Консорциум штаммов бактерий Escherichia coli О138, Escherichia coli О8 K88, Escherichia coli О137, Escherichia coli О149, Salmonella cholerasuis, Streptococcus equisimilis, Proteus vulgaris, используемый для получения поливалентной гипериммунной сыворотки против колибактериоза, сальмонеллеза, протейной инфекции и стрептококкоза поросят

(51) 12 1/20 (2006.01) 12 1/02 (2006.01) 12 1/04 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ приготовления полиантигена, используемого для получения поливалентной, гипериммунной сыворотки для лечения и профилактики колибактериоза,сальмонеллза, протейной инфекции и стрептококкоза поросят. Технический результат, обеспечиваемый изобретением, выражается в создании консорциума штаммов бактерий рода,, ,, биомасса клеток которых в совокупности позволяет получить высоко иммуногенный полиантиген, используемый для гипериммунизации животных. Консорциум штаммов бактерий 0138 К 88 ( Е 3-2001),888 ( Е 5-2001),137 ( КазНИВИЕ 182002),149 (КазНИВИ 212003),(-14 167),(КазНИВИ 28-2002),(КазНИВИ 9-2004), используемый для получения поливалентной гипериммунной сыворотки против колибактериоза, сальмонеллза, протейной инфекции и стрептококкоза поросят. Указанные штаммы бактерий депонированы в лаборатории Музей культур микроорганизмов КазНИВИ.(72) Соловьев Эдуард Борисович Телеляева Марина Викторовна Титова Тамара Александровна(73) Дочернее государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научно-исследовательский ветеринарный институт Республиканского государственного предприятия на праве хозяйственного ведения Научно-производственный центр животноводства и ветеринарии Министерства сельского хозяйства Республики Казахстан(54) КОНСОРЦИУМ ШТАММОВ БАКТЕРИЙО 138,О 8 88,О 137,О 149,,,, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИВАЛЕНТНОЙ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ ПРОТИВ КОЛИБАКТЕРИОЗА,САЛЬМОНЕЛЛЕЗА, ПРОТЕЙНОЙ ИНФЕКЦИИ И СТРЕПТОКОККОЗА ПОРОСЯТ 19923 Изобретение относится к области микробиологии в частности к консорциумам штаммов для приготовления полиантигена, используемого для получения поливалентной, гипериммунной сыворотки для лечения и профилактики колибактериоза, сальмонеллза, протейной инфекции и стрептококкоза поросят. Известен консорциум штаммов используемый при производстве поливалентной сыворотки против колибактериоза, сальмонеллза сельскохозяйственных животных справочник Ветеринарные препараты под редакцией доктора биологических наук Д. Ф. Осидзе, Москва.Колос 1981 с 226-228. Недостатком известного консорциума является то, что он состоит из штаммов эшерихий,сальмонелл, тогда как в предлагаемом консорциуме содержатся дополнительно штаммы стрептококка и протея. Задачей изобретения является создание консорциума микроорганизмов, обладающего высокой полиантигенной специфичностью и способствующего при гипериммунизации животных получить поливалентную гипериммунную сыворотку крови. Технический результат, обеспечиваемый изобретением, выражается в создании консорциума штаммов бактерий рода,, ,, биомасса клеток которых в совокупности позволяет получить высоко иммуногенный полиантиген, используемый для гипериммунизации животных. Консорциум штаммов бактерийО 138 К 88 ( Е 3-2001),О 8 К 88 ( Е 5-2001,О 137 (КазНИВИ 182002),О 149 (КазНИВИ 21-2003(КазНИВИ 9-2004), используемый для получения поливалентной гипериммунной сыворотки,для лечения и профилактики колибактериоза,сальмонеллза, протейной инфекции и стрептококкоза поросят. Указанные штаммы бактерий депонированы в лаборатории Музей культур микроорганизмов КазНИВИ. Идентификацию штаммов микроорганизмов входящих в консорциум, проводят по основным биологическим свойствам (морфологическим, культуральным, биохимическим), согласно определителя(1974, 1984, 1997 гг., справочные издания).138 88 Происхождение штамма бактерии Штамм бактерий выделен от павшего поросенка в свиноводческом комплексе