Регуляторы активности активированных нейтрофилов

(51)7 61 31/13, 61 31/136, 61 37/00, 61 31/135, 61 31/14 ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(54) РЕГУЛЯТОРЫ АКТИВНОСТИ АКТИВИРОВАННЫХ НЕЙТРОФИЛОВ(57) Производные аминоадамантана могут использоваться для регуляции и/или модуляции активности ранее активированных нейтрофиловили. При этом диапазон низких концентраций действует как повышающий активность, тогда как диапазон более высоких концентраций действует как понижающий активность. 8390 Изобретение относится к применению аминоадамантановых производных в качестве иммунорегуляторов, в частности, для регулирования и модулирования уже активированных нейтрофилов. Нейтрофилы, подкласс лейкоцитов, вовлечены в процессы иммунной защиты и другие реакции в кровеносной системе и окружающих тканях (,,, , 2 , 1984). Нейтрофилы могут активироваться экзогенными веществами, например, такими, как компоненты стенок клеток (промышленно производимым продуктом является Зимозан (. В связи с этим образуются реакционно-способные частицы кислорода в так называемом респираторном взрыве. На фиг. 1 показана упрощенная схема стимуляции нейтрофилов. После связывания лиганда (например, Зимозана А) со специфичным рецептором мембраны нейтрофила активируется гуанозинтрифосфат , который, в свою очередь, активирует специфичную к фосфатидил-инозитол-4,5 бифосфату (2) фосфолипазу С . Фосфолипаза С катализирует гидролиз фосфатидил-инозитол 4,5-бифосфата до инозитол-1,4,5-трифосфата (Р 3) и диацилглицерина . Инозитол-4,5-трифосфат стимулирует выделение ионов Са 2 из внутриклеточных запасов. Ионы Са 2, с диацилглицерином,активируют протеинкиназу С (РКС), которая фосфорилирует многие белки и таким путем активирует, в числе прочих, комплекс(восстановленный никотин-амидаденин-динуклеотилфосфат) и оксидазы. В свою очередь, комплекс -оксидаза катализирует реакцию. 2 О 22 Н,в которой образуются реакционно-способные кислородные частицы 2-. Хотя активированные нейтрофилы являются важными для функционирования иммунной защиты,в результате избыточных реакций, вызываемых в особенности реакционно-способными кислородными частицами, могут появляться симптомы заболевания, такие, как острые или хронические воспаления,или другие аллергические реакции. С другой стороны, активность нейтрофилов может быть слишком низкой или недостаточной для успешной иммунной защиты при наличии общего иммунодефицита, например, как это имеет место при СПИДе. Следовательно, существует потребность, в особенности с медицинской точки зрения, в возможности влиять на регулятивную и/или модулирующую активность нейтрофилови. В связи с этим, активность нейтрофилов нужно повышать или понижать в зависимости от показаний, т.е. нужно, чтобы ею можно было управлять произвольным образом. Следовательно, задачей настоящего изобретения является разработка средства для регулирования и/или модулирования активности нейтрофилов. Неожиданно, в настоящее время установлено,что определенные производные адамантана обладают регулятивным и/или модулирующим влиянием 2 на активность нейтрофилов. Настоящее изобретение связано с этим открытием. Решающее обстоятельство в связи с этим состоит в том, чтобы нейтрофилы уже были активированы другими стимуляторами. Сами по себе аминоадамантаны не проявляют какого бы то ни было активирующего влияния на нейтрофилы. Соответственно, указанная выше проблема решается путем применения производного аминоадамантана формулы 1 где 1, 2, 3 и 4 независимо выбраны из -56,-567, водорода, арила или гетероарила с кольцом вплоть до 7-членного, С 1-С 20-алкила, 1-С 20 алкенила и С 1-С 20-алкинила, где остатки алкил, алкенил и алкинил могут быть разветвленными, неразветвленными или циклизированными и необязательно замещенными галогеном, арилом или гетероарилом с кольцом