Препарат для борьбы с хлопковой совкой

(51) 01 63/00 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(с титром не менее 2 х 1010 полиэдров/г) - 0,3- 0,5 Альгинат натрия 0,4- 0,6 Бычий альбумин 0,1- 0,2 Аскорбиновая кислота 0,07- 0,09 Хлорид кальция 0,3- 0,5 Вода до 100 Для получения препарата (в виде водной суспензии) сухой концентрат штамма ХС-17 растворяют в воде до нужной концентрации с добавлением стабилизирующих компонентов и прилипателя. Титр жидкой формы препарата составляет не менее 5109 полиэдров/мл. Расход препарата при наземно-очаговой обработке составляет 40 мл/га. Препарат безвреден для насекомых и позвоночных, обладает повышенной стабильностью при хранении и эффективно и специфически действует на личинки хлопковой совки. 3 табл., 5 прим.(76) Кошелев Юрий АнтоновичРыжиков Геннадий АлександровичРепин Владимир ЕвгеньевичКолосов Алексей Владимирович Залесов Алексей Сергеевич(54) ПРЕПАРАТ ДЛЯ БОРЬБЫ С ХЛОПКОВОЙ СОВКОЙ(57) Изобретение относится к микробиологической промышленности и биотехнологии. Предложен вирусный инсектицидный препарат, содержащий следующие компоненты, в мас. Сухой концентрат штамма ХС-17 23714 Изобретение относится к микробиологической промышленности и биотехнологии, а именно к производству биологических инсектицидов для сельского хозяйства на основе нового штамма вируса ядерного полиэдроза (ВЯП), патогенного для личинок хлопковой совки (ХС), являющихся опасным вредителем хлопчатника и многих других культурных растений. В биологических инсектицидах используются вирусы, вызывающие естественные эпизоотии в популяциях насекомых (Биологические средства защиты растений, М. 1974, 335-345), в том числе бакуловирусы. Палочковидные вирусы(бакуловирусы) представляют большую группу вирусов, инфицирующих только членистоногих насекомых ( (1981), в, . , (.). (. ) . 273-355). Многие бакуловирусы инфицируют насекомых, являющихся вредителями промышленно важных сельскохозяйственных и лесных культур. Такие бакуловирусы потенциально представляют собой ценные агенты биологического контроля. Одним из преимуществ бакуловирусов как биологических пестицидов является их специфичность по отношению к насекомому-хозяину. Бакуловирусы как группа инфицируют только членистоногих, а каждый индивидуальный штамм палочковидного вируса обычно инфицирует только один или несколько видов насекомых. Таким образом, они не представляют угрозы ни для окружающей среды, ни для человека и могут быть использованы без вреда для полезных видов насекомых. Группа бакуловирусов включает подгруппы вирусов ядерного полиэдроза (ВЯП), вирусов гранулеза (ВГ) и палочковидных вирусов, не образующих тела включения. У окклюдирующих форм палочковидных вирусов вирионы(заключенные в оболочку нуклеокапсиды) помешаются внутри кристаллической белковой матрицы. Такая структура, так называемое тело включения или тело вкрапления это форма нахождения вируса в природе вне организма,которая обуславливает передачу инфекции от организма к организму. Отличительной чертой ВЯП является то, что в каждом теле включения может содержаться много вирионов. Тела включения ВЯП обладают относительно большими размерами (до 5 мкм). Тела включения ВГ мельче и содержат по одному вириону. У обеих форм кристаллическая белковая матрица тел включения состоит главным образом из одного полипептида от 25000 до 33000 дальтон,называемого полиэдрином или соответственно,гранулином. Палочковидные вирусы неокклюдирующих форм не производят белок полиэдрин или гранулин и не образуют тел включения. Применение биологических инсектицидов является экологически оправдано. В отличие от химических средств защиты, например, ВЯП ХС 2 вызывает заболевание и гибель только личинок хлопковой совки, не оказывая вредного воздействия на другие виды животных (насекомых и позвоночных). Кроме того, стоимость получения вируса в пересчете на обрабатываемую площадь оказывается сравнимой со стоимостью используемых в настоящее время химических пестицидов. Известен инсектицидный препарат на