Волынский Карагандинской области, способ выделения прямой посев из слизистой оболочки пораженного участка тонкого отдела кишечника на мясопептонном бульоне и мясопептонном агаре. Сравнен с типовым эталонным штаммом О 138 К 88. Выделенный штамм характеризуется следующими признаками 2 Назначение штамма бактерий используется для приготовления антигена предназначенного для иммунизации животных при получении гипериммунных сывороток или вакцинного препарата для лечения и профилактики колибактериоза поросят. Состав и условия культивирования мясопептонный бульон и мясопептонный агар с добавлением 0,1 глюкозы. Морфолого-культуральные свойства На мясопептонном агаре выпуклые колонии средней величины серо-белого цвета, влажные,блестящие, круглые с ровными краями в -форме. На среде Эндо колонии красного цвета с металлическим блеском. В мясопептонном бульоне образуют равномерную муть с белым осадком на дне пробирки. Оптимальная температура роста 3738 С и рН 7,0-7,4. Бактерии штамма-грамотрицательные прямые палочки от 1,1-1,5 х 2,0-6,0 мкм одиночные или в парах, подвижные, спор и капсул не образуют. Серологические свойства идт реакция агглютинации с типовой коли сывороткой О 138 К 88 в титре 13200. Физиолого-биохимические свойства Принадлежность к трофической группе хемогетеротрофы Типы катаболизма аэроб или факультативный анаэроб. Симбиотрофные отношения паразитизм. Источники углерода ферментирует глюкозу,маннит, дульцит, сахарозу, не ферментирует галактозу, рамнозу, арабинозу, рафинозу, мальтозу,инозит. Другие характерные физиологические особенности обмена не образует индол,сероводород, не свртывает молоко, не разжижает желатин. Маркерные признаки штамма не сбраживает арабинозу. Способ, условия и состав сред для размножения штамма посев на мясопептонный бульон с 0,1 глюкозы при температуре 37 С 24 часа. Штамм бактерии 138 88,используемый для получения поливалентной гипериммунной сыворотки против колибактериоза поросят. Указанный штамм бактерий депонирован в лаборатории Музей культур микроорганизмов КазНИВИ. Идентификацию штамма микроорганизмов проводят по основным морфологическим, культуральным и физиологобиохимическим свойствам,согласно определителю ,(1974, 1984, 1997 гг., справочные издания).8 К 88. Происхождение штамма бактерий Штамм бактерий выделен от павшего пороснка в свинокомплексе Волынский Карагандинской области, способ выделения прямой посев из слизистой оболочки пораженного участка тонкого отдела кишечника на мясопептонном бульоне,мясопептонном агаре. Сравнн с типовым эталонным штаммом 08 К 88. 19923 Выделенный штамм характеризуется следующими признаками Назначение штамма бактерий обладает выраженными иммуногенными свойствами по отношению к белым мышам. Используется для приготовления антигена, предназначенного для иммунизации животных при получении гипериммунных сывороток или вакцинного препарата для профилактики колибактериоза поросят. Состав среды и условия культивирования мясопептонный агар и мясопептонный бульон с добавлением 0,1 глюкозы. Морфолого-культуральные свойства На мясопептонном агаре - выпуклые колонии средней величины серо-белого цвета, влажные,блестящие, круглые с ровными краями в -форме. На среде Эндо колонии красного цвета с металлическим блеском. В мясопептонном бульоне образуют равномерную муть с белым осадком на дне пробирки. Оптимальная температура роста 37 С- 38 С и рН 7,0-7,4. Бактерии штамма грамотрицательные, прямые палочки от 1,1-1,5 х 2,0-6,0 мкм одиночные или в парах, подвижные, спор и капсул не образует. Серологические свойства идт в реакции агглютинации с типовой коли сывороткой О 8 К 88 в титре 13200. Физиолого - биохимические свойства Принадлежность к трофической группе хемогетеротроф. Типы катаболизма аэроб или факультативный анаэроб. Симбиотрофные отношения паразитизм. Источники углерода ферментирует глюкозу,маннит, лактозу, сахарозу, не ферментирует