вплоть до 7-членного, при условии, что, по меньшей мере, один из остатков 1,2, 3 и 4 представляет собой -56 или-567 и 5, 6 и 7 независимо выбраны из водорода, арила или гетероарила с кольцом вплоть до 7-членного,С 1-С 20-алкила, 1-С 20-алкенила и С 1-С 20-алкинила,где остатки алкил, алкенил и алкинил могут быть разветвленными, неразветвленными или циклизированными и необязательно замещенными галогеном,арилом или гетероарилом с кольцом вплоть до 7 членного, или 5 и 6 вместе с атомом азота образуют гетероциклическую группу с кольцом вплоть до 7-членного для регулирования активности уже активированных нейтрофилов. Известны производные аминоадаманта этого типа. Так, 1-аминоадамантаны описаны в 2219256, кл. А 61 К 27/00, 1973,2856393, кл. А 61 К 31/52, 1980,2232735, С 07 87/40 А 61 К 27/00, 1974.3450761 С 07 С 87/42, 1969, или 4122193 А 01 9/20, 1978. Получение соединений формулыобычно осуществляется известными методами, такими, как, например, алкилирование галогенадамантанов. Следующее затем дальнейшее галогенирование и алкилирование дает отдельные ди- и/или тризамещенные адамантаны. Патент ЕР 392 059 А 61 К 31/13, 1990, содержание которого недвусмысленным образом включено здесь для сведения, относится к получению аминоадамантанов. Производные аминоадамантана также уже использовались в фармацевтических целях. Так, в ЕР 392059 описывается применение производных аминоадамантана для лечения болезни Альцгеймера или повреждения клеток головного мозга в результате церебральной ишемии. В патенте 3450761 8390 описываются аминоадамантаны с противовирусной активностью. Происходит ли повышение или частичное или полное подавление активности нейтрофилов зависит от концентрации используемого производного аминоадамантана. Так, концентрации от 10-6 до 10-5 М обладают повышающим активность действием. Показано, что концентрация около 510-6 М особенно эффективна для повышения активности нейтрофилов, причем эта концентрация вполне может быть достигнутав плазме крови. В противоположность этому, в результате повышения концентрации аминоадамантана происходит торможение активности. Подходящая для этой цели концентрация составляет от 10-4 до 10-3 М. Изобретение включает производные адамантана, замещенные одной или несколькими аминогруппами, среди которых моноаминоадамантаны являются предпочтительными. Следовательно, подходящими соединениями формулыявляются те, в которых 1 представляет собой аминогруппу, например, такие, как 1-амино-3-этил-5,7-диметиладамантан а также соединения, в которых 1 представляет собой аминогруппу, а 3 и 4 представляют атом водорода, например, такие, как 1-амино-3 циклогексиладамантан 1-амино-3-этиладамантан. Предпочтительными производными адамантана являются 1-амино-3,5-диметиладамантан, 1 амино-3,5-диэтиладамантан и -замещенные соединения 1-Н-метиламино-3,5-диметиладамантан и соединение 1 этиламино-3,5-диметиладамантан. Особенно предпочтительным является 1-амино-3,5 диметиладамантан, называемый мемантин (, ). В работе , .,, ., , 1993, 50, описано лечение мемантином синдрома Деменса ( ). Как пояснялось выше, производные аминоадамантана, согласно настоящему изобретению, оказывают регулирующее влияние только на нейтрофилы, которые предварительно активированы или были стимулированы специальными активаторами. В качестве активаторов известны вещества природного происхождения, такие, как Зимозан, формил-Ме-е-Ре (-) или А 23187 (антагонист Са). Эти вещества могут применяться, если кто-либо намеревается провести специфичное и более сильное активирование нейтрофилов как,так и. Благодаря этому возможно обнаружение нейтрофилов в образце, например, в образце жидкости из организма, в частности в образце крови, даже в том случае, когда присутствует лишь малое количество нейтрофилов или когда их активность очень