Пятивалентная инактивированная вакцина против дерматомикозов сельскохозяйственных животных

(51) 61 39/116 (2006.01) 12 1/14 (2006.01) 61 31/10 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ животных, включающая антигены штаммов грибов-0320,-0321 и их ресуспензирование в солевом растворес добавлением гидроокиси алюминия и дистиллированной воды, что она дополнительно содержит антигены штаммов грибов 0319,-0322,-0316, химически чистый глицерин 98 и физиологический раствор при следующем соотношений компонентов антиген из штамма-0316(200-250 млн/см 3 микроконидии) 10,0-14,0 гель гидрата окиси алюминия 8,0-12,0 химически чистый глицерин 98 8,0-12,0 физиологический раствор остальное.(72) Умитжанов Мынбай Бижанов Болат Рахметович Боранбаева Райхан Султанмуратовна Арысбекова Алтынай Танирбергеновна(73) Дочернее государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научно-исследовательский ветеринарный институт Республиканского государственного предприятия на праве хозяйственного ведения Научно-производственный центр животноводства и ветеринарии Министерства сельского хозяйства Республики Казахстан(54) ПЯТИВАЛЕНТНАЯ ИНАКТИВИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ДЕРМАТОМИКОЗОВ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к области биотехнологии, микологии, микробиологии, иммунологии, а именно противомикологических вакцин и может быть использовано для активной профилактики дерматомикозов крупного и мелкого рогатого скота, верблюдов, лошадей и кроликов. Технический результат, обеспечиваемый изобретением, выражается в получении стабильной,безвредной и высокоэффективной инактивированной вакцины против пяти видов возбудителей дерматомикозов. Пятивалентная инактивированная вакцина против дерматомикозов сельскохозяйственных 20068 Изобретение относится к области биотехнологии, микологии, микробиологии, иммунологии, а именно противомикологических вакцин и может быть использовано для активной профилактики дерматомикозов крупного и мелкого рогатого скота, верблюдов, лошадей и кроликов. Известна бивалентная вакцина против дерматомикозов сельскохозяйственных животных, включающая антигены штаммов грибов,и их ресуспензирование в солевом растворес добавлением гидроокиси алюминия и дистиллированной воды Патент Российской Федерации 02084241, кл. А 61 К 39/00, 1997. Недостатком указанной вакцины является, то,что она защищает от малого количества видов возбудителей дерматомикозной инфекции сельскохозяйственных животных. Задачей изобретения является повышение иммуногенности вакцины и расширение диапазона эффективности специфической профилактики и лечения дерматомикозов сельскохозяйственных животных к разным видам грибов рода . Технический результат, обеспечиваемый изобретением, выражается в получении стабильной,безвредной и высокоэффективной инактивированной вакцины против пяти видов возбудителей дерматомикозов. Пятивалентная инактивированная вакцина против дерматомикозов сельскохозяйственных животных, включающая антигены штаммов грибов-0320,-0321 и их ресуспензирование в солевом растворес добавлением гидроокиси алюминия и дистиллированной воды она дополнительно содержит антигены штаммов грибов 0319,-0322,-0316, химически чистый глицерин 98 и физиологический раствор при следующем соотношений компонентов антиген из штамма-0316(200-250 млн/см 3 микроконидии) 10,0-14,0 гель гидрата окиси алюминия 8,0-12,0 химически чистый глицерин 98 8,0-12,0 физиологический раствор остальное. Штаммы грибов 0316,-0319,-0320,2-0321,-0322,используемые для изготовления пятивалентной инактивированной вакцины против дерматомикозов сельскохозяйственных животных, депонированы в лаборатории Музей культур микроорганизмов ДГП Научно-исследовательский ветеринарный институт (КазНИВИ) и обладают следующими свойствами. Штамм гриба 0316. Морфологические признаки. Молодые клетки штамм гриба окрашивается грамположительно,мицелий ровный, ветвящийся, шириной 0,6-3 мкм,встречаются спиралевидные и кольцевидные окончания гиф. Микроконидии диаметром 2-4 мкм размер макроконидии - 5-10 х 30-45 мкм артроспор отсутствуют хламидиоспоры единичные или отсутствуют. Штамм гриба 0316 имеет неокрашенный ровный, ветвистый,септированный мицелий, распадающихся на фрагменты, терминальные гифы