе является создание в тканях, вовлечнных в раневой процесс, высокой локальной концентрации антибиотика,обеспечивающего противомикробный пролонгированный эффект и высокой локальной концентрация цитокина,обеспечивающего иммунокоррегирующий пролонгированный эффект за счт инъекционного введения в края и дно раны фармакоцитов,содержащих антибиотик цефтриаксон и цитокиновый препарат интерлейкин-1. Аксиоматично, что эффективность антибиотиков и цитокинов определяется уровнем концентрации препаратов в воспалительном очаге и временем удерживания там терапевтической концентрации. Увеличение концентрации и удлинение времени сохранения препаратов в ране обеспечивает повышение терапевтического эффекта заживления. Критериями оценки терапевтической эффективности разработанного способа являлись полученные нами экспериментальные результаты. Эффективность лечения оценивается по клиническим признакам течения гнойновоспалительного процесса срокам исчезновения гноя и инфильтрата вокруг раны, исчезновения патогенной микрофлоры, срокам нормализации цитологической картины,срокам полного заживления раны. В качестве экспериментальных животных были отобраны белые крысы линиивесом 250-300 грамм. Группы исследования экспериментальных животных с моделью гнойной раны 1) Контрольная группа - традиционный метод лечения гнойных ран путем ежедневной перевязки и внутримышечным введением антибиотика. Курс лечения 0,01 грамм Цефтриаксона 2 раза в день внутримышечно, 7 суток. 2) Основная группа - разработанный метод лечения гнойных ран путем обработки раны эритроцитарными фармакоцитами с 0,01 грамм Цефтриаксона и 0,02 мкг Беталейкина 1, один раз в сутки в течение 3 дней с наложением швов на рану. Рана размерами 1,5 х 1,5 х 0,8 см с гнойным отделяемым с неприятным запахом. Края раны гиперемированы. (Фиг.1-2) Взят бактериологический посев из раны на культуру и на чувствительность к антибиотикам. Взята биопсия на цитологическое исследование. 1) В контрольной группе лечение гнойных ран при традиционном способе лечения заключалось во вскрытии абсцесса, санации гнойной полости, с дальнейшими ежедневными перевязками с антисептиками и наложением мази левомеколь. Антибактериальная терапия включала 0,01 грамм Цефтриаксона 2 раза в день внутримышечно, 7 дней. При традиционном методе лечения развивалась продолжительная экссудативная фаза и болевой синдром,обусловленный необходимостью ежедневной механической обработки воспаленной раневой поверхности во время каждой перевязки. В связи с этим перевязки проводили под анестезией. При традиционном методе лечения гнойных ран полный переход вофазу раневого процесса с активизацией развития грануляционной ткани отмечался на 8 сутки. Скорость заполнения раны грануляционной тканью в значительной степени зависела от глубины раны. Послеоперационные раны заживали вторичным натяжением на 15 сутки. 2) При разработанном способе лечения выявлено значительная терапевтическая эффективность в основной группе исследования. В качестве системы для направленной доставки препаратов к гнойному очагу используют аутологичные эритроциты. Цефтриаксон и Интерлейкин-1 депонируют в тенях аутологичных эритроцитов, в результате получают систему направленного транспорта,называемую фармакоциты. Способ осуществляется следующим образом антибиотик цефтриаксон и Интерлейкин-1 включают в аутологичные эритроциты методом гипоосмического гемолиза. Для включения каждого из исследуемых препаратов в аутологичные эритроциты в стерильных условиях у животного берут 1,0 мл. крови из вены в стерильную пробирку с гепарином(25 Ед/мл). Пробирку закрывают стерильной пробкой и центрифугируют при 3 тыс. об/мин 5 мин. Надосадочную жидкость удаляют стерильной пипеткой. К осадку эритроцитов добавляют 5-ти кратный объм физиологического раствора и центрифугируют в вышеуказанном режиме для отмывания эритроцитов. Процедуру повторяют дважды. К осадку эритроцитов приливают 5-ти кратный объм дистиллированной воды,охлажденной до 0 С. Вс перемешивают