Противоопухолевое средство

(51) 61 36/282 (2011.01) 61 35/00 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и может быть использовано для лечения опухолевых заболеваний. Задачей изобретения является определение наличия противоопухолевого действия. Технический результат - применение сантонина семикарбазона для лечения злокачественных новообразований. Технический результат достигается путем применения сантонина семикарбазона в качестве противоопухолевого средства для лечения перевиваемых опухолей у животных, вызванных опухолевыми штаммами карциномы Эрлиха солидной, меланомы В 16, карциномы легких Льюис,карциносаркомы Уокер, лимфосаркомы Плисса.(76) Арыстанова Танагуль Акимбаевна Серикбаева Айгуль Джумадуллаевна Рахимов Кайролла Дуйсенбаевич Рахимова Айнур Кайроллаевна Темиргалиева Эльмира Маратовна Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и может быть использовано для лечения опухолевых заболеваний. В качестве нового средства с противоопухолевым действием предлагается сантонина семикарбазон. Фиг. Современная медицина располагает достаточно обширным арсеналом лекарственных препаратов для химиотерапии опухолей. В основном химиотерапевтические средства представлены группой цитостатических препаратов, среди которых наиболее распространенными и эффективными являются алкилирующие цитостатики типа циклофосфана, хлорбутина и сарколизина. К воздействию этих цитостатиков чувствительны и нормальные быстро делящиеся клетки, в особенности клетки костного мозга, в меньшей мере клетки кожи, е придатков, таких, как волосы, и клетки слизистых оболочек, в частности эпителий желудочно-кишечного тракта. Из-за более низкой цитостатической, антипролиферативной активности в меньшей степени применяются препараты из группы аптиметаболитов (азатиоприн,фторурацил и др.). Препараты бактериального(рубромицин и др.) происхождения имеют также ограниченное применение из-за высокой токсичности и узкого терапевтического спектра действия (лечение некоторых разновидностей опухолей, преимущественно с экзофитным ростом)(М.Д.Машковский. Лекарственные средства. -Новая волна, 2010.-1216 с). Препараты растительного происхождения,обладающие низкой токсичностью, высокой биодоступностью и широким спектром регулирующих эффектов, находят все большее применение в онкологической практике. В современной химиотерапии рака особое место занимают вещества природного, в частности растительного происхождения,среди них сесквитерпеновые лактоны известны как потенциальные ингибиторы роста опухолей. К числу природных соединений,содержащих сесквитерпеновый лактон и представляющих большую ценность для медицины в качестве основы для создания новых высокоэффективных противоопухолевых и иммуностимулирующих препаратов можно отнести сантонин - основной биоактивный компонент полыни цитварной(,). Полынь цитварная является ценным эндемическим растением Казахстана, произрастающим только в южных регионах Казахстана. Сантонин обладает широким спектром фармакологического действия 2 антигельминтной,противовоспалительной,антипиретической,гемолитической,кардиотонической, иммуномодулирующей, в том числе собственной противоопухолевой активностью,издавна применяется в народной медицине для лечения злокачественных новообразований желудка,пищевода и 12-перстной кишки (Рыбалко К.С. Природные сесквитерпеновые лактоны.- М., 1998. 320 с..,// ... . -. 45. -2010, . 6045-6051.,.,-//. . . -2006. . 281. -. 