иногда образуют спирали (обычно до 5-х завитков). Микроконидии многочисленные, круглые, реже грушевидные и удлиненные. На сусло-агаре штамм образует хорошо развитые белые, плоские, мучнистые колонии с ровным краем. Макроконидии немногочисленные, с закругленными концами или отсутствуют. Культуральные свойства. На сусло агаре к 14-му дню формируются колонии белые, желтоватые,розоватые, плоские, ровные, мучнистые, зернистые или бархатистые, растущий край розовый или звездчатый, обратная сторона колонии желтоватая или красно-коричневая, колония покрывает всю поверхность питательной среды. Молодые колонии белые, с возрастом слегка желтеют. Встречаются приподнятые колонии, представленные в основном белым воздушным мицелием. Культура испытывает потребность в витаминах, аминокислотах и минеральных веществах для увеличения роста и спорообразования. Спорообразования. Максимальный уровень спорообразования на сусло-агаре 430,0 млн/см 3. Аэроб. Оптимальная скорость роста при температуре 26-28 С, рН 7,2-7,4. Особенности ультраструктуры. Мицелий ровный ветвящийся диаметром от 0,6-3,0 мкм, встречается спиралевидные и кольцевидные окончания гиф,имеет завитки до 4-5 раз. Микроконидии многочисленные круглые или грушевидные диаметром до 5 мкм, макроконидии немногочисленные с закругленными концами,удлиненно-овальные длиной до 45 мкм разделенный от 3 до 5 клеток. Хламидоспоры редкие, округлые диаметром до 10 мкм. Артроспоры отсутствуют. Биохимические свойства. Ферментативная активность гриба в отношении белков, углеводов и жиров более яркая, чем у других видов дерматофитов. Антигенные свойства. На введение культуры штамма-0316 в организме кроликов образуются специфические агглютинины в титрах 140-11280. 20068 Безвредность. Штамм гриба-0316 слабо реактогеннен для кроликов при внутримышечном введении. У привитых животных спустя 14 дней на месте инъекции развивается специфически локализованный, поверхностный очажок диаметром 1,0-2,0 см, который самопроизвольно излечивается в течение последующих 12-15 дней. Иммуногенность. При двукратном внутримышечном введении штамма-0316 в дозе 30 х 106 микроконидии,создается напряженный иммунитет у кроликов к последующему заражению трихофитией, продолжительностью не менее 24 мес. Реверсабельность и реактогенность. Штамм гриба-0316 отличается от эпизоотических штаммов слабой вирулентностью,высокой спорогенностью и активностью при внутримышечном введении животным. Стабильность штамма при пассировании. Основные биологические свойства штамма гриба-0316 стабильно сохраняются на протяжении 5 лет в лиофильно высушенном состоянии (защитная среда обезжиренное молоко) и свыше 6 мес при хранении в нативном состоянии(засеянных на пробирки с сусло-агаром) при температуре 2-8 С. После растворения из лиофилизированного состояния физиологическим 0,85 раствором хлористого натрия при рН 7,4 гриб-0316 сохраняет биологическую активность при температуре 26-28 С в течение 6 часов, а при 4 С - 3 сут. Маркерные признаки штамма-0316. Физиологические - хемогетеротроф. Биохимические - из углеводов постоянно и хорошо усваивает сахарозу. Серологические - в реакциях РСК и РНГА титры антител составляет от 140 11280. Патогенные свойства. Штамма-0316 патогенен для диких,домашних и лабораторных животных. Легко инокулируется при втирании культур и патологического материала в кожу, вызывая через 45 дней воспалительный процесс с экссудацией,различной толщины корками, сдираемыми животными при сильном зуде очагов поражений. Втирание менее патогенных штаммов сопровождается более легкими, скоропреходящими поражениями, с незначительным шелушением и покраснением на месте втирания. Штамм гриба-0319. Культуральные свойства. Культуры гриба медленно растущие, рост колоний заметен в течение 24 ч после посева, на 4-5-й день начиналось образование типичных канделябров и рогов северного оленя, через 7 дней гриб разрастается по всему объему среды. Первичные культуры развивается очень медленно, к 30-му дню формируется сероватые, плоские, плотносросшиеся с субстратом и глубокими отпрысками в питательную среду колонии диаметром от 7 до 10 мм. Форма колонии ровная,бархатистая концентрическими кругами. Размер колонии достигает от 25 до 40 мм. Цвет колонии бежевый,возвышенный, бугристый, складчатый. Обратная