слаба. В связи с этим, в сочетании с производными аминоадамантана может присутствовать активатор. Степень активации нейтрофилов,вызванной активатором, увеличивается путем одновременного добавления производного аминоадамантана. Следующей областью применения является улучшение иммунной защиты для пациентов с различными формами иммунной недостаточности, в особенности для пациентов со СПИДом. В таком случае может вводиться фармацевтическая композиция, которая содержит производное аминоадамантана, согласно изобретению, необязательно в сочетании с активатором нейтрофилов. Кроме того, возможно применение при следующих заболеваниях агрануломатоз , грануломатоз Вегенера и/или накопление гликогена. Само собой разумеется, нейтрофилы могут также активироваться вследствие естественной иммунной реакции организма, как, например, реакция на различные иммуногены и аллергические реакции,воспаления и ревматические симптомы, инициированные вследствие избыточной реакции. В таких случаях активность нейтрофилов может ослабляться аминоадамантаном в повышенной до подходящего уровня концентрации, и пациент может получить облегчение. Содержащие аминоадамантан лекарственные препараты могут особенно эффективно бороться с состояниями внешнего и внутреннего воспаления, например, колена, тазобедренного сустава или челюсти, а также с аутоиммунными заболеваниями. Другой областью применения является лечение паразитарных заболеваний, таких, как лейшманиоз. В связи с этим, обеспечение подходящей концентрации производных аминоадамантана для регулирования и модулирования активности нейтрофилов путем выбора подходящей дозы и формы введения оставляется на усмотрение лечащего врача. В зависимости от области применения здесь возможны парентеральные формы, например, внутривенные или пероральные формы введения подходящими являются также формы длительного действия. Изобретение включает также сочетания производных аминоадамантана, согласно изобретению, а также их фармацевтически приемлемых солей, в особенности кислотно-аддитивных солей в качестве примера здесь должны быть названы гидрохлориды, гидробромиды, сульфаты, ацетаты, сукцинаты, тартраты или соединения присоединения фумаровой, малеиновой, лимонной или фосфорной кислот. Фармацевтические композиции могут дополнительно содержать активатор нейтрофилов, в зависимости от круга показаний. Для приготовления состава используются обычные фармацевтически приемлемые носители и адъюванты. Следующий пример иллюстрирует при помощи определенного соединения - мемантина - зависимость влияния производных аминоадамантана на повышение или подавление активности. ПРИМЕР Принцип измерения Определение активности стимулированных нейтрофилов при различных концентрациях мемантина проводили путем измерения с применением хемилюминесценции. Активированные нейтрофилы 3 8390 образуют реакционно-способные кислородные частицы при респираторном взрыве, которые регистрируются в виде очень слабой хемилюминесценции так называемый низкий уровень сверх слабой хемилюминесценции. Чтобы повысить выход фотонов, в качестве сенсибилизатора добавляют люминол (зависимая от индикатора хемилюминесценция). Люминол представляет собой циклический гидразид,который может окисляться реакционно-способными кислородными частицами до диазохинона. При нуклеофильной атаке аниона перекиси водорода этот диазохинон далее превращается в агидроксигидропероксид, который при испускании света разлагается до аминофталата. Состав для реакции нейтрофилы 106 ЗФР-буфер, рН (7,4) до 250 мл люминол 80 мМ мемантин изменяемая концентрация стимулирующее средство зимозан 2,5 мг/мл или РМА 1 мМ или А 23 187 20 мМ или 10 мМ ЗФР - забуференный фосфатом физиологический раствор РМА - Форбол-Мистрат-Ацетат (-) Аналогичные реакционные составы могут быть приготовлены с другими