13117-13125). Задачей изобретения является определение наличия противоопухолевого действия. Указанная задача решается применением сантонина семикарбазона в качестве противоопухолевого средства на опухолевой культуре карциномы Эрлиха солидной,аденокарциномы молочной железы (Са 755),меланомы В 16, эпидермоидной карциномы легкого Льюиса , карциносаркомы Уокера. Пример 1. Изучение противоопухолевой активности сантонина семикарбазона. Исследования проводились в соответствии с требованиями Методических указаний по изучению противоопухолевой активности фармакологических веществ 5. В работе использованы мыши массой 18-25 г линий , 571, 2, гибриды первого поколения 1 и белые беспородные крысы массой 180-250 г., линии Вистар. Исследовано влияние сантонина семикарбазона на перевиваемые опухоли, вызванные следующими опухолевыми штаммами солидная карцинома Эрлиха,аденокарцинома молочной железы Са 755, меланома В 16, карцинома легких Льюис, лейкемия Р 388,карциносаркома Уокер, лимфосаркома Плисса,саркома 45. Карцинома Эрлиха перевита подкожным введением 106 клеток мышам линиилейкемия Р 388 -впутрибрюшинным введением 106 клеток мышам 2 меланома В 16 подкожным введением 0,2 мл 25 взвеси опухолевых клеток мышам С 57 В 1 Са 755 и опухоль Льюис - подкожным введением такой же взвеси мышам гибридам карциносаркому Уокер,лимфосаркому Плисса и саркому 45 -подкожным введением 0,4 мл 25 взвеси крысам. День перевивки опухоли считается нулевым. Противоопухолевый эффект оценен по задержке роста опухолей и по увеличению продолжительности жизни животных. Результаты оценивали на 14-й день после перевивки. Полученные результаты сравнили с контролем,обрабатывали статистически. Коэффициент ингибиции опухоли определяли по формуле,а продление сроков жизни в днях по формуле УПЖСПЖопыта-СПЖконтроля/СПЖконтроля 100 Анализ результатов показал следующеепод воздействием сантонина семикарбазона в пяти случаях (карциномы Эрлиха солидной,меланомы В 16,эпидермоидной карциномы легкого Льюиса , карциносаркомы Уокера,лимфосаркома Плисса) имеет место достоверной задержки роста перевиваемых опухолей (79-91 ), в случае саркомы 45 наблюдается умеренная задержка роста, полученные результаты были на грани достоверности, в случае аденокарциномы молочной железы(Са 755) и лейкемии Р 388 противоопухолевый эффект отсутствуетсантонина семикарбазона при лечении животных с опухолями меланома В 6 и карцинома Эрлиха солидная в 1,3 и 1,5 раза,соответственно, увеличивает продолжительность жизни животных. Пример 3. Изучение острой токсичности сантонина семикарбазона. Исследования проводились в соответствии с требованиями Методических указаний по изучению общетоксического действия противоопухолевых фармакологических веществ(Хабриев Р.У. (под ред.). Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ.-Медицина,2005.- 832 с.) Исследование острой токсичности сантонина семикарбазона в каждом случае выполнено на 90 мышах линиимассой 20-25 г. Случайным выбором сформированы 2 контрольные группы по 15 особей - самцы и самки, и 10 групп по 6 особей по 5 групп самцов и самок. Соединение растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) и 2-ном водном растворе и вводили однократно в различных дозах 80 мг/кг до 1000 мг/кг массы тела. Токсичность нового соединения изучена в сравнении с 5 фторурацилом. У животных в группах с дозой исследуемого соединения 200 и 300 мг/кг двигательная активность и иные внешние признаки поведения не изменялись. В группе 400 мг/кг мыши были менее активны. В группах 500 и 600 мг/кг мыши частично лежали, их двигательная активность в среднем восстанавливалась через 2 часа, гибель части животных отмечена только в первые сутки. Результаты представленные в таблице 3 свидетельствуют о низкой токсичности (в 4,0 - 4,5 раза) сантонина семикарбазона по сравнению с фторурацилом. Пример 4. Изучение хронической токсичности сантонина семикарбазона. Исследование хронической токсичности сантонина семикарбазона выполнено на 180 беспородных крысах обоего пола и трех собаках. Сантонина семикарбазон вводили ежедневно в течение 30 дней в дозах 25, 50 и 100 мг/кг,фторурацил в дозах 