сторона колонии окрашена в коричневый цвет. Обладает полиморфизмом. В питательную среду выделяет коричневый пигмент. Гифы разной ширины (от 1,6 до 9 мм), которая преобладают широкий неравномерно утолщенной ветвящийся мицелий. Часто можно обнаружит ветвление конечных гиф в виде рогов северного оленя. При созревании культур образуются цепочки артроспор(6-18 мкм), а затем обильные хламидоспоры (6-17 мкм). Очищенные культуры гриба на питательных средах увеличивают энергию роста и способствуют спорообразованию. Степень развития мицелия приходится на 18-21 день. Размеры макроконидии от 16 до 50 мкм, а микроконидии - значительно варьируют в размерах 2,5-5,0 х 3,0-10,0 мкм. Биохимические свойства. Штамм гриба-0319 КазНИВИ 3 не испытывают потребности в витаминах для роста и спорообразования. Никатиновая, фолиевая кислоты,тиамин, придоксин, рибофлавин, цианкобаламин не стимулируют развитие культур данного штамма. Сероводород и индол не образуют. Антигенные свойства. На введения культуры штамма в организме верблюжат, кроликов и морских свинок образуются специфические агглютинины в титрах 140-11280. Маркерные признаки. Биохимические - на сусло агаре при рН 7,2-7,4 до концентрации 200-250 млн/см. Макроконидии отсутствуют или единичные,удлиненно-овальные. В очищенных культурах с увеличением микроконидии образуются в небольшом количестве макроконидии (размером от 16 до 50 мкм). Микроконидии отсутствуют или единичные, значительно варьируют в размерах 2,55,0 х 3,0-10,0 мкм. Физиологические - хемогетеротроф. По отношению к кислороду аэроб. Не обладает метаболическими свойствами. Иммунохимические - в реакциях РСК и РНГА титры антител составляет от 140 до 1 1280 отличается от эпизоотических штаммов слабой вирулентностью, высокой спорогенностью и активностью при внутримышечном введении. Патогенные свойства. Штамм гриба-0319 КазНИВИ 3 патогенен для верблюдов, человека и лабораторных животных,обладают цитопатогенным действием на культуры клеток. Иммуногенность. При двукратном внутримышечном введении штамма в дозе 20 х 106 микроконидии создают напряженный иммунитет у привитых верблюжат, кроликов и морских свинок к последующему заражению трихофитией с продолжительностью не менее 12 месяцев. Безвредность. Штамм гриба-0319 КазНИВИ 3 безвреден для верблюжат, кроликов и морских свинок в дозе 20 х 106 микроконидии при внутримышечном введении. Реактогенность. Штамм гриба-0319 КазНИВИ 3 слабореактогенен 3 20068 для верблюдов при внутримышечном введении. У привитых животных спустя 2-3 недели на месте инъекции развивается специфически локализованный поверхностный очажок диаметром 1,0-2,0 см, который самопроизвольно излечивается в течение 2-х недель. Спророобразование. Максимальный уровень спорообразования на сусло-агаре 200-250 млн/см 3. Реверсабельность и реактогенность. Штамм гриба-0319 КазНИВИ 3 отличается от эпизоотических изолятов слабой вирулентностью, отсутствием заражения при контакте между животными, высокой активностью при внутримышечном введении животным. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма гриба-0319 КазНИВИ 3 стабильно сохраняются на протяжении 3-4 лет при условии редких пересевов (2-3 раза в год) не ослабляет патогенные свойства. Сохраняемость в лиофильно-высушенном состоянии в присутствии жидкого обезжиренного молока штамм гриба-0319 КазНИВИ 3 не снижает активности при температуре 2-10 С в течение 12 месяцев в нативном состоянии в течение 6 месяцев, в замороженном при минус 40 С в течение 6 месяцев, при 20 С ниже в течение 2 года. После растворения из лиофилизированного состояния физиологическим раствором хлорида натрия с рН 7,2-7,4 гриб сохраняет биологическую активность при температуре 28-30 С в течении 5 час, при 4 С - 3 сут. Штамм гриба-0320. Культуральные свойства. Культуры гриба медленно растущие. Колония (на средах с тиамином, инозитом растет лучше) возникает в виде врастающего в субстрат сероватого (желтоватого) кожистого бугорка на 7-12-й день, лишь к 30-40-му дню колония достигает диаметра 15-20 мм. По периферии колонии часто имеется мучнистость. Мицелий широкий,ровный,септированный(диаметром 3-4 мкм), часто ракетковидный,довольно скоро распадаются на цепочки артроспор(немногочисленные или отсутствуют, диаметром 