Инактивированная вакцина против трихофитии плотоядных животных

(51) 61 39/116 (2006.01) 61 31/10 (2006.01) 12 1/14 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ инактивированной вакцины против трихофитозной инфекции. Инактивированная вакцина против трихофитии плотоядных животных, включающая антиген штамма гриба, его ресуспензирование солевым раствором натрия хлорида с добавлением геля гидрата окиси алюминия и дистиллированной воды, она в качестве антигена содержит штамм гриба-0037 КазНИВИ и дополнительно глицерин и формалин при следующих соотношениях компонентов, мас. антиген из штамма-0037 КазНИВИ(2,0 мг белка в 1,0 см 3 вакцины) 10,0-15,0 гель гидрата окиси алюминия(72) Умитжанов Мынбай Бижанов Болат Рахметович Шевцова Елена Анатольевна Боранбаева Райхан Султанмуратовна Арысбекова Алтынай Танибергеновна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт(54) ИНАКТИВИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ТРИХОФИТИИ ПЛОТОЯДНЫХ ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к области биотехнологии,микологии,микробиологии,иммунологии, а именно противомикологических вакцин и может быть использовано для активной профилактики трихофитии плотоядных животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении стабильной,безвредной и высокоэффективной 22265 Изобретение относится к области биотехнологии,микологии,микробиологии,иммунологии, а именно противомикологических вакцин и может быть использовано для активной профилактики трихофитии плотоядных животных. Известна инактивированная вакцина против дерматомикозов сельскохозяйственных животных,включающая антиген штамма гриба,его ресуспензирование солевым раствором натрия хлорида с добавлением геля гидроокиси алюминия и дистиллированной воды Патент Российской Федерации 0284241, кл. А 61 К 39/00, 1997. Недостатком вакцины против дерматомикозов сельскохозяйственных животных и кроликов является, то, что она не достаточно наджно защищает от указанного возбудителя трихофитозной инфекции. Задачей изобретения является повышение иммуногенности вакцины и расширение диапазона эффективности специфической профилактики и лечения трихофитии плотоядных животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении стабильной,безвредной и высокоэффективной инактивированной вакцины против трихофитозной инфекции. Инактивированная вакцина против трихофитии плотоядных животных, включающая антиген штамма гриба и его ресуспензирование солевым раствором натрия хлорида с добавлением геля гидрата окиси алюминия и дистиллированной воды,она в качестве антигена содержит штамм гриба-0037 КазНИВИ и дополнительно глицерин и формалин при следующих соотношениях компонентов, мас. антиген из штамма-0037(2,0 мг белка в 1,0 см 3 вакцины) 10,0-15,0 гель гидрата окиси алюминия(98 химически чистый) 8,0-12,0 формалин 8,0-12,0 физиологический раствор остальное. Штамм гриба, используемый для изготовления инактивированной вакцины против трихофитии плотоядных животных, депонирован в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО КазНИВИ и обладает следующими свойствами. Штамм гриба-0037 КазНИВИ. Морфологические признаки. Молодые клетки штамм гриба окрашивается грамположительно,мицелий ровный, ветвящийся, шириной 0,6-3 мкм,встречаются спиралевидные и кольцевидные окончания гиф. Микроконидии диаметром 2-4 мкм размер макроконидии - 5-10 х 30-45 мкм артроспор отсутствуют хламидиоспоры единичные или отсутствуют. Штамм гриба 0037 КазНИВИ имеет неокрашенный ровный,ветвистый,септированный мицелий,распадающихся на фрагменты, терминальные гифы 2 иногда образуют спирали (обычно до 5-х завитков). Микроконидии многочисленные, круглые, реже грушевидные и удлиненные. На сусло-агаре штамм образует хорошо развитые белые, плоские,мучнистые колонии с ровным краем. Макроконидии немногочисленные,с закругленными концами или отсутствуют. Культуральные свойства. На сусло агаре к 14-му дню формируются колонии белые, желтоватые,розоватые, плоские, ровные, мучнистые, зернистые или бархатистые, растущий край розовый или звездчатый, обратная сторона колонии желтоватая или красно-коричневая, колония покрывает всю поверхность питательной среды. Молодые колонии белые, с возрастом слегка желтеют. Встречаются приподнятые колонии, представленные в основном белым воздушным мицелием. Культура испытывает потребность в витаминах, аминокислотах и минеральных веществах для увеличения роста и спорообразования. Спорообразования. Максимальный уровень спорообразования на сусло-агаре 430,0 млн/см 3. Аэроб. Оптимальная скорость роста при температуре 26-28 С, рН 