основе штамма ВЯП НШ-2-85, ГКВ 2156, патогенного для личинок непарного шелкопряда (Патент РФ 2117701, кл, С 12 7/00, оп.20.08.1998). Для получения препарата партию гусениц непарного шелкопряда по достижению ими четвертой возрастной стадии инфицируют ВЯП (штамм НШ-285) и скармливают зараженный корм гусеницам НШ. Затем личинки собирают, лиофилизируют и переносят в аппарат для удаления волосков,являющихся сильным аллергеном. Лишенные волосков лиофилизированные гусеницы размалывают для получения сухого вирусного порошка. В качестве наполнителя используют цеолит или кремниевую кислоту. Препарат в сухой форме представляет собой порошок белого цвета с титром не менее(2-5)109 полиэдров/г. Титр жидкой формы препарата составляет не менее 1109 полиэдров/мл. Биологическая активность препарата составляет 4102 полиэдров/мл. Препарат использовался с титром 5 х 107 полиэдров/г в виде водного 0,1-ного раствора с ПАВ ОП-7. Расход препарата при наземно-очаговой обработке составляет 1,1- 0,3 мл/га. Срок хранения препарата составляет 12 месяцев при температуре 4-6 С. Недостатком известного препарата является недостаточная биологическая активность препарата,отсутствие значимой вирулентности по отношению к хлопковой совке и низкая стабильность при хранении. Известен инсектицидный препарат на основе штамма -13- ВЯПпротив непарного шелкопряда Вирин-ЭНШ, полученный путем адаптации ВЯП ивовой волянки к НШ (Итоги и перспективы производства и применения вирусных препаратов в сельском и лесном хозяйстве. Сб., М., 1984, с.3-14). Биологическая активность препарата (ЛД 50), полученного на основе штамма -13-, для гусеницсоставляет 4105 полиэдров на гусеницу. Биологическую активность препаратов на основе штаммов вирусов оценивают путем определения величины Д 50 - дозы вируса (полиэдров на гусеницу),вызывающей гибель 50 инфицированных насекомых, и 50 - время (в сутках), за которое погибает 50 гусениц,инфицированных дозой 107 полиэдров/гусеницу. Недостатком известного препарата является низкая вирулентность по отношению к непарному шелкопряду. Известен инсектицидный препарат против капустной совки на основе штамма ВЯП(-1-5) ВКПМ -1 (.с. СССР 1638161, кл. С 127/00, . 30.03.91) Биологическая активность препарата (ЛД 50), 23714 полученного на основе штамма -1-5 для гусеницсоставляет 0,2105 полиэдров на гусеницу. Недостатком препарата на основе штамма -1-5 является низкая вирулентность по отношению к капустной совкеи отсутствие значимой вирулентности по отношению к хлопковой совке. Наиболее близким к заявляемому препарату прототипом, является инсектицидный препарат против капустной совки на основе штамма ВЯП(КС-3-86) ГКВ 2155 (Патент РФ 2153258, кл. А 01 63/00, оп. 27.07.2000). В качестве наполнителя используют цеолит или кремниевую кислоту. Препарат в сухой форме представляет собой порошок белого цвета с титром не менее (2-5)109 полиэдров/г. Для получения жидкой формы препарата (в виде суспензии) перед применением сухой препарат растворяют в воде до нужной концентрации с добавлением поверхностноактивного вещества (ПАВ), например ОП-7. Титр жидкой формы препарата составляет не менее 1109 полиэдров/мл. Биологическая активность препарата ЛД 50, полученного на основе штамма КС-3-86 для гусениц, составляет (2,3-7,0)104 полиэдров на гусеницу. Расход препарата при наземно-очаговой обработке составляет 1,1- 0,3 мл/га. Срок хранения препарата составляет 12 месяцев при температуре 4-6 С. Недостатком препарата на основе штамма КС-386 является недостаточная вирулентность по отношению к капустной совке,отсутствие значимой вирулентности по отношению к хлопковой совке и низкая стабильность при хранении. Технической задачей предлагаемого изобретения является создание нового инсектицидного препарата на основе штамма ХС-17 ВЯП хлопковой совки,который бы обладал большей эффективностью и стабильностью при хранении. Поставленная задача достигается новым вирусным инсектицидным препаратом, содержащим следующие компоненты, в мас. Сухой концентрат штамма ХС-17 (с титром не менее 2 х 1010 полиэдров/г) - 0,3- 0,5 Альгинат натрия 0,4- 0,6 Бычий альбумин 0,1- 0,2 Аскорбиновая кислота 0,07- 0,09 Хлорид кальция 0,3- 0,5 Наполнитель (Вода) до 100 Для получения препарата (в виде водной суспензии) сухой концентрат штамма ХС-17 растворяют в воде до нужной концентрации с добавлением стабилизирующих компонентов. Препарат используют с титром не менее 5 х 109 полиэдров/мл в виде водного 0,02 раствора с прилипателем. В качестве прилипателя преимущественно используют глицерин или прилипатель ИЗ или натрий карбоксиметилцеллюлозу (-КМЦ) в стандартных концентрациях. Расход препарата при наземноочаговой обработке составляет 40 мл/га. Препарат хранят от 0 до 15 в сухой форме в виде порошка от светло-серого до светлокоричневого цвета. Гарантированный срок хранения препарата при температуре 15 С составляет не менее 18 месяцев. Стабилизирующие компоненты быстро разлагаются почвенной микрофлорой и являются абсолютно безопасными для окружающей среды. Биологическая активность препарата (ЛД 50),составляет (1-2)102 полиэдров/г, а биологическая эффективность (процент смертности гусениц) лежит в интервале 88-96. Используемый в препарате штамм вируса ядерного полиэдроза ХС-17 задепонирован в НИИ Коллекция культур микроорганизмов ГНЦ ВБ Вектор (НИИ ККМ ГНЦ ВБ Вектор) под регистрационным номером -06. Стандартные условия культивирования штамма гусеницы хлопковой совки содержатся при температуре 28 С и влажности 60 на искусственной питательной среде(ИПС) следующего состава мука люцерновая - 88 г, мука кукурузная - 35 г, дрожжи кормовые - 44 г, кислота аскорбиновая - 4,4 г, бензойная кислота - 2,0 г, агар 15 мл, вода дистиллированная-до 1000 мл. Физико-химические свойства размеры полиэдров (мкм) 1-3, размеры вирионов (нм) 40080, нуклеокапсидов 31050 нм. Тип включения вирионов - одиночный. ДНК кольцевая ковалентнозамкнутая, мол.вес 121,4 МД. Рестрикционный анализ ДНК вируса сайты рестрикции (количество) для- 7, Ва - 9,- 7. Белковый состав вируса 27 полипептидов. М.вес основных от 64 до 18 МД. Круг хозяев хлопковая совка. Патогенность для человека непатогенен. Определяющими отличиями предлагаемого препарата по сравнению с препаратомпрототипом, являются в качестве действующего вещества используют сухой концентрат штамма ХС-17 с титром не менее 21010 полиэдров/г, что позволяет повысить биологическую эффективность препарата до 88-96 в качестве стабилизирующих добавок используют оптимально подобранный комплекс компонентов,обеспечивающий стабильность препарата при хранении за счет ингибирования радикальных и иных негативных процессов в препарате,вызывающих деактивацию действующего вещества. В частности, альгинат натрия обеспечивает вязкость препарата и защиту от солнечного облучения бычий альбумин и хлорид кальция несут буферную функцию, поддерживая постоянное рН препарата аскорбиновая кислота, обладающая антиоксидантным действием,позволяет ингибировать свободнорадикальные процессы в препарате. В результате удается сохранить активность действующего вещества на уровне 8896 в течение не менее 18 месяцев. Изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения. 3 23714 Пример 1. Технология получения действующего вещества (сухого концентрата штамма ХС-17) вирусного инсектицидного препарата. Технология производства вирусных препаратов осуществляется по следующей схеме выращивание насекомых, культивирование в них вирусов, сбор погибших гусениц, выделение вирусной биомассы и получение готового продукта. Партию гусениц хлопковой совки по достижении ими третьей возрастной стадии инфицируют вирусом ядерного полиэдроза (штамм ХС-17). Для этого искусственную питательную среду (корм) опрыскивают вирусной суспензией штамма ХС-17 с титром 2105 полиэдров/мл и скармливают зараженный корм гусеницам ХС. Гусениц ХС содержат при 271,5 С и влажности 65. Время инкубирования инфицированных гусениц 8-10 дней. При этом гибель насекомых составляет не менее 75. Затем личинки собирают с помощью вакуумного насоса с давлением (8,70,1)104 Па в посуду из толстостенного стекла, добавляют раствор диэтилтиокарбоната натрия до конечной концентрации 0,1 и хранят при температуре от минус 5 до минус 10 С не более года. Для очистки вируса к биомассе из погибших гусениц добавляют дистиллированную воду и размельчают с помощью гомогенизатора. Полученный гомогенат фильтруют через 2 слоя капроновой ткани с ячейками 0,1 мм,затем фильтрат осаждают центрифугированием. Осадок высушивают на лиофильной установке. Действующее вещество в сухой форме представляет собой порошок белого цвета с титром не менее 21010 полиэдров/г. Для получения препарата в емкость необходимого объема вносят действующее вещество, добавляют небольшое количество воды,перемешивают,добавляют стабилизирующие компоненты и доводят объем водой до 100. Титр живых вирусов составляет не менее 5 х 109 полиэдров/мл. Пример 2. Исследование токсичности и патогенности вирусного препарата на основе штамма ХС-17 Проведена инфекционно-токсикологическая оценка препарата на основе штамма ХС-17 (рабочее название Вирин ХС 17),содержащего следующие компоненты, в мас. Сухой концентрат штамма ХС-17(с титром не менее 2 х 1010 полиэдров/г) - 0,4 Альгинат натрия 0,5 Бычий альбумин 0,12 Аскорбиновая кислота 0,09 Хлорид кальция 0,4 Вода до 100 Испытания безопасности для теплокровных выполнены в соответствии с Методическими указаниями по оценке новых пестицидов. МЗ СССР,1988 г. и рекомендациями ВОЗ/ФАО, Женева,1975 г, по испытанию безопасности бакуловирусов. Проведены эксперименты по выявлению токсичности-патогенности препарата на мышах. 5 группам мышей (массой 18-20 г) по 10 в каждой вводили суспензию препарата в желудок и в 4 брюшину из расчета по 1 мг препарата на 1 г веса. Контрольной группе вводили раствор 0,9 по 0,2 мл. Введение дозы 1000 мг препарата на 1 кг веса не приводит к гибели животных при введении в желудок. При внутрибрюшинном введении ЛД 50 составляет 1000 мг/кг веса. При вскрытии погибших животных выявлено наличие уплотненного воспалительно-некротического очага, а также мелкие комковатые скопления введенного материала в брюшной полости (нерастворимые частицы наполнителя), у 20 животных отмечена увеличенная селезенка, как следствие реакции на выведение кремнийсодержащих материалов. При этом термометрия, взвешивание, гематологические исследования живых мышей не выявили существенных отклонений от физиологической нормы. Серологические исследования, проведенные иммуноферментным и иммунофлуоресцентным методом не выявили специфического бакуловирусного антигена ВЯП ХС в крови и органах животных на 28 день обследования. Кожно-резорбтивное действие изучалось на гвинейских свинках при разовом и многократном нанесении препарата на основе штамма ХС-17 на неповрежденную и скарифицированную кожу. Контрольным группам наносили 0,9 . Было установлено, что во всех случаях однократное нанесение не вызывало заметных местных или общих реакций у животных. Так же не выявлено отклонений от показателей в опытных группах при термометрии или взвешивании животных в течение 14 дней. Многократное нанесение на скарифицированную кожу сопровождалось местной реакцией раздражения,которое проходило через 4-5 дня после окончания воздействия. Изучение раздражающего действия препарата на слизистую глаз кроликов показало, что однократное воздействие не вызывает раздражение слизистых, а многократное приводило к развитию конъюнктивитов. Выздоровление наступало через 57 дней после последнего воздействия. Повреждений роговицы и повышения температуры не отмечено. Инфекционная оценка препарата проведена на теплокровных. Исследования проводили на культуре клеток эмбриональной ткани человека(ЧЭТ). Культуры инфицировали вирионами ВЯП штамма ХС-17 по 0,02 мл на пробирку с титром 1/512 по ИФА. Было проведено 7 пассажей патогенов. С помощью ИФА и ИФ-метода выявляли возможную адаптацию или репродукцию вируса. Установлено, что инфицирование ЧЭТ вирионами ВЯП штамма ХС-17 не приводит к цитопатическим изменениям монослоя клеток. В