3,5-8 мкм), образует концевые и интеркаларные (на 3-й неделе) хламидоспоры (диаметром 6-9 мкм). Иногда встречаются ветви, напоминающие рога оленя. Макро- и микроконидии возникают обычно на средах с добавлением дрожжевого экстракта. Микроконидии немногочисленные, овальные,грушевидные, палочковидные, дубинкообразные,тонкие, размерами от 3 до 5 мкм (чаще 1-3 х 2-8 мкм). Макроконидии немногочисленные или отсутствуют, неправильной формы, удлиненные, тупоконечные и встречаются совсем редко в виде коротких 3-5-клеточных веретен с тонкой гладкой стенкой, со слегка закругленными концами размером 3,5-8 х 2050 мкм. Биохимические свойства. Штамм гриба-0320 КазНИВИ 4 испытывают потребности в витаминах, тиамине, инозитоле,аминокислоте, микроэлементах, дрожжевом экстракте для роста и спорообразования. 4 Сероводород и индол не образуют. Антигенные свойства. На введения культуры штамма в организме телят, кроликов и морских свинок образуются специфические агглютинины в титрах 140-11280. Маркерные признаки. Биохимические - на сусло агаре при рН 7,2-7,4 до концентрации 250-350 млн/см 3. Микроконидии немногочисленные, овальные,грушевидные, палочковидные, дубинкообразные на средах с добавлением дрожжевого экстракта встречается размеры от 3 до 5 мкм (чаще 1-3 х 2-8 мкм). Макроконидии немногочисленные или отсутствуют, неправильной формы, удлиненные встречаются совсем редко в виде коротких 3-5-клеточных веретен с тонкой гладкой стенкой, со слегка закругленными концами размером 3,5-8 х 20-50 мкм. Физиологические - хемогетеротроф. По отношению к кислороду аэроб. Не обладает метаболическими свойствами. Иммунохимические - в реакциях РСК и РНГА титры антител составляет от 140 до 1 1280 отличается от эпизоотических штаммов слабой вирулентностью, высокой спорогенностью и активностью при внутримышечном введении. Патогенные свойства. Штамм гриба-0320 КазНИВИ 4 патогенен для крупного рогатого скота (зооантропофил), человека и лабораторных животных. Иммуногенность. При двукратном внутримышечном введении штамма в дозе 20 х 10 микроконидии создают напряженный иммунитет у привитых телят, кроликов и морских свинок к последующему заражению трихофитией с продолжительностью не менее 12 месяцев. Безвредность. Штамм гриба-0320 КазНИВИ 4 безвреден для телят, кроликов и морских свинок в дозе 20 х 10 микроконидии при внутримышечном введении. Реактогенность. Штамм гриба-0320 КазНИВИ 4 слабореактогенен для телят при внутримышечном введении. У привитых животных спустя 2-3 недели на месте инъекции развивается специфически локализованный поверхностный очажок диаметром 1,5-2,0 см, который самопроизвольно излечивается в течение 2-х недель. Спророобразование. Максимальный уровень спорообразования на сусло-агаре 200-250 млн/см 3. Реверсабельность и реактогенность. Штамм гриба-0320 КазНИВИ 4 отличается от эпизоотических изолятов слабой вирулентностью, отсутствием заражения при контакте между животными, высокой активностью при внутримышечном введении животным. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма гриба-0320 КазНИВИ 4 стабильно сохраняются на протяжении 3-4 лет при условии редких пересевов (2-3 раза в год) не ослабляет патогенные свойства. 20068 Сохраняемость в лиофильно-высушенном состоянии в присутствии жидкого обезжиренного молока штамм гриба-0320 КазНИВИ 4 не снижает активности при температуре 2-10 С в течение 12 месяцев в нативном состоянии в течение 6 месяцев, в замороженном при минус 40 С в течение 6 месяцев,при 20 С ниже в течение 2 года. После растворения из лиофилизированного состояния физиологическим раствором хлорида натрия с рН 7,2-7,4 гриб сохраняет биологическую активность при температуре 28-37 С в течении 5 час, при 4 С - 3 сут. Штамм гриба-0321. Культуральные свойства. Быстрый рост культуры наблюдаются на среде МПГА, а на среде сусло - агар культуры растет медленно. Спороношение слабое, усиливается в последующих пересевах, особенно при пересевах взвесью. На 7-й день колонии рыхлые восковидные размером от 10 до 20 мм (на 20-25-й день все параметры одинаковые, только размер колонии увеличивается от 20 до 50 мм, белые пушистые). Микроконидии имеют разнообразную форму и размеров округлую, овальную, грушевидную,палочковидную с закругленными концами (2,2-10 мкм). Макроконидии