7,2-7,4. Особенности ультраструктуры. Мицелий ровный ветвящийся диаметром от 0,6-3,0 мкм, встречается спиралевидные и кольцевидные окончания гиф,имеет завитки до 4-5 раз. Микроконидии многочисленные круглые или грушевидные диаметром до 5 мкм,макроконидии немногочисленные с закругленными концами,удлиненно-овальные длиной до 45 мкм разделенный от 3 до 5 клеток. Хламидоспоры редкие, округлые диаметром до 10 мкм. Артроспоры отсутствуют. Биохимические свойства. Ферментативная активность гриба в отношении белков, углеводов и жиров более яркая, чем у других видов дерматофитов. Антигенные свойства. На введение культуры штамма-0037 КазНИВИ в организме кроликов образуются специфические агглютинины в титрах 140-11280. Безвредность. Штамм гриба-0037 КазНИВИ слабо реактогеннен для кроликов при внутримышечном введении. У привитых животных спустя 14 дней на месте инъекции развивается специфически локализованный, поверхностный очажок диаметром 1,0-2,0 см, который самопроизвольно излечивается в течение последующих 12-15 дней. Иммуногенность. При двукратном внутримышечном введении штамма-0037 КазНИВИ в дозе 30 х 106 микроконидии, создается напряженный иммунитет у кроликов к последующему заражению трихофитией, продолжительностью не менее 24 мес. Реверсабельность и реактогенность. Штамм гриба-0037 КазНИВИ отличается от эпизоотических штаммов слабой вирулентностью, высокой спорогенностью и активностью при внутримышечном введении животным. 22265 Стабильность штамма при пассировании. Основные биологические свойства штамма гриба-0037 КазНИВИ стабильно сохраняются на протяжении 5 лет в лиофильно высушенном состоянии (защитная среда обезжиренное молоко) и свыше 6 мес при хранении в нативном состоянии (засеянных на пробирки с сусло-агаром) при температуре 2-8 С. После растворения из лиофилизированного состояния физиологическим 0,85 раствором хлористого натрия при рН 7,4 гриб-0037 КазНИВИ сохраняет биологическую активность при температуре 26-28 С в течение 6 часов, а при 4 С - 3 сут. Маркерные признаки штамма-0037 КазНИВИ. Физиологические - хемогетеротроф. Биохимические - из углеводов постоянно и хорошо усваивает сахарозу. Серологические - в реакциях РСК и РНГА титры антител составляет от 140 - 11280. Патогенные свойства. Штамма-0037 КазНИВИ патогенен для диких, домашних и лабораторных животных. Легко инокулируется при втирании культур и патологического материала в кожу, вызывая через 45 дней воспалительный процесс с экссудацией,различной толщины корками,сдираемыми животными при сильном зуде очагов поражений. Втирание по патогенности слабых штаммов сопровождается более легкими, скоропреходящими поражениями, с незначительным шелушением и покраснением на месте втирания. Пример 1. Для получения вакцины против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов берут 18 сут культуру штамма-0037 КазНИВИи выращивают в матровых колбах на сусло-агаре при рН 7,2-7,4, при температуре 26-28 С в течение 21 дня. Выращенную грибницу культуры в условиях асептики снимают с поверхности питательной среды стеклянными грибными скребками и помещают в стерильные банки. На собранный вакцинный штамм добавляем по 300,0 см 3 стерильный физиологический раствор. Грибную массу штамма гомогенизируют в миксерах,затем с помощью стерильного физиологического раствора, полученные грибные гомогенаты штамма инактивируют 3-ным формалином. Затем дополнительно подвергают разрушению ультразвуком на УЗДН-1 частотой волн 22 кГц,интенсивностью 100 Вт/см 2 в течение 30 мин - 1 часа. После разрушения гомогенная масса помещается в холодильник при температуре 4-8 С в течение 1 сут. Затем берется проба для микроскопического анализа на наличие не разрушенных спор с последующим посевом на питательные среды. После этого берутся 3 пробы для бактериологического и микологического контроля в дозе 1,0 см 3. Фильтруем в стерильных условиях и с помощью фотоэлектроколориметром определяют концентрацию полученного белка в 1,0 см 3 полученной суспензии. После к грибной суспензии антигена на солевом растворедобавляют гель гидрата окиси алюминия (8-12) по сухому веществу. Посуточную смесь ставят в термостат до 1 сутки и время от времени перемешивают 3-5 раз. После этого к вакцине добавляют глицерин (98 химически чистый) из расчета 8-12 от объема суспензии. Все тщательно перемешивают, разливают по 2,0 см 3 в стерильные ампулы объемом 2,0-5,0 см 3, запаивают в стерильных условиях с помощью газовой горелки, и этикетируют. Пример 2. Инактивированную вакцину против трихофитии плотоядных животных используют внутримышечно двукратно с интервалом 14 дней при