галактозу, рамнозу, рафинозу, мальтозу, арабинозу,дульцит, сорбит, инозит. Другие характерные физиологические особенности обмена не образует индол, сероводород, не свертывает молоко, не разжижает желатин. Маркерные признаки штамма не сбраживает дульцит. Способ, условия и состав сред для хранения Лиофильно высушенный или на полужидком агаре под вазелиновым маслом при температуре до 4 С. Способ, условия и состав сред для размножения штамма посев на мясопептонный бульон с 0,1 глюкозы при температуре 37 С 24 часа. Штамм бактерийО 8 К 88,используемый для получения поливалентной гипериммунной сыворотки против колибактериоза поросят. Указанный штамм бактерий депонирован в лаборатории Музей культур микроорганизмов КазНИВИ. Идентификацию штамма микроорганизмов проводят по основным морфологическим, культуральным и физиологобиохимическим свойствам,согласно определителю ,(1974, 1984, 1997 гг., справочные издания). Штамм бактерий выделен от павшего пороснка в свинокомплексе ТОО ПСЗ Бекон Алматинской области, способ выделения прямой посев из слизистой оболочки пораженного участка тонкого отдела кишечника на мясопептонном бульоне и мясопептонном агаре. Сравнен с типовым эталонным штаммом 137. Выделенный штамм характеризуется следующими признаками. Назначение штамма бактерий обладает выраженными иммунногенными свойствами по отношению к белым мышам. Используется для приготовления антигена предназначенного для иммунизации животных при получении гипериммунных сывороток или вакцинного препарата для профилактики колибактериоза поросят. Состав среды и условия культивирования мясопептонный агар и мясопептонный бульон с добавлением 0,1 глюкозы. Морфолого-культуральные свойства На мясопептонном агаре - выпуклые колонии средней величины серо-белого цвета, влажные,блестящие, круглые с ровными краями в -форме. На среде Эндо колонии красного цвета с металлическим блеском. В мясопептонном бульоне образуют равномерную муть с белым осадком на дне пробирки. Оптимальная температура роста 37 С- 38 С и рН 7,0-7,4. Бактерии штамма грамотрицательные, прямые палочки от 1,1-1,5 х 2,0-6,0 мкм одиночные или в парах, подвижные, спор и капсул не образует. Серологические свойства идт в реакции агглютинации с типовой коли сывороткой О 137 в титре 13200. Физиолого - биохимические свойства Принадлежность к трофической группе хемогетеротроф. Типы катаболизма аэроб или факультативный анаэроб. Симбиотрофные отношения паразитизм. Источники углерода ферментирует глюкозу,маннит, рамнозу, дульцит, лактозу, сахарозу,сорбит, не ферментирует галактозу, рафинозу,мальтозу, арабинозу, адонит, инозит. Другие характерные физиологические особенности обмена не образует индол, сероводород, не свертывает молоко, не разжижает желатин. Маркерные признаки штамма не сбраживает адонит. Способ, условия и состав сред для хранения Лиофильно высушенный или на полужидком агаре под вазелиновым маслом при температуре до 4 С. Способ, условия и состав сред для размножения штамма посев на мясопептонный бульон с 0,1 глюкозы при температуре 37 С 24 часа. Штамм бактерийО 137,используемый для получения поливалентной гипериммунной сыворотки против колибактериоза поросят. Указанный штамм бактерий депонирован в лаборатории Музей культур микроорганизмов КазНИВИ. 3 19923 Идентификацию штамма микроорганизмов проводят по основным морфологическим, культуральным и физиологобиохимическим свойствам,согласно определителю ,(1974, 1984, 1997 гг., справочные издания).149. Происхождение штамма бактерий Штамм бактерий выделен от павшего пороснка в свинокомплексе Волынский Карагандинской области, способ выделения прямой посев из слизистой оболочки пораженного участка тонкого отдела кишечника на мясопептонном бульоне,мясопептонном агаре. Сравнн с типовым эталонным штаммом О 149 Выделенный штамм характеризуется следующими признаками Назначение штамма бактерий обладает выраженными иммунногенными