Способ получения препарата гонадотропного гормона сыворотки крови жеребых кобыл

МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Главным недостатком указанных известных способов является высокая вариабельность выхода гонадотропного гормона из исходного сырья, что существенно снижает производства гонадотропина СЖК. В результате проведенных нами исследований по изучению некоторых сторон эндокринного статуса организма кобыл разного возраста и в разных сроках жеребости была установлена оптимальные репродуктивные дни их жеребости,где концентрация фолликулостимулирующих гонадотропных гормонов достигается до максимума. При этом максимальный период содержания гонадотропина с преобладанием ФСГ в сыворотке крови жеребых кобыл находится у кобыл-доноров в возрасте 3-5 лет между 65-80 днями жеребости, а у 6-8 и 9-10 летних кобылдоноров соответственно на 60-75 и 55-65 дни жеребости. На основе дифференциации репродуктивных дней жеребости кобыл-доноров нами разработан новый способ отбора жеребых кобыл казахской породы типа джабе для использования их в качестве продуцентов ГСЖК. При внедрении нового способа в технологии получения гонадотропина из сыворотки жеребых кобыл позволяет повысить выхода гонадотропного гормона из исходного сырья в пределах 70,882,9 с активностью 300-460 м.е/мг. При внедрении нового способа в технологии индукции суперовуляции позволила получить в среднем 10,560,546 овуляции на донора, что больше 3,4 овуляции (Р 0,001) и получить 8,720,27 эмбриона на донора что 1,5 раза по сравнению традиционным способом.(72) Алибаев Нурадин Нажмединович Бекетауов Орынбек Абай Гаухар Бекетауова Дина Оринбековна Байбеков Марат Ерубаевич(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Юго-Западный научноисследовательский институт животноводства и растениеводства(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ГОНАДОТРОПНОГО ГОРМОНА СЫВОРОТКИ КРОВИ ЖЕРЕБЫХ КОБЫЛ(57) Изобретение относится к биологической промышленности, в частности к производству гонадотропного препарата из сыворотки крови жеребых кобыл для повышения воспроизводительной функции сельскохозяйственных животных и к способу индукции суперовуляции у животных доноров. Многие известные в настоящее время производственные способы получения гонадотропных гормонов из сыворотки крови жеребых кобыл основываются на способах фракционирования балластных белков и последующего отделения гонадотропина с помощью этилового спирта (А.с. СССР 296373, А 61 К 35/14,1970). Известен также способ получения гонадотропного гормона из сыворотки крови жеребых кобыл путем последовательного осаждения балластных веществ раствором риванола и охлажденным ацетоном, последующем выделения гонадотропина ацетоном (А.с. СССР 619188,А 61 К 37/38, 1975). Цель изобретения Получение сухого препарата ГСЖК с высокой гонадотропной активностью. Суть изобретения Для получения сухого ГСЖК определяются репродуктивные дни жеребости у кобыл разного возраста по степени концентрации фолликулостимулирующих гонадотропных гормонов и в качестве продуцентов гонадотропина отбирают жеребых кобыл в возрасте 3-5 лет между 65-80 днями жеребости, а 6-8 и 9-10 летних кобылдоноров соответственно на 60-75 и 55-65 дни жеребости. Заявитель ТОО Юго-Западный научноисследовательский институт животноводства и растениеводства. Авторы Алибаев Н.Н., Бекетауов О., Абай Г.,Бекетауова Д.О., Байбеков М.Е. Описание изобретения Изобретение относится к биологической промышленности, в частности к производству гонадотропного препарата из сыворотки крови жеребых кобыл для повышения воспроизводительной функции сельскохозяйственных животных и к способу индукции суперовуляции у животных доноров. Многие известные в настоящее время производственные способы получения гонадотропных гормонов из сыворотки крови жеребых кобыл основываются на способах фракционирования балластных белков и последующего отделения гонадотропина с помощью этилового спирта (А.