и центрифугируют при 8000 об/мин, при 4 С. Надосадок сливают, а к осадку эритроцитарных теней приливают инкубационный раствор (5 мл дистиллированной воды с разовой дозой одного из исследуемых препаратов) и инкубируют в течение 15-20 мин. при 4 С. После чего добавляют 1/9 часть этого объма 10 хлористого натрия. Взвесь тщательно перемешивают и помещают в термостат на 20-30 мин при 37 С, с целью последующего использования по назначению. Заявляемым способом было проведено лечение 20 крыс с моделью гнойной раны. Использован разработанный способ лечения гнойных ран путем обработки раны эритроцитарными фармакоцитами с 0,01 грамм Цефтриаксона и 0,02 мкг Беталейкина(Интерлейкин-1) 1 раз в сутки в течение 3 дней с наложением швов на рану. Данный способ лечения заключается во вскрытии гнойного очага, эвакуации гноя, санации гнойной полости антисептическими растворами (0,05 раствора хлоргекседина, 1 диоксидина или перекисью водорода) с частичной некрэктомией. Проводят тщательный гемостаз. Затем края и дно раны обрабатывают заранее приготовленными в стерильных условиях аутологичными эритроцитарными фармакоцитами, содержащими разовую дозу цефтриаксона и интерлейкина-1). Обработку аутологичными эритроцитарными фармакоцитами производят путем обкалывания дна и стенок раны в нескольких точках по разработанной схеме,обычно обкалывание производят в 3-4 точках с целью равномерного распределения инфильтрируемого препарата вокруг раны. Гнойная полость ушивается послойно с последующим наложением первичных швов на кожу. В послеоперационном периоде края раны обрабатываются аутологичными эритроцитарными фармакоцитами,содержащих разовую дозу цефтриаксона и интерлейкина-1) через 24 часа и 48 часов после первого введения однократно в сутки. Всего за курс лечение проводят 3 обкалываний краев раны аутологичными эритроцитарными фармакоцитами,содержащих разовую дозу цефтриаксона и цитокинового препарата(интерлейкин-1). Перевязки раны проводят ежедневно путем обработки швов антисептиками и накладывают асептическую повязку. При лечении по разработанному нами методу швы снимают на 6-е сутки. Послеоперационные раны заживают первичным натяжением. Этапы операции при разработанном методе лечения с наложением первичных швов на рану показаны в следующих рисунках (Фиг.3-7) Края раны обработаны спиртом. Сняты швы. При разработанном методе лечения курс лечения составлял 3 дня. У лабораторных животных основной группы после операции отмечалось улучшение общего состояния и снижение уровня температурной реакции. У крыс основной группы умеренное ограничение движения соответствующей конечности при передвижении из-за боли в области раны наблюдались лишь в течение первых суток после операции. Результаты лечения по предложенной схеме показали значительное ускорения процесса заживление послеоперационной раны. У крыс основной группы отек и гиперемия в области сшитой раны резко уменьшились на 1-2 сутки. На 2-3 сутки отмечались исчезновение местновоспалительных явлений(гиперемия,отек,инфильтрация тканей, болевой синдром) (Фиг.8). На 6 сутки лечения у крыс были сняты швы. Заживление раны произошло первичным натяжением (Фиг.9). Авторами экспериментально выявлено ускорение процесса заживления гнойных ран при разработанном способе лечения,что подтверждается результатами цитологических исследований. Цитологическая характеристика раневого процесса при традиционном лечении. Цитологический контроль процесса заживления раны обеспечивает раннюю и объективную оценку эффективности проводимого лечения. Проведенные нами цитологические исследования выявили особенности заживления раны при лечении гнойных ран с помощью разработанного метода. Ниже приведена сравнительная цитологическая картина при традиционном и разработанном нами методах лечения в каждой исследуемой группе. После вскрытия гнойной раны во всех группах на цитограмме мазков-отпечатков с поверхности ран отмечалась цитологическая картина,характеризующаяся обилием кокковой флоры,детрита и