свойствами по отношению к белым мышам. Используется для приготовления антигена предназначенного для иммунизации животных при получении гипериммунных сывороток или вакцинного препарата для профилактики колибактериоза поросят. Состав среды и условия культивирования мясопептонный агар и мясопептонный бульон с добавлением 0,1 глюкозы. Морфолого-культуральные свойства На мясопептонном агаре - выпуклые колонии средней величины серо-белого цвета, влажные,блестящие, круглые с ровными краями -форма. На среде Эндо колонии красного цвета с металлическим блеском. В мясопептопном бульоне образуют равномерную муть с белым осадком на дне пробирки. Оптимальная температура роста 37 С- 38 С и рН 7,0-7,4. Бактерии штамма грамотрицательные, прямые палочки от 1,1-1,5 х 2,0-6,0 мкм одиночные или в парах, подвижные, спор и капсул не образует. Серологические свойства идт в реакции агглютинации с типовой коли сывороткой 149 в титре 13200. Физиолого - биохимические свойства Принадлежность к трофической группе хемогетеротроф. Типы катаболизма аэроб или факультативный анаэроб. Симбиотрофные отношения паразитизм. Источники углерода ферментирует глюкозу,маннит, галактозу, рамнозу, сахарозу, сорбит, не ферментирует рафинозу, мальтозу, арабинозу,лактозу, дульцит, адонит, инозит. Другие характерные физиологические особенности обмена не образует индол, сероводород, не свертывает молоко, не разжижает желатин. Маркерные признаки штамма не сбраживает инозит. Способ, условия и состав сред для хранения Лиофильно высушенный или на полужидком агаре под вазелиновым маслом при температуре до 4 С. Способ, условия и состав сред для размножения штамма посев на мясопептонный бульон с 0,1 глюкозы при температуре 37 С 24 часа. 4 Штамм бактерийО 149,используемый для получения поливалентной гипериммунной сыворотки против колибактериоза поросят. Указанный штамм бактерий депонирован в лаборатории Музей культур микроорганизмов КазНИВИ. Идентификацию штамма микроорганизмов проводят по основным морфологическим, культуральным и физиологобиохимическим свойствам,согласно определителю ,(1974, 1984, 1997 гг., справочные издания).Происхождение штамма бактерий Штамм бактерий выделен от павшего пороснка в свинокомплексе Волынский Карагандинской области, способ выделения прямой посев из слизистой оболочки поражнного участка толстого отдела кишечника, на мясопептонном агаре и мясопептонном бульоне. Выделенный штамм характеризуется следующими признаками Назначение штамма бактерий обладает выраженными иммуногенными свойствами по отношению к белым мышам. Используется для приготовления антигена предназначенного для иммунизации животных при получении гипериммунных сывороток или вакцинного препарата для профилактики сальмонеллза поросят. Состав среды и условия культивирования мясопептонный агар и мясопептонный бульон. Морфолого-культуральные свойства На мясопептонном агаре колонии гладкие,блестящие, куполообразные, прозрачные, голубоватые, с ровными краями -форма. На Висмутсульфит агаре колонии гладкие с ровными краями,чрные с металлическим блеском, наблюдается прокрашивание среды под колонией в чрный цвет. В мясопептонном бульоне образует равномерное помутнение среды, густой белый осадок, нежная пленка на поверхности. Оптимальная температура роста 37 С и рН 7,0-7,4 24 часа. Бактерии штамма грамотрицательные палочки,очертания концов-округлые, длина 1-3 мкм, ширина 0,5-0,8 мкм, подвижные с перетрехиальными жгутиками, спор и капсул не образует. Серологические свойства - идт реакция агглютинации на стекле с типовой сальмонеллезной сывороткой по О антигену, рецептор 7, по Н антигену рецептор С. Физиолого-биохимические свойства Принадлежность к трофической группе хемогетеротроф. Типы катаболизма аэроб или факультативный анаэроб. Симбиотрофные отношения паразитизм. Источники углерода ферментирует глюкозу,маннит, галактозу, рамнозу, рафинозу, мальтозу,дульцит, лактозу, не ферментирует арабинозу,сахарозу, инозит. Другие характерные физиологические особенности обмена не образует сероводород, индол, не свертывает молоко, не разжижает желатин. 