Способ разработки ускоренной модели развития цирроза печени с синдромом портальной гипертензии в эксперименте

(51) 61 17/00 (2009.01) 61 31/00 (2009.01) 61 36/28 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ 5 под рентгенконтролем, с применением гемостатической губки. Одновременно проводят сужение полой вены проксимальнее впадения печеночных вен с обтурацией устьев печеночных вен в сочетании с подкожным введением 40 раствора четырххлористого углерода в подсолнечном масле из расчта 2,0 мл/кг два раза в неделю. Каждые 3-5 сутки в течение 1 месяца,производят трепанобиопсию печени под контролем УЗИ, при помощи трепана, диаметром иглы -18. При этом на 17-21 сутки отмечается формирование центролобулярного некроза с переходом в цирроз с повышением давления в воротной вене с 91,414,2 до 269,317,8 мм.вод.ст. Применение изобретения определяет возможность моделирования цирроза печени по ускоренной методике, обеспечивает высокую воспроизводимость цирроза печени с синдромом портальной гипертензии, позволяет прогнозировать результаты исследований с изучением механизмов возникновения заболевания, а также расширить диапазон и возможности для применения и апробации различных методов коррекции.(76) Абдурахманов Бабур АнваровичКулакеев Онласбек КудайбергеновичГанцев Шамиль ХанафиевичАрыбжанов Дауранбек Турсункулович(56) Руководство по экспериментальной хирургии / Шалимов С.А., Радзиховский А.П., Кейсевич Л.В. М. Медицина, 1989, с.272(54) СПОСОБ РАЗРАБОТКИ УСКОРЕННОЙ МОДЕЛИ РАЗВИТИЯ ЦИРРОЗА ПЕЧЕНИ С СИНДРОМОМ ПОРТАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной хирургии. Проводят хирургическое вмешательство экспериментальных животных под внутривенным наркозом с применением рамитар 0,15 мл/кг, пропофол 13,5 мг/кг с предварительной внутримышечной премедикацией. Выполняют эмболизацию ветвей воротной вены путем катетеризации брыжеечной или селезеночной вены по Сельдингеру катетером 23079 Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной хирургии и может быть применено для разработки ускоренной модели развития цирроза печени с синдромом портальной гипертензии в эксперименте. Лечение осложнений портальной гипертензии,обусловленной циррозом печени,остается актуальной проблемой хирургической гепатологии. Наиболее фатальным осложнением цирроза печени является кровотечение из варикозно расширенных вен пищевода и кардии, ведущим фактором в патогенезе развития кровотечений при этом является высокое портальное давление (Котив Б.Н. Хирургическая профилактика и лечение пищеводножелудочных кровотечений при портальной гипертензии дис докт. мед. наук.-Санкт-Петербург,1998.- с. 232). Для повышения эффективности лечения больных циррозом печени необходимо решение ряда задач в опытах на животных путем создания модели заболевания. Моделирование цирроза печени с синдромом портальной гипертензии является достаточно сложной задачей обусловленное многообразием функций печени и особенностями ее васкуляризации,представленной двумя самостоятельными системами - воротной вены и печеночной артерии. Известен способ моделирования цирроза печени путем длительного введения малых доз гепатотропного яда в виде четыреххлористого углерода (4). При вскармливании собак 2 раза в неделю с пищей по 3-5 мл раствора СС 4, цирроз развивается спустя 6 мес. (Фишер А. Физиология и экспериментальная патология печени.-Будапешт Изд-во АН Венгрии, 1961.- с. 215). Портальную гипертензию,вызванную внутрипеченочным блоком, воспроизвести труднее всего. Она может возникнуть у животных с выраженным некрозом печени,особенно развившимся на фоне центролобулярного некроза. В этих условиях воспроизводимость портальной гипертензии невелика и не превышает 30-40,следовательно результаты опыта практически непрогнозируемы. Известен способ моделирования цирроза печени путем селективной катетеризации внутрипеченочных разветвлений воротной вены и их эмболизации микросферами. Воспроизводимость патологического процесса в данном случае тоже невысока и составляет 50-55. Прототипом изобретения является способ моделирования цирроза печени по методике Д.С. Саркисова(Руководство по экспериментальной хирургии / С.А. Шалимов, А.П. Радзиховский, Л.В. Кейсевич. -М. Медицина, 1989.с. 272), и С.А. Шалимова с соавт. (1989). По методике Д.С. Саркисова (1965) моделирование цирроза печени проводилось введением подопытным кроликам 40 раствора четырххлористого углерода в персиковом масле из расчта 2,0 мл/кг два раза в неделю. При этом процесс формирования цирроза печени начинается 2 через 1,5-2 мес. от начала эксперимента, с отчетливым выражением патологического процесса спустя 3-4 месяца. По методике С.А. Шалимова с соавт. (1989) (Руководство по экспериментальной хирургии / С.А. Шалимов, А.П. Радзиховский, Л.В. Кейсевич.