от 1 до 4-х клеточные длиной от 15 до 70 мкм часто сохраняется ножка - гифа,прикрепляющая макроконидию к мицелию. Колонии восковидные, беловато-желтоватого цвета,заметно формирование терминальных хламидоспор(правильной округлой формы), изредка концевые или интеркалярные (10-22 мкм), погруженный мицелий не формируется. Для роста колонии не требуются добавление тиамина, дрожжевого экстракта (заменяющий инозит) и других микроэлементов к питательной среде. Артроспоры округлые или многогранные, с закругленными концами размером 4,0-11,7 мкм. Мицелий в основном толстый, а у некоторых мицелий прямой в виде тонкой нити (не септированный или перегородками толщиной от 3 до 6 мкм). Возбудители трихофитии овец обладает сильным полиморфизмом. Биохимические свойства. Штамм гриба 0321 КазНИВИ 5 не испытывают потребности в витаминах, аминокислоте, микроэлементах, для роста и спорообразования. Культивирует при температуре 28-30 С в течение 16-18 дней. В эти дни наблюдается ускорение лагфазы и усиливается накопление биомассы (у эталонного штамма за 21 день). Колония восковидный, беловато-желтого цвета, растущий край ровный или лучистый,выделяют желтый пигмент. Из числа углеводов плохо усваивается сахароза. Факторами роста является тиамин, пантотеновая, парабензойная кислоты и др. Элементы питания делятся на макрои микроэлементы. После азота, углерода, водорода,кислорода наиболее важными микроэлементами является фосфор и сера. Они участвуют почти во всех биохимических реакциях в живых организмах как энергодающие системы или акцепторы в процессах биосинтеза (при конденсации, циклизации, окислении, восстановлении и т. д., являясь компонентами коферментов). Сероводород и индол не образуют. Антигенные свойства. На введения культуры штамма в организме овец и коз, кроликов и морских свинок образуются специфические агглютинины в титрах 140-11280. Маркерные признаки. Биохимические - на сусло агаре при рН 7,2-7,4 до концентрации 250-350 млн/см 3. Микроконидии имеют разнообразную форму и размеров округлую, овальную, грушевидную,палочковидную с закругленными концами (2,2-10 мкм). Макроконидии от 1 до 4-х клеточные длиной от 15 до 70 мкм часто сохраняется ножка - гифа,прикрепляющая макроконидию к мицелию. Физиологические - хемогетеротроф. По отношению к кислороду аэроб. Не обладает метаболическими свойствами. В минеральном питании для основного обмена грибов, необходимо 17-18 элементов в частности азот, углерод,кислород, водород, сера, фосфор, калий, магний,железо, медь, цинк, марганец, молибден, кальций,кобальт, галлий, бор, скандий, ванадий. Иммунохимические - в реакциях РСК и РНГА титры антител составляет от 140 до 1 1280 отличается от эпизоотических штаммов слабой вирулентностью, высокой спорогенностью и активностью при внутримышечном введении. Патогенные свойства. Штамм гриба-0321 КазНИВИ 5 патогенный для мелкого рогатого скота (овец и коз) и лабораторных животных. Иммуногенность. При двукратном внутримышечном введении штамма в дозе 20 х 106 микроконидии создают напряженный иммунитет у привитых овец и коз, кроликов и морских свинок к последующему заражению трихофитией с продолжительностью не менее 12 месяцев. Безвредность. Штамм гриба-0321 КазНИВИ 5 безвреден для овец и коз, кроликов и морских свинок в дозе 20 х 106 микроконидии при внутримышечном введении. Реактогенность. Штамм гриба-0321 КазНИВИ 5 слабореактогенен для овец и коз при внутримышечном введении. У привитых животных спустя 2-3 недели на месте инъекции развивается специфически локализованный поверхностный очажок диаметром 1,0-1,5 см, который самопроизвольно излечивается в течение 14 сут. Спророобразование. Максимальный уровень спорообразования на сусло-агаре 250-350 млн/см . Реверсабельность и реактогенность. Штамм гриба-0321 КазНИВИ 5 отличается от эпизоотических изолятов слабой вирулентностью,отсутствием заражения при контакте между 5 20068 животными, высокой активностью при внутримышечном введении. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма гриба 0321 КазНИВИ 5 стабильно сохраняются на протяжении 5 лет при условии редких пересевов (23 раза в год) не ослабляет патогенные свойства. Сохраняемость в лиофильно-высушенном состоянии в присутствии жидкого обезжиренного молока штамм гриба-0321 КазНИВИ 5 не снижает активности при температуре 2-10 С в течение 12 месяцев в нативном состоянии в течение 6 месяцев, в замороженном при минус 40 С в течение 6 месяцев, при 20 С ниже в течение 2 года. После растворения из лиофилизированного состояния физиологическим раствором хлорида натрия при рН 7,2-7,4 гриб сохраняет биологическую активность при температуре 28-30 С в течении 5 час, при 4 С - 3 сут. Штамм гриба-0322. Культуральные свойства. Молодые 7-дневные колонии совершенно гладкие, ровные. Колония на средах с триптофаном или никотиновой кислотой растет быстро, к 10-му дню достигает диаметра 2060 мм, на среде Саубуро - 10-15 мм. После 10-14 дней становятся складчатыми, иногда с трещинами,бархатисто-пушистыми, беловатыми. Бахромчатые,погруженные в субстрат края колонии желтоватого цвета, иногда блестящие. Обратная сторона колоний желтовато-оранжевая в зрелых и старых культурах розовато-красноватая. Мицелий септированный,ветвящиеся, шириной до 3,5 мкм, редко завитки(спирали и кольцевидные) окончания гиф и интеркалярными хламидоспорами диаметром 3,5-10 х 3-4 мкм. Микроконидии многочисленные, округлые или продолговатые, овальные, грушевидные, нередко булавовидные на тонких коротких ножках расположены по бокам мицелия. Средние размеры их 3-7 х 2-3 мкм. Макроконидии встречается редко по форме они слегка булавовидные, удлиненно-овальные с тупым наружным концом, 1-4-клеточные (перегородками),тонкостенные, гадкие размером 3-7 х 15-45 мкм. Многочисленные хламидоспоры встречаются в старых культурах и достигают от 12 до 16 мкм в диаметре, единичные. Артроспоры отсутствуют. Биохимические свойства. Штамм гриба-0322 КазНИВИ 6 хорошо растет в присутствии триптофана, никотинамида,никотиновой кислоты или ее эквивалентов,имеющихся, в лошадином волосе, избирательно поражаемом данным грибом. На волосах других многочисленных животных гриб развивается лишь при условии добавления к ним раствора никотиновой кислоты. Культивирует при температуре 28-35 С в течение 10-14 дней. В этих условиях наблюдается ускорение лагфазы и усиливается накопление биомассы (у эталонного штамма за 18 сут). Бахромчатые, погруженные в субстрат края колонии желтоватого цвета, иногда 6 блестящие. Обратная сторона колоний желтоватооранжевая в зрелых и старых культурах розоватокрасноватая. Из числа углеводов плохо усваивается сахароза. Факторами роста является триптофан,никотинамида, никотиновой кислоты и др. Элементами питания является азот, углерод,водород,кислород,а наиболее важные микроэлементы -фосфор и сера. Все эти микро- и макроэлементы участвуют во всех биохимических реакциях происходящих в клетках. Сероводород и индол не образуют. Антигенные свойства. На введения культуры штамма Е организме лошадей, кроликов и морских свинок образуются специфические агглютинины в титрах 140-11280. Маркерные признаки. Биохимические - на сусло агаре при рН 7,2-7,4 до концентрации 300-350 млн/см 3. Микроконидии многочисленные, округлые (продолговатые), овальные, грушевидные, нередко булавовидные на тонких коротких ножках расположены по бокам мицелия. Средние размеры их 3-7 х 2-3 мкм. Макроконидии встречается редко по форме они слегка булавовидные, удлиненно - овальные с тупым наружным концом,1-4-клеточные(перегородками), тонкостенные, гадкие размером 37 х 15-45 мкм. Физиологические - хемогетеротроф. По отношению к кислороду аэроб. Не обладает метаболическими свойствами. В минеральном питании для основного обмена грибов, необходимо азот,углерод, кислород, водород, сера, фосфор, калий,магний, железо, медь, цинк, марганец, молибден,кальций, кобальт, галлий, бор, скандий, ванадий. Иммунохимические - в реакциях РСК и РНГА титры антител составляет от 140 до 1 1280 отличается от эпизоотических штаммов слабой вирулентностью, высокой спорогенностью и активностью при внутримышечном введении. Патогенные свойства. Штамм гриба-0322 КазНИВИ 6 патогенный для лошадей, свиней и лабораторных животных. Иммуногенность. При двукратном внутримышечном введении штамма в дозе 20 х 106 микроконидии создают напряженный иммунитет у привитых лошадей, кроликов и морских свинок к последующему заражению трихофитией с продолжительностью не менее 12 месяцев. Безвредность. Штамм гриба-0322 КазНИВИ 6 безвреден для лошадей, кроликов и морских свинок в дозе 20 х 106 микроконидии при внутримышечном введении. Реактогенность. Штамм гриба-0322 КазНИВИ 6 слабореактогенен для лошадей при внутримышечном введении. У привитых животных спустя 2-3 недели на месте инъекции развивается специфически локализованный поверхностный очажок диаметром 1,0-1,5 см, который самопроизвольно излечивается в течение двух недель. Спророобразование. Максимальный уровень спорообразования на сусло-агаре 300-350 млн/см 3. 