процессе пассажей исходного материала специфический антиген в культурах не выявлялся. Проводили инфицирование лабораторных животных различного возраста при разных способах введения (в желудок, в нос, в брюшину, в вену, под кожу) суспензией препарата на основе штамма ВЯП-7. С помощью специально разработанных тестсистем определяли динамику антигенов в крови и 23714 внутренних органах испытуемых животных методами ИФА и РИФ. В результате проведенных исследований установлено, что вирусный антиген в крови и во внутренних органах теплокровных животных не накапливается и обычно элиминируется из организма к 7 - 14 дню после введения. Во всех случаях визуальные наблюдения и термометрия не выявили отклонений от физиологической нормы. Таким образом, результаты исследования токсичности-патогенности вирусного препарата на основе штамма ХС-17 показали, что препарат можно отнести к малотоксичным веществам(четвертая группа по гигиенической классификации). ЛД 50 при введении в желудок лежит за пределами 2500 мг/кг,при внутрибрюшинном - за пределами 1000 мг/кг. Действующее вещество препарата на основе штамма ВЯП ХС-17 не токсично для теплокровных, не репродуцируется в теплокровном организме, не вызывает инфекционного процесса. Пример 3. Сравнительные данные биологической активности заявляемого препарата на основе штамма ХС-17 (Вирин-ХС-17) и препаратов-аналогов. Для получения сравнительных данных параллельно из разных партий гусениц,инфицированных разными штаммами вирусов,получают вирусный материал на основе известных препаратов на основе штаммов -1-5, КС-3-86 и заявляемого препарата на основе штамма ХС-17. Биологическую активность известных и заявляемого препарата оценивали путем определения величины ЛД 50 - дозы препарата(полиэдров на гусеницу), вызывающей гибель 50 инфицированных насекомых, и ЛВ 50 время (в сутках), за которое погибает 50 гусениц,инфицированных дозой 107 полиэдров/гусеницу(пэ/гус). Расчет проводили по методу Кербера,гибель насекомых определяли с поправкой по формуле Аббота (Ашмарин И. П., Воробьев А.А. // Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л. Медгиз, 1962, с, 82-93). Данные приведены в таблице 1. Анализ таблицы показывает, что заявляемый препарат на основе штамма ХС-17 патогенен для гусениц ХС, причем по своей активности превышает инсектициды, полученные на основе известных штаммов -1-5, КС-3-86. Пример 4. Испытание препарата на основе штамма ХС-17 в полевых условиях. Испытания проведены в фермерском хозяйстве Дилфуза-Хасанбай-Зухрахол Чартакского района Наманганской области в объеме крупноделяночного опыта, согласно Методическим указаниям по испытанию инсектицидов,акарицидов,моллюскоцидов в растениеводстве, Москва, 1986 и Методическим указаниям по испытанию инсектицидов, акарицидов, биологически активных веществ и фунгицидов, Ташкент, 2004. Посев хлопчатника сорт С-65-24, произведен 10 апреля 2007 года. Высота стояния 85 - 90 см. Густота - 8-9 растений в 1 погонном метре. Испытывали препарат, содержащий следующие компоненты, в мас. Сухой концентрат штамма ХС-17(с титром не менее 2 х 1010 полиэдров/г) - 0,3 Альгинат натрия 0,4 Бычий альбумин 0,1 Аскорбиновая кислота 0,07 Хлорид кальция 0,3 Вода до 100 Перед применением к препарату добавляли разработанный в институте зоологии АН РУз прилипатель ИЗ в количестве 20 г на 200 л воды. Препарат использовали с титром 5109 полиэдров/мл в виде водного 0,02-ного раствора. Всего обработана территория площадью 1 га. Расход препарата составил 40 мл/га. Обработка проводилась при помощи ручного опрыскивателя К 90 и тракторного опрыскивателя ОВХ-28. В процессе испытаний установлено гибель насекомых наступала через 7-10 суток после обработки. При обследовании гусениц ХС через 7 суток обнаружено, что процент их гибели составляет 75, через 10 суток - 92, а при последующем обследовании через 15 суток - 96. Биологическая эффективность препарата на основе штамма ХС-17 составила 92-96 . Пример 5 Испытания препарата Вирин-ХС-17 проводили на посевах