19923 Маркерные признаки штамма не ферментирует сахарозу. Способ, условия и состав сред для хранения Лиофильно высушенный или на полужидком агаре под вазелиновым маслом при температуре до 4 С. Способ, условия и состав сред для размножения штамма посев на мясопептонный бульон при температуре 37 С 24 часа. Штамм бактерий, используемый для получения поливалентной гипериммунной сыворотки против сальмонеллеза поросят. Указанный штамм бактерий депонирован в лаборатории Музей культур микроорганизмов КазНИВИ. Идентификацию штамма микроорганизмов проводят по основным морфологическим, культуральным и физиологобиохимическим свойствам,согласно определителю ,(1974, 1984, 1997 гг., справочные издания).Происхождение штамма бактерий Штамм бактерий выделен от павшего пороснка в свинокомплексе Волынский Карагандинской области, способ выделения прямой посев из головного мозга поросенка на мясопептонный агар и мясопептонный бульон с 1 глюкозы. Выделенный штамм характеризуется следующими признаками Назначение штамма бактерий обладает выраженными иммунногенными свойствами по отношению к белым мышам. Используется для приготовления антигена предназначенного для иммунизации животных при получении гипериммунных сывороток или вакцинного препарата для профилактики стрептококкоза поросят. Состав среды и условия культивирования 3 кровяной мясопептонный агар и мясопептонный бульон с 1 глюкозы. Морфолого-культуральные свойства На 3 кровяном мясопептонном агаре колонии прозрачные, мелкие, росинчатые, с ровными краями в -форме, окруженные зоной гемолиза. На мясопептонном агаре с 1 глюкозы колонии мелкие, росинчатые, блестящие с ровными краями в-форме. В мясопептонном бульоне с 1 глюкозы образует осадок на дне пробирки и равномерное помутнение среды. Оптимальная температура роста 37 С и рН 7,2-7,4 24 часа. Бактерии штамма грамположительные кокки очертания концов овальные, размеры 1,5-1,0 мкм,кокки располагаются цепочкой, неподвижные,могут образовывать капсулу. Серологические свойства идет в реакции агглютинации со стрептококковой сывороткой серогруппы С. Физиолого-биохимические свойства Принадлежность к трофической группе хемогетеротроф. Типы катаболизма аэроб или факультативный анаэроб. Симбиотрофные отношения паразитизм. Источники углерода ферментирует глюкозу,маннит, мальтозу, лактозу, сахарозу, трегалозу, не ферментирует галактозу, рамнозу, рафинозу,дульцит, арабинозу, инозит, сорбит. Другие характерные физиологические особенности обмена не образует сероводород, индол, не разжижает желатин. Маркерные признаки штамма не разлагает сорбит, усваивает трегалозу. Способ, условия и состав сред для хранения Лиофильно высушенный или на полужидком агаре под вазелиновым маслом с 1 глюкозы при температуре до 4 С. Способ, условия и состав сред для размножения штамма посев на мясопептонный бульон с 1 глюкозы при температуре 37 С 24 часа. Штамм бактерий, используемый для получения поливалентной гипериммунной сыворотки против стрептококкоза поросят. Указанный штамм бактерий депонирован в лаборатории Музей культур микроорганизмов КазНИВИ. Идентификацию штамма микроорганизмов проводят по основным морфологическим, культуральным и физиологобиохимическим свойствам,согласно определителю ,(1974, 1984, 1997 гг., справочные издания).