нейтрофильных лейкоцитов, в основном разрушенных, многие из которых были в состоянии некробиоза, а некоторые - распавшиеся (фиг.10). Лимфоциты были в незначительном количестве. Некротический тип. На всем протяжении эритроциты, сплошь. Встречаются лимфоциты и в большом количестве нейтрофильные лейкоциты. Стромальные элементы с нейтрофильными лейкоцитами на строме. Белки плазмы крови розового цвета. Встречаются детриты и в небольшом количестве разрушенные нейтрофильные лейкоциты. На 6 сутки традиционного лечения на фоне серозного содержимого, окрашенного в светлозеленый цвет определяется обилие эритроцитов,нейтрофильных лейкоцитов. Умеренное количество макрофагов. Встречаются лимфоциты,фибробласты,стромальные компоненты (фиг.11). При традиционном лечении только на 6-ые сутки отмечается снижение количества нейтрофилов, в поле зрения имеются в основном неразрушенные нейтрофилы, появление гистиоцитов, лимфоцитов,макрофагов. На 8 сутки традиционного лечения с мазью левомиколя на фоне серозного содержимого,окрашенного в зеленый цвет по Папаниколау,определяется умеренное количество эритроцитов,нейтрофильных лейкоцитов,макрофагов. Встречаются лимфоциты, фибробласты, полибласты по краю препарата. Встречаются стромальные компоненты, в просвете которых определяются нейтрофильные лейкоциты,лимфоциты,фибробласты, эритроциты. По краю определяются белковые массы розового цвета (фиг.12). На 9 сутки традиционного лечения с мазью левомиколя на фоне серозного содержимого,4 окрашенного в зеленый цвет определяется большое количество эритроцитов,нейтрофильных лейкоцитов,лимфоцитов. Встречаются фибробласты, макрофаги, стромальные структуры и стромальные компоненты, в которых определяются нейтрофильные лейкоциты,лимфоциты и фибробласты. По краю определяются белковые массы розового цвета. Встречаются новообразованные сосуды, по краю которых определяются нейтрофильные лейкоциты и эритроциты, образование грануляционной ткани(фиг.13). На 12-ые сутки традиционного лечения в цитологической картине сохраняются не разрушенные нейтрофильные лейкоциты, имеются единичные фибробласты, гистиоциты, макрофаги(фиг.14). Определяются белковые массы. На 12 сутки сохранение в ране нейтрофильных лейкоцитов,особенно,разрушенных,свидетельствуют о наличии воспалительного процесса. Данный феномен можно объяснить постоянным повторным инфицированием открытой раны при традиционном методе лечения. Таким образом, при традиционном способе лечения гнойных ран цитологическая картина соответствует процессу заживления гнойных ран путем вторичного натяжения. Признаки регенерации вялые, скудные и появляются только на 6-8-ые сутки ввиде единичных фибробластов. Цитологическая картина при разработанном методе лечения гнойных ран путем обработки Беталейкином и Цефвключенными в фармакоциты с наложением первичных швов на рану. До начала лечения определяется некротический тип цитологической картины. Белки плазмы крови розового цвета, на них дегенеративно - измененные нейтрофильные лейкоциты, единичные клетки многослойного плоского эпителия и детрит(фиг.15). При лечении по разработанному способу на 1 сутки отмечается дегенеративно - воспалительный тип цитограммы. На фоне белков крови розового цвета определяется большое количество нейтрофильных лейкоцитов,сохранных и дегенеративно-измененных. Клетки эпителия,единичные стромальные элементы (фиг.16). При лечении по разработанному способу на 2 сутки отмечается воспалительно - регенераторный тип со стиханием воспалительного процесса и активацией очищения раны на клеточном уровне. Отмечается значительное снижение количества нейтрофилов, появление гистиоцитов (фиг.17). Большое количество белков плазмы крови. На всем протяжении обилие эритроцитов оранжевого цвета. В незначительном количестве встречаются единичные округлые образования, напоминающие сосудистые полости, заполненные эритроцитами. Стромальные элементы, тянущиеся в продольном и поперечном направлении. В незначительном количестве встречаются