хлопчатника фермерского хозяйства Дилфуза-Хасанбай-Зухрахол в Чартакском районе Наманганской области республики Узбекистан в объеме мелкоделяночного опыта. Критерий положительной оценки биологической эффективности препарата для борьбы с хлопковой совкой - 85.0. Испытывали препарат, содержащий следующие компоненты, в мас. Сухой концентрат штамма ХС-17(с титром не менее 2 х 1010 полиэдров/мл) - 0,5 Альгинат натрия 0,6 Бычий альбумин 0,2 Аскорбиновая кислота 0,09 Хлорид кальция 0,5 Вода до 100 Препарат использовали с титром 21010 полиэдров/г в виде водного 0,02-ного раствора. В качестве прилипателя использовали глицерин или натрий карбоксиметилцеллюлозу (-КМЦ) в стандартных концентрациях. Воду для разведения препарата брали из арычной сети. Культура. Хлопчатник сорта С-65-24. Посев 10.04.07. К началу учетов (21.07.07) высота стояния растений 85-90 см, густота стояния - 8-9 растений на 1 погонный метр. Растения находились в фазе цветения и образования коробочек. Обработку растений рабочими растворами заявляемого препарата производили дважды с интервалом 5 дней в вечернее время после захода солнца. При проведении мелкоделяночных экспериментов для обработки растений использовали ранцевый опрыскиватель К-90 (расход рабочей суспензии препарата - 5 л на 1 сотку). В 5 23714 качестве контроля использовали необработанный Результаты учетов численности хлопковой совки участок, а в качестве эталона, участок (2 га) (количество гусениц на 100 растений) представлены обработанный химическим препаратом Регент, в табл. 2. 20 к.э Результаты расчета биологической Вариант 1 0.1 мл препарата на 5 л воды с эффективности испытываемого препарата и эталона прилипателем ИЗ.(в процентах) приведены в таблице 3. Вариант 2 0.1 мл препарата на 5 л 10 водного Полученные результаты свидетельствуют о том,р-ра глицерина что заявляемый препарат обладает высокой Вариант 3 1.0 мл препарата на 5 л воды с биологической эффективностью, составляющей прилипателем ИЗ. 93,4-96. Во всех вариантах удалось добиться Вариант 4 1.0 мл препарата на 5 л 10 водного снижения численности гусениц хлопковой совки до р-ра глицерина экономически безопасного уровня, в то время как в Эталон Регент, 20 к.э., 0.12 л/га. Норма контрольных пробах количество гусениц превышало расхода рабочей жидкости 200 л/га. допустимый порог. Контроль Без обработки Препарат на основе штамма ВЯП ХС-17 удобен Учеты численности вредителя на опытных для применения в производственных условиях с делянках проводили перед первичной обработкой использованием любых существующих марок растений препаратами (предварительный учет), мелкодисперсных опрыскивателей,является затем на второй, пятый (перед повторной экологически чистым и обладает избирательным обработкой), восьмой, одиннадцатый и пятнадцатый действием к целевому насекомому - хлопковой дни после первичной обработки. совке. Препарат для борьбы с вредителями хлопчатника Таблица 1 Наименование препарата Биологическая активность, ЛД 50 разведения препарата Полиэдры/1 гусеница Вирин-ХС-17 (штамм ХС 0,0005(2,3-7,0)104 Штамм -1-5 0,1 0,2105 Таблица 2 Дни после первого заражения Контроль Вариант 1.1. Вариант 1.2. Вариант 1.3 Вариант 1.4. Эталон Дни после первого заражения Вариант 1. Вариант 2. Вариант 3 Вариант 4. Эталон бычий альбумин, аскорбиновую кислоту и хлорид кальция при следующем соотношении компонентов,Препарат для борьбы с хлопковой совкой, в мас. сухой концентрат штамма ХС-17 включающий действующее вещество на основе(с титром не менее 21010 полиэдров/г) 0,3-0,5 штамма вируса ядерного полиэдроза,альгинат натрия 0,4-0,6 приемлемые добавки и наполнитель,бычий альбумин 0,1 -0,2 отличающийся тем, что в качестве действующего аскорбиновая кислота 0,07-0,09 вещества он содержит сухой концентрат штамма хлорид кальция 0,3-0,5 ХС-17 вируса ядерного полиэдроза хлопковой совки,наполнитель (вода) до 100. а в качестве добавок содержит альгинат натрия,Верстка Косалиева Б.А. Корректор Мадеева П. А. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