производными адамантана. Измерение измерение проводили при помощи высокочувствительных фотоумножителей с низким уровнем шума, которые преобразуют фотоны на фото-катоде в первичные электроны и затем многократно усиливают последние до сигнала в виде электрического импульса. Реакцию начинали при помощи стимулятора и проводили измерения без инкубационного периода в течение 40 минут ( 80 циклов). Результаты для нейтрофилов, которые были активированы естественными стимуляторами (Зимозан А А 23187 -формил) исходный показатель(, относительные световые единицы) может быть дополнительно повышен при помощи 10-6 М метамина (для Зимозана А приблизительно на 90 для А 23187 приблизительно на 60 для - приблизительно на 78 от исходной стимуляции) (фиг. 2-4). Это предполагает повышенный респираторный взрыв и повышенную активность фагоцитоза. Эта реакция не происходит при стимуляции токсичным соединением Форбол-Мистрат-Ацетат(фиг.5). В противоположность этому мемантин в концентрации 10-3 почти полностью подавляет исходную стимуляцию любыми стимуляторами. В контрольном эксперименте можно показать,что сам по себе мемантин не обладает хемилюминесценцией и не гасит хемилюминесценцию (не показано). Специфичность регуляции активации регулятивное влияние производных аминоадамантана, согласно изобретению, является весьма специфичным для нейтрофилов. Так, у производных аминоадамантана не проявляется никакого воздействия на эффект дерегулирования активированных лейкоцитов. Из фиг. 6 следует, что сама по себе АСС (1-аминоциклопропан-1-карбоновая кислота) не взаимодействует с мемантином в относительно высоких концентрациях. АСС является специфичным индикатором для миелопероксидазы, которая выделяется посредством дегрануляции лейкоцитов и образует в межклеточном пространстве разрушительный гипохлорит. Миелопероксидаза специфично взаимодействует с АСС с образованием этилена,который может детектироваться газохроматографическим способом. Вследствие этого, образовавшееся количество этилена представляет косвенное измерение количественного выражения активности лейкоцитов. В противоположность этому, индикатор для респираторного взрыва и возникающие из него кислородные радикалы (супероксид, ОН-радикалы и гидропероксид) активируются мемантином. Это проявляется уже при концентрации лишь 10-7 М,которая может быть легко получена. Влияние активации может быть сделано видимым путем добавления 3, который сдвигает равновесие реакции благодаря реакции Хабера-Вайса (- ) от супероксида и гидропероксида в направлении ОН-радикалов. Чувствительным индикатором для частиц кислорода является КМВ (а-кето-метилтиобутират), который разлагается в окислительных условиях, в числе прочего, до этилена, и который может легко детектироваться (фиг.7). В качестве контрольного опыта на фиг. 8 показано, что при добавлении 3 в концентрации 5 х 10-4 М первой стимулируется реакция КМВ, но не реакция АСС. Сам по себе 3 влияния не оказывает. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение производного аминоадамантана формулы, где 1, 2, 3 и 4 независимо выбраны из -56,-567, водорода, арила или гетероарила с кольцом вплоть до 7-членного, С 1-С 20-алкила, С 1 С 20-алкенила и 1-С 20-алкинила, где остатки алкил, 8390 алкенил и алкинил могут быть разветвленными, неразветвлнными или циклизированными и необязательно замещенными галогеном, арилом или гетероарилом с кольцом вплоть до 7-членного, при условии, что, по меньшей мере, один из остатков 1,2, 3 и 4 представляет собой -56 или-567 и 5, 6 и 7 независимо выбраны из водорода, арила или гетероарила с кольцом вплоть до 7 членного, С 1-С 20-алкила, 1-С 20-алкенила и С 1-С 20 алкинила, где остатки алкил, алкенил и алкинил могут быть разветвленными, неразветвлнными или циклизированными и необязательно замещенными галогеном, арилом или гетероарилом с кольцом вплоть до 7-членного, или 5 и 6 вместе с атомом азота образуют гетероциклическую группу с кольцом вплоть до 7-членного для регулирования активности уже активированных нейтрофилов. 