с. СССР 296373, А 61 К 35/14,1970). Известен также способ получения гонадотропного гормона из сыворотки крови жеребых кобыл путем последовательного осаждения балластных веществ раствором риванола и охлажденным ацетоном, последующем выделения гонадотропина ацетоном (А.с. СССР 619188,А 61 К 37/38, 1975). К недостаткам указанных известных способов относитсяширокий диапазон сроки жеребости у отбираемых кобыл-доноров в качестве продуцента гонадотропина СЖК (40-90 день) высокая вариабельность концентрация гонадотропных гормонов в СЖК высокая изменчивость соотношений фолликулостимулирующих(ФСГ) и лютеинизирующих гормонов (ЛГ)не учета гормонального статуса жеребых кобыл разного возраста с разными сроками жеребостисмешивание сывороток нескольких жеребых кобыл при изготовлении препарата с указанием только усредненной гормональной активности, т.е. использование полисыворотки крови для производства гонадотропинане установление репродуктивных дней жеребости у кобыл разного возраста по степени концентрации фолликулостимулирующих гонадотропных гормонов высокая вариабельность выхода гонадотропного гормона из исходного сырья. Эти недостатки указывают на необходимость подробного изучения положительных и отрицательных факторов влияющих на гонадотропную активность СЖК, а также выхода целевого продукта и на этой основе совершенствования традиционных с целью разработки новых способов производство отечественных гонадотропина для ускоренного воспроизводства сельскохозяйственных животных. Были изучены биологические свойства 144 моносывороток жеребых кобыл разного возраста с разными сроками жеребости. При разработке оптимальных репродуктивных дней жеребости первоначально изучили изменения уровня концентрации фолликулостимулирующих гонадотропных гормонов у кобыл разного возраста с разными сроками жеребости. В результате было установлено, что концентрация гормонов в нативном сыворотке крови, полученных от 3-5 летних кобыл с 65-80-го дня жеребости увеличилось от 250 м.е./мл до 296,1 м.е./мл с выраженным повышением концентрации ФСГ по сравнению ЛГ и их соотношение составило в пределах от 3,3/1 до 5,1/1 (таблица 1-3). Таблица 1 Выход гонадотропного гормона из исходного сырья,Активность гонадотропина нативного СЖК и сухого ГСЖК полученные от 3 летних жеребых кобыл Выход гонадотропного гормона из исходного сырья,Активность гонадотропина нативного СЖЖ и сухокого ГСЖК полученные от 4 летних жеребых кобыл Выход гонадотропного гормона из исходного сырья,Активность гонадотропина нативного СЖК и сухого ГСЖК полученные от 5 летних жеребых кобыл После осаждения балластных белков и отделения гонадотропина из нативного СЖК концентрация гормонов в препарате ГСЖК увеличилось от 300 м.е./мг до 404,8 м.е./мг с оптимальным соотношением ФСГ/ЛГ (3/1-3,7/1). Выход гонадотропного гормона из исходного сырья у этих серии СЖК составило в пределах 72,0-81,0. Максимальная концентрация гормонов с преобладанием ФСГ наблюдается в нативном сыворотке крови, полученные от кобыл-доноров в возрасте 6-8 лет между 60-75 днями жеребости. При этом, содержание гормонов в 1 мл. сыворотке составило в пределах 270-320 м.е./мл., а соотношение ФСГ/ЛГ колебался с 3,7/1 до 5,2/1 Выход гонадотропного гормона из исходного сырья,Активность гонадотропина нативного СЖК и сухого ГСЖК полученные от 6 летних жеребых кобыл После получение гонадотропина из нативного СЖК концентрация гормонов увеличилось с 385,6 м.е./мг до 459,8/1 м.е./мг, а соотношение ФСГ/ЛГ в препарате составило в пределах от 3/1 до 3,7/1. Выход гонадотропных гормонов из исходного сырья составило от 73,9 до 82,9. Сыворотка крови, полученные от 9-10 летних кобыл-доноров на 55-65 дни их жеребости отличались,содержанием высокоактивным фолликулости-мулирующим гормоном. При этом,концентрация гонадотропных гормонов до и после очистки находился в пределах 249 м.