20068 Реверсабельность и реактогенность. Штамм гриба отличается от эпизоотических изолятов слабой вирулентностью, отсутствием заражения при контакте между животными, высокой активностью при внутримышечном введении. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма гриба-0322 КазНИВИ 6 стабильно сохраняются на протяжении 5 лет при условии редких пересевов (2-3 раза в год) не ослабляет патогенные свойства. Сохраняемость в лиофильно-высушенном состоянии в присутствии жидкого обезжиренного молока штамм гриба-0322 КазНИВИ 6 не снижает активности при температуре 2-10 С в течение 12 месяцев в нативном состоянии в течение 6 месяцев, в замороженном при минус 40 С в течение 6 месяцев,при 20 С ниже в течение 2 года. После растворения из лиофилизированного состояния физиологическим раствором хлорида натрия при рН 7,2-7,4 гриб сохраняет биологическую активность при температуре 28-35 С в течении 5 час, при 4 С - 3 сут. Пример 1. Для получения пятивалентной инактивированной вакцины против дерматомикозов сельскохозяйственных животных берут 18 сут культуру штамма 0316, 18 сут культуру штамма-0319, 21 сут культуру штамма-0320, 21 сут культуру штамма-0321, 16 сут культуру штамма-0322, и выращивают раздельно в матровых колбах на сусло-агаре при рН 7,2-7,4 и температуре 26-28 С в течение 21 дня. Выращенную грибницу каждой культуры в условиях асептики снимают с поверхности питательной среды стеклянными грибными скребками и помещают в стерильные банки. На каждый собранный вакцинный штамм добавляем по 300,0 см стерильный физиологический раствор. Грибную массу каждого штамма гомогенизируют в миксерах,затем с помощью стерильного физиологического раствора, полученные грибные гомогенаты 5-и штаммов ресуспензируют до концентрации 200-250 млн/см и соединяют в равных объемах,затем подвергают разрушению ультразвуком на УЗДН-1 частотой волн 22 кГц,интенсивностью 100 Вт/см в течение 30 мин - 1 часа. После разрушения гомогенная масса помещается в холодильник при температуре 4-8 С в течение 1 сут. Затем берется проба для микроскопического анализа на наличие не разрушенных спор с последующим посевом на питательные среды. После этого берутся 3 пробы для бактериологического и микологического контроля в дозе 1,0 см 3. После выращивания в термостате к грибной суспензии антигена на солевом растворедобавляют гель гидрата окиси алюминия (8-12) по сухому веществу. Посуточную смесь ставят в термостат до 1 сут и перемешивают 3-5 раз. После этого к вакцине добавляют химически чистый глицерин 98 из расчета 8-12 от объема гомогената. Все тщательно перемешивают,разливают в стерильные флаконы объемом 10,0,20,0 и 40,0 см 3, закрывают их резиновыми пробками,завальцовывают алюминиевыми колпачками и этикетируют. Пример 2. Пятивалентную инактивированную вакцину против дерматомикозов сельскохозяйственных животных используют внутримышечно(подкожно) двукратно с интервалом 14 дней при соотношений компонентов антиген из штамма- 0316(200-250 млн/см 3 микроконидии) 10,0 гель гидрата окиси алюминия 8,0 химически чистый глицерин 98 8,0 физиологический раствор остальное Пример 3. Пятивалентную инактивированную вакцину против дерматомикозов сельскохозяйственных животных используют так же, как в примере 2 при соотношении компонентов антиген из штамма-0316(200-250 млн/см 3 микроконидии) 12,0 гель гидрата окиси алюминия 10,0 химически чистый глицерин 98 10,0 физиологический раствор остальное Пример 4. Пятивалентную инактивированную вакцину против дерматомикозов сельскохозяйственных животных используют так же, как в примере 2 при соотношении компонентов антиген из штамма-0316(200-250 млн/см 3 микроконидии) 14,0 гель гидрата окиси алюминия 12,0 химически чистый глицерин 98 12,0 физиологический раствор остальное Готовая пятивалентная инактивированная