2. Применение по п. 1, отличающееся тем,что производное аминоадамантана формулывыбрано из 1-амино-3-этил-5,7-диметиладамантана,1-амино-3-циклогексиладамантана,1-амино-3-этиладамантана,1-амино-3,5-диметиладамантана,1-амино-3,5-диэтиладамантана,1 метиламино-3,5-диметиладамантана,1 этиламино-3,5-диметиладамантана. 3. Применение по п. 1 или 2, отличающееся тем, что активность нейтрофилов повышается при концентрации производного аминоадамантана формулыот 10-3 до 10-5. 4. Применение по п. 1 или 2, отличающееся тем, что активность нейтрофилов снижается при концентрации производного аминоадамантана формулыот 10-4 до 10-2. 5. Применение по любому из пп. 1-4, отличающееся тем, что регулируют активность нейтрофилов. 6. Применение по п. 3, отличающееся тем,что иммунорегуляторы используют для лечения агрануломатоза , грануломатоза Вегенера и/или заболеваний, связанных с иммунодефицитом, в частности СПИДа. 7. Применение по п. 4, отличающееся тем,что иммунорегуляторы используют для лечения хронического или острого воспаления, аллергических реакций, аутоиммунных заболеваний и паразитарных заболеваний, в частности, лейшманиоза. 8. Применение производного аминоадамантана формулы, где 1, 2, 3 и 4 независимо выбраны из -56,-567, водорода, арила или гетероарила с кольцом вплоть до 7-членного, С 1-С 20-алкила, С 1 С 20-алкенила и С 1-С 20-алкинила, где остатки алкил,алкенил и алкинил могут быть разветвленными, неразветвлнными или циклизированными и необязательно замещенными галогеном, арилом или гетероарилом с кольцом вплоть до 7-членного, при условии, что, по меньшей мере, один из остатков 1,3 и 4 представляет собой -56 или 2,-567 и 5, 6 и 7 независимо выбраны из водорода, арила или гетероарила с кольцом вплоть до 7 членного, С 1-С 20-алкила, 1-С 20-алкенила и С 1-С 20 алкинила, где остатки алкил, алкенил и алкинил могут быть разветвленными, неразветвлнными или циклизированными и необязательно замещенными галогеном, арилом или гетероарилом с кольцом вплоть до 7-членного, или 5 и 6, вместе с атомом азота образуют гетероциклическую группу с кольцом вплоть до 7-членного для изготовления лекарственного препарата для регулирования активности уже активированных нейтрофилов. 9. Применение по п. 8, отличающееся тем,что лекарственный препарат дополнительно содержит активатор нейтрофилов. 10. Применение производного аминоадамантана формулы, где 1, 2, 3 и 4 независимо выбраны из -56,-567, водорода, арила или гетероарила с кольцом вплоть до 7-членного, 1-С 20-алкила, 1 С 20-алкенила и 1-С 20-алкинила, где остатки алкил,алкенил и алкинил могут быть разветвленными, неразветвлнными или циклизированными и необязательно замещенными галогеном, арилом или гетероарилом с кольцом вплоть до 7-членного, при условии, что, по меньшей мере, один из остатков 1,2, 3 и 4 представляет собой -56 или-567 и 5, 6 и 7 независимо выбраны из водорода, арила или гетероарила с кольцом вплоть до 7 членного, 1-С 20-алкила, 1-С 20-алкенила и 1-С 20 алкинила, где остатки алкил, алкенил и алкинил могут быть разветвленными, неразветвленными или циклизированными и необязательно замещенными галогеном, арилом или гетероарилом с кольцом вплоть до 7-членного, или 5 и 6, вместе с атомом азота образуют гетероциклическую группу с кольцом вплоть до 7-членного вместе с активатором для усиленной специфичной активации нейтрофиловили. 11. Применение по п. 10, отличающееся тем,что иммунорегуляторы используют при определении нейтрофилов в образце. 5 8390 12. Применение по п. 9 или 10, отличающееся тем, что активатор выбирают из Зимозана,формил-Ме-е-Ре и А 23187.