следующих соотношениях компонентов, мас. антиген из штамма-0037 КазНИВИ(2,0 мг белка в 1,0 см 3 вакцины) 10,0 гель гидрата окиси алюминия(98 химически чистый) 8,0 формалин 8,0 физиологический раствор остальное. Пример 3. Инактивированную вакцину против трихофитии плотоядных животных используют так же, как в примере 2 при следующих соотношениях компонентов, мас. антиген из штамма-0037 КазНИВИ(2,0 мг белка в 1,0 см 3 вакцины) 12,0 гель гидрата окиси алюминия(98 химически чистый) 10,0 формалин 10,0 физиологический раствор остальное. Пример 4. Инактивированную вакцину против трихофитии плотоядных животных используют так же, как в примере 2 при следующих соотношениях компонентов, мас. антиген из штамма-0037 КазНИВИ(2,0 мг белка в 1,0 см 3 вакцины) 15,0 антиген из штамма гель гидрата окиси алюминия(98 химически чистый) формалин 12,0 физиологический раствор остальное. Готовая инактивированная вакцина против трихофитии плотоядных животных представляет собой жидкость коричневато-желтоватого цвета. Инактивированная вакцина сохраняет свои биологические свойства при условии хранения в закрытых сухих, темных помещениях при температуре 2-10 С. Срок годности моновакцины 12 месяцев со дня окончании разлива вакцины. Пример 5. Для изучения иммуногенной активности инактивированной вакцины против трихофитии плотоядных животных берут трех групп животных, в каждой из которых находятся по три вида (по пять голов) животных (собаки, кошки и кролики). Каждому животному опытной группы вводят внутримышечно по 2,0 см 3 3 22265 ресуспензированной инактивированной вакцины в область крупа дважды с начало левой, а потом справой стороны бедренным группам мышц с интервалом 14 дней. Спустя 25-28 дней после второй иммунизации, все 15 голов животных трех опытной группы, а также по 5 голов из трех контрольных групп(не иммунизированных животных) экспериментально заражают вирулентной гомологичной эпизоотической культурой рода . В течение 30-35 дней за опытными и контрольными группами животных ведут наблюдение, а клинический осмотр животных осуществляют через каждые 3-5 дней. От животных с клиникой трихофитии отбирают патологический материал, и проводят высевы на питательные среды и уточняют визуально полученный диагноз заболевания данных животных трихофитией. При обнаружении у животных трихофитии, а также подтверждения диагноза, животных подвергают двух или трехкратному введению терапевтической дозы жидкой инактивированной вакцины в тех же интервалах, что и профилактические дозы данного биологического препарата. Результаты проведенной работы учитываются спустя 25-30 дней после второй иммунизации заболевших животных терапевтической дозой инактивированной вакциной против трихофитии плотоядных животных. Результаты иммуногенной активности(профилактической и терапевтической дозы) инактивированной вакцины против трихофитии плотоядных животных отражены в таблицах 1 и 2. Из таблиц 1 и 2 видно, что инактивированная вакцина против трихофитии плотоядных животных при ее проверке на иммуногенную активность проявила высокую профилактическую и терапевтическую эффективность, в том числе и при лечении заболевших животных с явной клинической формой трихофитии. Использование предлагаемой инактивированной вакцины в ветеринарной практике позволит повысить эффективность мероприятий по профилактике и терапии от возбудителей трихофитии плотоядных животных в Республике Казахстан. Таблица 1 Профилактическая эффективность инактивированной вакцины против трихофитии плотоядных животных. Результаты опытов (количество заболевших животных при экспери ментальном заражении вирулентными гомологичными эпизоотическими культурами гриба рода ) Не Заболело заболело Диагноз Диагноз не подтвердился подтвердился Опытные группы (дважды иммунизированные животные) Собаки 5 5 Кошки 5 5 Кролики 5 5 Контрольные группы Таблица 2 Проверка терапевтической эффективности инактивированной вакцины против трихофитии плотоядных животных. Вид животных и их возраст Собаки Кошки Кролики ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Инактивированная вакцина против трихофитии плотоядных животных, включающая антиген штамма гриба, его ресуспензирование солевым раствором натрия 4 Результаты исследования выздоровело не выздоровело 5 0 5 0 5 0 хлорида с добавлением геля гидрата окиси алюминия и дистиллированной воды,отличающаяся тем, что она в качестве антигена содержит штамм гриба 22265 содержит глицерин и формалин при следующих соотношениях компонентов, мас. антиген из штамма-0037 КазНИВИ(2,0 мг белка в 1,0 см 3 вакцины) 10,0-15,0 гель гидрата окиси алюминия