вакцина против дерматомикозов сельскохозяйственных животных представляет собой жидкость коричневато-желтого цвета. Вакцина сохраняет свои биологические свойства при условии хранения в закрытых сухих, темных помещениях при температуре 2-10 С. Срок годности вакцины 12 мес. со дня окончании разлива вакцины. Пример 5. Для изучения иммуногенной активности пятивалентной инактивированной вакцины против дерматомикозов сельскохозяйственных животных берут пять групп животных, в каждой из которых находятся по пять видов животных(верблюжата, телята, жеребята, ягнята, кролики). Каждому животному опытной группы вводят внутримышечно по 1,0 см 3 ресуспензированной пятивалентной инактивированной вакцины в область крупа дважды, с интервалом 14 дней. Спустя 25-28 дней после второй иммунизации, все 25 голов животных пяти опытной группы, а также по 3 головы из пяти контрольных групп (не иммунизированных животных) экспериментально заражают вирулентными культурами всех пяти видов культур из рода . В течение 30-35 дней за опытными и контрольными группами животных ведут наблюдение, а клинический осмотр животных осуществляют через каждые 3-5 дней. От животных с клиникой трихофитии отбирают патологический материал, при микроскопии которого и высевы на питательные среды уточняют визуально полученный диагноз заболевания данных животных дерматомикозами. При обнаружении у животных трихофитии, а также подтверждения диагноза,животные подвергают двух и трехкратному введению терапевтической дозы жидкой инактивированной пятивалентной вакцины в тех же интервалах, что и профилактические дозы данного биологического препарата. Результаты проведенной работы учитываются спустя 25-30 дней после второй иммунизации заболевших животных терапевтической дозой пятивалентной инактивированной вакциной против дерматомикозов сельскохозяйственных животных. Результаты иммуногенной активности (профилактической и терапевтической дозы) пятивалентной инактивированной вакцины против дерматомикозов сельскохозяйственных животных отражены в таблицах 1 и 2. Из таблиц 1 и 2 видно, что пятивалентная инактивированная вакцина против дерматомикозов сельскохозяйственных животных при ее проверке на иммуногенную активность проявила высокую профилактическую и терапевтическую эффективность, в том числе и при лечении заболевших животных с явной клинической формой трихофитии. Использование пятивалентной инактивированной вакцины против дерматомикозов сельскохозяйственных животных в ветеринарной практике позволит повысить эффективность мероприятий по профилактике и терапии сельскохозяйственных животных от разных видов возбудителей дерматомикозов сельскохозяйственных животных в Республике Казахстан. Таблица 1 Профилактическая эффективность пятивалентной инактивированной вакцины против дерматомикозов сельскохозяйственных животных Результаты опыта (количество заболевших животных при экспериментальном заражении вирулентными штаммами грибов родаНе Заболело заболело Диагноз Диагноз не подтвердился подтвердился Опытные группы (дважды иммунизированные животные) Верблюжата до 6 мес 5 5 Телята от 2 до 6 мес 5 5 Жеребята до 6 мес 5 5 Кролики до 6 мес 5 5 Ягнята до 6 мес 5 5 Контрольные группы (не иммунизированные животные) Верблюжата до 6 мес 3 3 2 1 Телята от 2 до 6 мес 3 3 3 Жеребята до 6 мес 3 3 3 Кролики до 6 мес 3 3 3 Ягнята до 6 мес 3 3 2 1 20068 Таблица 2. Проверка терапевтической эффективности пятивалентной инактивированной вакцины против дерматомикозов сельскохозяйственных животных Верблюжата до 6 мес Телята от 2 до 6 мес Жеребята до 6 мес Кролики до 6 мес Ягнята до 6 мес ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Пятивалентная инактивированная вакцина против дерматомикозов сельскохозяйственных животных, включающая антигены штаммов грибов,и их ресуспензирование в солевом растворес добавлением гидроокиси алюминия и дистиллированной воды,отличающаяся тем, что она дополнительно содержит антигены штаммов, грибов-0319,-0322,-0316, химически чистый глицерин 98 и физиологический раствор при следующем соотношении компонентов антиген из штамма-0316 Результаты исследования выздоровело не выздоровело 3 3 3 3 3(200-250 млн/см 3 микроконидии) гель гидрата окиси алюминия химически чистый глицерин 98 физиологический раствор