Происхождение штамма бактерий Штамм бактерий выделен от павшего пороснка в свинокомплексе ТОО ПСЗ Бекон Алматинской области, способ выделения прямой посев из слизистой оболочки пораженного участка тонкого отдела кишечника на мясопептонном бульоне и мясопептонном агаре. Выделенный штамм характеризуется следующими признаками Назначение штамма бактерий обладает выраженными иммунногенными свойствами по отношению к белым мышам. Используется для приготовления антигена предназначенного для иммунизации животных при получении гипериммунных сывороток или вакцинного препарата для профилактики протейной инфекции поросят. Состав среды и условия культивирования мясопептонный агар и мясопептонный бульон. Морфолого-культуральные свойства На мясопептонном агаре колонии голубоватодымчатого цвета, ползучий рост в виде нежной вуали (феномен роения), на среде Плоскирева колонии выпуклые с желтовато-розовым оттенком,правильных очертаний - формы. В мясопептонном бульоне образуют диффузное помутнение среды. Оптимальная температура роста 37 С 12-24 часов,рН 7,0-7,4 Бактерии штамма грамотрицательные палочки с закругленными концами от 0,4-0,8 х 1,0-3,0 мкм,подвижные с перетрехиальными жгутиками. Серологические свойства идет в реакции агглютинации с типовой сывороткой О-группы О 45 Св титре 11600. Физиолого-биохимические свойства 5 19923 Принадлежность к трофической группе хемогетеротроф. Типы катаболизма аэроб или факультативный анаэроб. Симбиотрофные отношения паразитизм. Источники углерода ферментирует глюкозу,галактозу, рамнозу, мальтозу, сахарозу, не ферментирует маннит, рафинозу, арабинозу, лактозу,адонит, инозит, сорбит, дульцит. Другие характерные физиологические особенности обмена не образует сероводород, индол, не разжижает желатин, не свертывает молоко. Маркерные признаки штамма из углеводов постоянно усваивает мальтозу. Способ, условия и состав сред для хранения Лиофильно высушенный или на полужидком агаре под вазелиновым маслом при температуре до 4 С. Способ, условия и состав сред для размножения штамма посев на мясопептонный бульон при температуре 37 С 24 часа. Штамм бактерий, используемый для получения поливалентной гипериммунной сыворотки против протейной инфекции поросят. Указанный штамм бактерий депонирован в лаборатории Музей культур микроорганизмов КазНИВИ. Идентификацию штамма микроорганизмов проводят по основным морфологическим, культуральным и физиологобиохимическим свойствам, согласно определителю ,(1974, 1984, 1997 гг.,справочные издания). Пример. В основе производства антигена были использованы общепринятые принципы получения бактериальной культуры на мясопептонном бульоне, доведенные физиологическим раствором до концентрации 4 млрд. микробных тел в 1 мл. Инактивирование выросших культур осуществляли формалином до 0,4 концентрации в готовом препарате при температуре 37-38 С. Культурысливаем в одну мкость. Полиантиген готовим путем смешивания антигенов из эшерихий, сальмонелл, стрептококков и протея в равных соотношениях. Готовый антиген по внешнему виду представляет собой жидкость желтокоричневого цвета, с незначительным количеством серого осадка, легко разбивающегося в гомогенную взвесь при встряхивании. По окончании инактивации полиантиген проверяем на чистоту и стерильность. Проверка на стерильность - высевы на питательные среды, безвредность - введением под кожу двум белым мышам по 0,3 мл антигена. Мыши остались здоровыми, а посевы стерильными в течение десяти дней. Показатель водородных ионов в готовом препарате составлял 7,0-7,2. Проверка на чистоту препарата показала, что инактивированный антиген был стерильным. Отсутствие осложнений у привитых свиней этим препаратом указывало на безвредность и на отстутствие реактогенности полиантигена. Использование предложенного консорциума микроорганизмов,состоящего из бактерийО 138 К 88,О 8 88,О 137,О 149, ,, , позволит гипериммунизировать свиней на откорме, для дальнейшего получения поливалентной иммунной сыворотки. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Консорциум штаммов бактерийО 138 88 (3-2001),О 8 88 (5-2001),О 137 (КазНИВИ 182002),149 (Каз НИВИ 212003),(-14167),(КазНИВИ 28-2002),(Каз НИВИ 9-2004),используемый для получения поливалентной гипериммунной сыворотки, для лечения и профилактики колибактериоза,сальмонеллза,протейной инфекции и стрептококкоза поросят.