12,5, 25 и 50 мг/кг(сформированы по 3 группы крыс-самок и 3 самцов из 20 особей в группе и по 2 контрольные группы из 30 животных масса животных - 150-170 г). Собакам(самец массой 16 кг и самка - 15 кг в контроле масса 15 кг) вводили семикарбазон по 50 мг на животное, фторурацила по 25 мг (самец массой 8 кг и самка - 8,5 кг, контроль общий). Наблюдение за животными вели ежедневно, взвешивали и измеряли температуру раз в неделю. Биохимические исследования вели через каждые 2 недели в течение 2 месяцев. В период проведения опыта и по его завершении не отмечено каких либо изменений в поведении животных, их отношении к корму,привес массы соответствовал контрольным данным,не отмечено пирогенного действия, не повреждает желудочно-кишечный тракт - нет диареи, язв и кровоизлияний в желудке и кишечнике, не установлено морфологических изменений слизистых желудка, тонкого и толстого кишечника. Исследуемое вещество не повреждают кроветворных и лимфоидных тканей, что следует из состава крови, отсутствии уменьшения массы селезенки и морфологических изменений в ней, а также в костном мозге и лимфоузлах костный мозг представлен всеми ростками кроветворения, не обладает гепатотоксичностью уровень общего белка, билирубина, активностей АЛТ и щелочной фосфатазы всегда в норме морфологических изменений в печени не обнаружено масса печени в норме. То же относится и к нефротоксичности не обнаружено увеличения мочевины и креатинина в сыворотке крови, в моче не обнаружено появления белка и глюкозы, ее удельный вес в норме, масса почек не отличается от контроля. Таким образом, полученные экспериментальные данные подтвердили наличие противоопухолевого действия у сантонина семикарбазона. Сравнительно низкая токсичность сантонина семикарбазона по сравнению с фторурацилом,отсутствие ингибирующего влияния на пролиферирующие ткани, избирательное цитотоксическое действие указывает на преимущества данного фармакологического вещества в отличие от известных противоопухолевых цитостатистических препаратов. Назначение сантонина семикарбазона с лечебной целью будет иметь выраженный экономический эффект,так как это фармакологическое вещество получено путем модификации основного компонента доступного отечественного эндемического лекарственного растения - полыни цитварной. Влияние сантонина семикарбазона, вводимого в дозе 100 мг/кг, на рост перевивных опухолей Группа Объем опухолей в мм 3,торможения Дни после трансплантации опухолей 7 10 12 14 3 4 5 6 Солидная карцинома Эрлиха 24527 45786 1403273 3717705 213 12114 35767 555129 91 74 75,85 21453 212160 2530241 3206622 378 21660 367134 591160 91 90 86 83 Карцинома легких Льюис контроль 387 11127 20734 35211 Сантонина 3-7 62 367 11227 14226 семикарбазон 84 68 46 56 Меланома В 16 Контроль 1038 26926 55754 84698 Сантонина 1-4 213 12114 35767 555129 семикарбазон 91 74 75 85 Карцинома Уокер контроль 832203 3716569 68411054 Сантонина 1-4 14481 884196 2319490 семикарбазон 83 74 65 контроль 903146 5428537 6454154 Сантонина 3-7 52135 872154 3305667 семикарбазон 84 86 55 Контроль 124533 4551778 101781454 191562498 Сантонина 1,4,7,10 16136 14212484357992 56542614 семикарбазон 79 65,67 78 Лимфосаркома Плисса Контроль 42451102 25911369 321981854 Сантонина 3-7 1061163 101212448 145572792 семикарбазон 79 62 52 Примечания - В каждой группе было от 8 до 12 животных различия достоверны Таблица 2 Влияние сантонина семикарбазона, вводимого в дозе 100 мг/кг, на продолжительность жизни мышей Группа Солидная карцинома Эрлиха Контроль Таблица 3 Результаты изучения острой токсичности сантонина семикарбазона и 5-фторурацила для белых мышей и крыс при внутрибрюшинном введении Соединение ЛД 50, мг/кг Белые мыши Сантонина семикарбазон 480 5-фторурацил 100 МПД, мг/кг Крысы Белые мыши 315 280 105 55