е./мл.- 290 м.е./мл. и 389,8 м.е./мг.455,3 м.е./мг. соответственно. Соотношение ФСГ/ЛГ в препарате полученные от этим же кобылдоноров соответственно составило 3,1/1 - 4,3/1 и 2,6/1-3,7/1 (таблица 7-8). Таким образом, в результате проведенных нами исследований по изучению некоторых сторон эндокринного статуса организма кобыл разного возраста и в разных сроках жеребости была установлена оптимальные Выход гонадотропного гормона из исходного сырья,Активность гонадотропина нативного СЖК и сухого ГСЖК полученные от 7 летних жеребых кобыл Выход гонадотропного гормона из исходного сырья,Активность гонадотропина нативного СЖК и сухого ГСЖК полученные от 8 летних жеребых кобыл Выход гонадотропного гормона из исходного сырья,Активность гонадотропина нативного СЖК и сухого ГСЖК полученные от 9 летних жеребых кобыл Выход гонадотропного гормона из исходного сырья, 2 2 2 2 2 Активность гонадотропина нативного СЖК и сухого ГСЖК полученные от 10 летних жеребых кобыл Выход гонадотропного гормона из исходного сырья, 2 2 2 2 18 репродуктивные дни их жеребости,где концентрация фолликулостимулирующих гонадотропных гормонов достигается до максимума. При этом максимальный период содержания гонадотропина с преобладанием ФСГ в сыворотке крови жеребых кобыл находится у кобыл-доноров в возрасте 3-5 лет между 65-80 днями жеребости, а у 6-8 и 9-10 летних кобылдоноров соответственно на 60-75 и 55-65 дни жеребости. На основе дифференциации репродуктивных дней жеребости кобыл-доноров нами разработан новый способ отбора жеребых кобыл казахской породы типа джабе для использования их в качестве продуцентов ГСЖК. При внедрение нового способа в технологии индукции суперовуляции позволила получить в среднем 10,560,546 овуляции на донора, что больше 3,4 овуляции (Р 0,001) и получить 8,720,27 эмбриона на донора что 1,5 раза по сравнению традиционным способом (таблица 9). Таблица 9 Результаты внедрение нового способа в технологии трансплантации эмбрионов Показатели Число доноров Число овулировавших фолликулов На одного донора Доля доноров с суперовуляцией Всего извлечено эмбрионов и яйцеклетки Число эмбрионов на одного донора Таким образом, преимущество нового способа по сравнению с традиционным способам заключается в следующем позволяет максимально сократить низкорезультативных проб и кратности взятие крови от жеребых кобылповышает точности отбора потенциальных жеребых доноров-продуцентов СЖКрационально использовать высокоценных генотипов в качестве доноровпозволяет получить сухого гонадотропина с активностью 300-470 м.е/мг и оптимальным соотношением фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов в пределах 3,0/1-4,6/1 повышает выхода гонадотропина из сыворотки крови жеребых кобыл в пределах от 70,7 до 83,8 стабилизирует изменчивость выхода гонадотропного гормона из исходного сырьявнедрение нового способа в технологию трансплантации эмбрионов позволяет увеличить число доноров с суперовуляцией 1,4 раза и получить на 3 эмбриона больше от каждого обработанного овцематки донора. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения препарата гонадотропного гормона сыворотки крови жеребых кобыл (ГСЖК),включающий взятие крови от жеребых кобыл,технологию приготовления нативного СЖК,определение биологического качества готового препарата, поэтапное осаждение балластных белков и гонадотропина из сыворотки, сублимационное высушивание и получения препарата отличающийся тем, что с целью повышения гонадотропной активности сухого препарата дополнительно определяют репродуктивные дни жеребости у кобыл разного возраста по степени концентрации фолликулостимулирующих гонадотропных гормонов и в качестве продуцентов гонадотропина отбирают жеребых кобыл в возрасте 3-5 лет между 65-80 днями жеребости, а 6-8 и 9-10 летних кобыл-доноров соответственно на 60-75 и 55-65 дни жеребости.