-М. Медицина,1989. с.272) моделирование цирроза печени проводилось путем эндоваскулярной окклюзии печеночных вен с введением спирали Гиантурко. Однако проведение моделирования цирроза печени с синдромом портальной гипертензии с вышеназванными методиками вызывают трудности связанные необходимостью длительного эксперимента, с применением дорогостоящих,инвазивных ангиографических и эндоваскулярных вмешательств. Нами разработан способ ускоренной модели развития цирроза печени с синдромом портальной гипертензии в эксперименте. Задачей изобретения является разработка способа ускоренной модели развития цирроза печени с синдромом портальной гипертензии в эксперименте Технический результат - совершенствование методики моделирования цирроза печени с синдромом портальной гипертензии в эксперименте по ускоренной методике,повышение воспроизводимости цирроза печени с синдромом портальной гипертензии с изучением механизмов возникновения заболевания, расширение диапазона и возможности для применения и апробации различных методов коррекции. Предлагаемый способ осуществляют следующим образом у экспериментального животного проводят хирургическое вмешательство под внутривенным наркозом с применением рамитар 0,15 мл/кг,пропофол 13,5 мг/кг, при необходимости добавляют стадол, с предварительной премедикацией путем внутримышечного введения коктейля следующего состава анальгин 50-70 мг/кг (2 мл 50 раствора),димедрол 1,5 мг/кг (0,15 мл 1 раствора),дроперидол 0,5 мг/кг (0,2 мл 0,25 раствора) и 0,010,03 мг/кг сульфата атропина (1-2 мл 0,1 раствора). Проводится эмболизация ветвей воротной вены путем катетеризации брыжеечной или селезеночной вены по Сельдингеру катетером 5 под рентгенконтролем, с селективной катетеризацией ветвей портальной вены печени экспериментальных животных (фиг.1). Для эмболизации ветвей портальной вены применяется гемостатическая губка. Одновременно проводится сужение полой вены проксимальнее впадения печеночных вен с обтурацией устьев печеночных вен (фиг. 2) в сочетании с подкожным введением 40 раствора четырххлористого углерода в подсолнечном масле из расчта 2,0 мл/кг два раза в неделю. При проведении эмболизации, явления наступивший эмболизации ветвей портальной вены были отмечены уже во время операции (фиг. 3,4). В результате проведенных исследований получена экспериментальная модель цирроза печени 23079 с синдромом портальной гипертензии по ускоренной методике с расширением брыжеечных вен и развитием асцита (фиг. 5). До начала экспериментов и после формирования цирроза печени с развитием портальной гипертензии измеряли давление в воротной вене и выполняли трепанобиопсию печени. После экспериментального моделирования цирроза печени, нами каждые 3-5 сутки в течение 1 месяца, производилась трепанобиопсия печени экспериментальных животных под контролем УЗИ,при помощи трепана, диаметром иглы -18. Всего было проведено по 4 биопсий у всех экспериментальных животных,с каждого полученного биоптата готовились по 3 среза с разных участков. Анализированы 144 гистологических материала,где у 95,6 экспериментальных животных вышеописанной серии на 17-21 сутки верифицированы изменения характерные для центролобулярного некроза печени с переходом в цирроз (фиг. 6). Следовательно,при эмболизации ветвей воротной вены в сочетании с перевязкой печеночных вен и дополнительном введении четырххлористого углерода получена ускоренная модель формирования цирроза печени с явлениями портальной гипертензии, асцитом, расширением брыжеечных вен, где развитие процесса отмечено к началу 3 недели эксперимента. Давление в воротной вене до начала моделирования цирроза печени варьировало в пределах 91,414,2 мм.вод.ст. С моделью хронической внутрипеченочной портальной гипертензии этот показатель составил 269,317,8 мм.вод.ст. Предлагаемая методика не представляет технических трудностей и проведенные исследования доказали возможность моделирования цирроза печени в эксперименте по ускоренной методике путем эмболизации ветвей воротной вены в комбинации с дополнительной перевязкой печеночных вен и введением четырххлористого углерода. Таким образом, уже к началу 3 недели-на 17-21 сутки сформировывался центролобулярный некроз с переходом в цирроз с повышением давления в воротной вене с 91,414,2 до 269,317,8 мм.вод.ст. Исследования данным способом выполнены у 38 беспородных собак обоего пола, весом 15-35 кг и получена экспериментальная модель цирроза печени с синдромом портальной гипертензии по ускоренной методике. В доступной научно-медицинской и патентной литературе не обнаружено сведений об известности способа разработки ускоренной модели развития цирроза печени с синдромом портальной гипертензии в эксперименте,включающего эмболизации ветвей воротной вены в комбинации с дополнительной перевязкой печеночных вен и введением четырххлористого углерода. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию новизна. Исследованиями авторов доказано,что моделирование цирроза печени в эксперименте по ускоренной методике путем эмболизации ветвей воротной вены в комбинации с дополнительной перевязкой печеночных вен и введением четырххлористого углерода обеспечивает высокую воспроизводимость цирроза печени с синдромом портальной гипертензии,прогнозировать результаты исследований с изучением механизмов возникновения заболевания, расширение диапазона и возможности для применения и апробации различных методов коррекции. Пример 1. Собака, кобель, вес 18 кг. После стандартной подготовки животного к операции проводили премедикацию внутримышечным введением коктейля следующего состава анальгин 70 мг/кг (2 мл 50 раствора), димедрол 1,5 мг/кг(0,15 мл 1 раствора), дроперидол 0,5 мг/кг (0,2 мл 0,25 раствора) и 0,03 мг/кг сульфата атропина (2 мл 0,1 раствора). После трехкратной обработки операционного поля 3 настойкой йода произведена срединная лапаротомия. Хирургическое вмешательство проводили под внутривенным наркозом с применением рамитар 0,15 мл/кг, пропофол 13,5 мг/кг с добавлением стадола. Проводили визуальную оценку состояния органов брюшной полости. Затем под рентгенконтролем выполнили селективную катетеризацию брыжеечной вены по Сельдингеру катетером 5 с эмболизацией ветвей портальной вены с применением нарезанных кусочков гемостатической губки. Одновременно проводили сужение полой вены проксимальнее впадения печеночных вен с обтурацией устьев печеночных вен в сочетании с подкожным введением 40 раствора четырххлористого углерода в подсолнечном масле из расчта 2,0 мл/кг два раза в неделю. При проведении эмболизации интраоперационно отмечены явления наступивший эмболизации ветвей портальной вены. После экспериментального моделирования цирроза печени, каждые 3-5 сутки в течение 1 месяца, производилась трепанобиопсия печени экспериментального животного под контролем УЗИ,при помощи трепана, диаметром иглы -18. Всего было проведено по 4 биопсий, с каждого полученного биоптата готовились по 3 среза с разных участков. При этом в биоптате выполненном на 18 сутки верифицированы изменения характерные для центролобулярного некроза печени с переходом в цирроз. Во время канюляции брыжеечной вены и после формирования цирроза печени с развитием портальной гипертензии измеряли давление в воротной вене, что составило 97,2 до 283,4 мм.вод.ст. соответственно. В послеоперационном периоде также отмечено ухудшение показателей печеночного обмена в биохимических анализах крови. Пример 2. Собака, сука, вес 16 кг. Проводилась стандартная подготовка животного к операции. Премедикация с внутримышечным введением коктейля следующего состава анальгин 60 мг/кг (2 мл 50 раствора), димедрол 1,5 мг/кг (0,15 мл 1 3 23079 раствора), дроперидол 0,5 мг/кг (0,2 мл 0,25 раствора) и 0,02 мг/кг сульфата атропина (1 мл 0,1 раствора). После трехкратной обработки операционного поля 3 настойкой йода произведена срединная лапаротомия. Операцию проводили под внутривенным наркозом с применением рамитар 0,15 мл/кг, пропофол 13,5 мг/кг. После визуальной оценки состояния органов брюшной полости под рентгенконтролем выполнили селективную катетеризацию брыжеечной вены по Сельдингеру катетером 5, с эмболизацией ветвей портальной вены с применением нарезанных кусочков гемостатической губки. Одновременно проводили вмешательство направленное на сужение полой вены проксимальнее впадения печеночных вен с обтурацией устьев печеночных вен в сочетании с подкожным введением 40 раствора четырххлористого углерода в подсолнечном масле из расчта 2,0 мл/кг два раза в неделю. После экспериментального моделирования цирроза печени, в течение 1 месяца, каждые 3-5 сутки производили трепанобиопсию печени экспериментального животного под контролем УЗИ,при помощи трепана диаметром иглы -18. Всего было проведено 4 биопсий, с каждого полученного биоптата готовились по 3 среза с разных участков. При этом в биоптате выполненном на 17 сутки верифицированы изменения характерные для центролобулярного некроза печени с переходом в цирроз. Во время канюляции брыжеечной вены и после формирования цирроза печени с развитием портальной гипертензии измеряли давление в воротной вене, что составило 96,8 до 277,9 мм.вод.ст. соответственно. В послеоперационном периоде также отмечено ухудшение показателей печеночного обмена в биохимических анализах крови. Предложенная и апробированная в эксперименте методика является эффективной для моделирования цирроза печени с синдромом портальной гипертензии по ускоренной методике. Во всех случаях был достигнут указанный технический результат. Предлагаемый способ легко воспроизводим в условиях эксперимента. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию промышленная применимость. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ разработки ускоренной модели развития цирроза печени с синдромом портальной гипертензии в эксперименте, включающий создание экспериментальной модели цирроза печени по ускоренной методике, путем эмболизации ветвей воротной вены, с перевязкой печеночных вен и введением четырххлористого углерода,отличающийся тем, что путем хирургического вмешательства проводится эмболизация ветвей воротной вены путем катетеризации брыжеечной или селезеночной вены по Сельдингеру катетером 5 под рентгеноконтролем, с селективной катетеризацией ветвей портальной вены печени экспериментальных животных, с применением гемостатической губки, с одновременным сужением полой вены проксимальнее впадения печеночных вен с обтурацией устьев печеночных вен в сочетании с подкожным введением 40 раствора четырххлористого углерода в подсолнечном масле из расчета 2,0 мл/кг два раза в неделю.