круглоклеточные элементы нейтрофильные лейкоциты. Формирование грануляции. Применение эритроцитарных фармакоцитов с Беталейкином и цефтриаксоном обеспечивает резкую смену воспалительной фазы активной пролиферативной фазой процесса заживления ран. Наличие малодифференцированных фибробластов указывает на начальную стадию развития грануляционной ткани. На 3-ые сутки при разработанном способе лечения отмечается регенераторный тип цитограммы. На фоне незначительного количества нейтрофильных лейкоцитов и лимфоцитов,белковых масс, отмечается увеличения процентного состава гистиоцитов, макрофагов, фибробластов,фиброцитов, что показывает на активацию регенераторного процесса (фиг.18). На 4-е сутки после лечения разработанным способом на цитограмме подтверждается регенераторный тип. Эритроциты на всем протяжении, формирование грануляционной ткани. Встречаются фибробласты разной степени зрелости юные (с крупным, овальным, гиперхромным ядром) и зрелые (клетки узкие, вытянутые, с узким ядром и светлой цитоплазмой) (фиг.19). Фибробласты более высокой степени дифференцировки,расположены группами,направление их упорядочены. Это свидетельствует о первичном заживлении раны. При направленном транспорте антибиотиков и цитокинов в эритроцитарных фармакоцитах отмечается ускорение регенераторного процесса с ранним созреванием грануляционной ткани. На 6-ые сутки в цитологической картине отсутствует элементы воспаления,имеются скопления фибробластов, гистиоциты, фиброциты,множественные нити фибрина (фиг.20). Сплошь строма, стромальные элементы. На строме встречаются фибробласты, фиброциты,новообразованные сосуды, в просвете которых отмечаются эритроциту. На цитограммах местами имеются сеть фибриновых волокон, расположенных хаотично, но образующих своеобразную основу. Обработка гнойной раны эритроцитарными фармакоцитами обеспечивает высокую терапевтическую концентрацию антибиотика и цитокинов в ране, без общетоксического действия на весь организм. Это приводит к более быстрому купированию экссудативной фазы, скорейшему началу созревания грануляций и соответственно их ранней организации. При использовании эритроцитарных фармакоцитов в гнойной ране создаются благоприятные условия для заживления первичным натяжением, позволяющие производить наложение на гнойную рану первичных швов. Таким образом, результаты лечения по предложенной схеме показали более раннее заживление послеоперационной раны. На 2-3 сутки отмечались исчезновение местно-воспалительных явлений (гиперемия, отек, инфильтрация тканей,болевой синдром). На 6 сутки лечения у крыс были сняты швы. Заживление раны произошло первичным натяжением. Нами экспериментально доказано эффективность местного применения аутологических эритроцитарных фармакоцитов с цефтриаксоном и цитокином Беталейкин при лечении гнойных ран. Наличие высоких концентраций факторов тканевого роста в ране играет большую роль в ускорении процесса заживления ран. При этом неоднократно уменьшается разовая и суточная доза препарата, что уменьшает токсичность препаратов по сравнений с традиционными методами лечения, что позволяет также сократить расход лекарств. Предлагаемая технология может позволить значительно улучшить лечение больных с гнойными хирургическими заболеваниями(абсцесс,парапроктит, мастит) путем целенаправленной доставки цитокинов и антибиотиков в очаги поражения. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ лечения гнойных ран мягких тканей,отличающийся тем, что в края и дно раны инъекционно вводят заранее приготовленные в стерильных условиях аутологичные эритроцитарные фармакоциты с разовой дозой антибиотика цефтриаксон и цитокинового препарата интерлейкин-1 с послойным ушиванием раны с наложением первичных швов на кожу с последующей обработкой в послеоперационном периоде краев раны аутологичными эритроцитарными фармакоцитами, содержащими разовую дозу цефтриаксона и цитокинового препарата (интерлейкин-1) через 24 часа и 48 часов после первого введения однократно в сутки.