Способ оценки состояния микроциркуляции у больных артериальной гипертонией

(51) 01 33/49 (2006.01) 01 33/577 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ состояния микроциркуляции при артериальной гипертонии. С целью оценки состояния микроциркуляции в крови больных артериальной гипертонией методом иммуноферментного анализа определяют уровень молекул межклеточной адгезии и при уровне молекулы адгезии эндотелия сосудовменее 1000 нг/мл, межклеточной молекулы адгезии менее 380 нг/мл, Е-селектина менее 51 нг/мл диагностируют компенсаторные нарушения микроциркуляции. При уровнеот 1000 до 1500 нг/мл,от 380 до 420 нг/мл и Еселектина от 51 до 75 нг/мл диагностируют субкомпенсаторные нарушения микроциркуляции. При уровнесвыше 1500 нг/мл,свыше 420 нг/мл, Е-селектина свыше 75 нг/мл диагностируют декомпенсаторные нарушения микроциркуляции. Этот способ позволяет своевременно выявлять группы больных повышенного риска сердечно-сосудистых осложнений с целью проведения дифференцированной терапии.(72) Джусипов Алихан Казахпаевич Рустамова Фарида Ерашимовна Джунусбекова Гульнара Алдешовна Тундыбаева Мейрамгуль Капсиметовна(73) Республиканское государственное казенное предприятие Научно-исследовательский институт кардиологии и внутренних болезней Министерства здравоохранения Республики Казахстан(56) Поливода С.Н., Черепок А.А., Эндотелийопосредованные механизмы структурнофункциональной перестройки микроциркуляторного русла у пациентов с гипертонической болезнью // Украинский кардиологический журнал, 2002,6,с.20-23(54) СПОСОБ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ МИКРОЦИРКУЛЯЦИИ У БОЛЬНЫХ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТОНИЕЙ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии и может быть использовано для оценки 21605 Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии и может быть использовано для оценки состояния микроциркуляции при артериальной гипертонии. Известен способ оценки состояния микроциркуляции, заключающийся в проведении биомикроскопического исследования бульбарной коньюктивы с оценкой состояния структурных единиц микроциркуляторного русла и дополнительным измерением параметров каждой из этих единиц. Рассчитывают значение парциального сосудистого коэффициента , сосудистого коэффициента ,периваскулярного коэффициента , парциального внутрисосудистого коэффициентаи общего коньюктивального коэффициента Кт. При значении любого из коэффициентов,равном нулю,диагностируют максимально возможное нарушение состояния соответствующей структурной единицы микроциркуляторного русла. При значениине более 6,0,не более 4,0,не более 3,0,не более 9,0, Кт не более 22,0 диагностируют различную степень выраженности упомянутого нарушения.(Патент 2275846, кл. А 61 В 5/02, опубл. 10.05.2006 бюл.13). Однако данный способ имеет следующие недостатки необходимость специального оборудования, сложность расчетов сосудистых коэффициентов, длительность обследования пациента,недостаточная точность и информативность метода бульбарной биомикроскопии. В качестве прототипа выбран способ оценки микроциркуляторного русла у пациентов с гипертонической болезнью(термины микроциркуляция и микроциркуляторное русло, а также артериальная гипертония и гипертоническая болезнь являются синонимами), заключающийся в определении в крови пациентов уровня конечных метаболитов оксида азота - нитритов. Достоверное снижение уровня нитритов в крови больных расценивают как нарушение артериального звена микроциркуляторного русла (Поливода С.Н., Черепок А.А. Эндотелийопосредованные механизмы структурно-функциональной перестройки микроциркуляторного русла у пациентов с гипертонической болезнью / Украинский кардиологический журнал,2002.6, . 20-23.) Недостатком прототипа является сложность,низкая точность и воспроизводимость результатов исследования, т.к. на уровень нитритов в крови как конечных метаболитов оксида азота, могут влиять курение пациента, загазованность атмосферного воздуха, употребление продуктов с повышенным содержанием нитратов и т.д. Задача изобретения - разработка способа оценки состояния микроциркуляции у больных артериальной гипертонией, повышающего точность диагностики и ускорение выявления изменений микроциркуляторного русла у больных артериальной гипертоний, с целью своевременного выявления группы пациентов с повышенным риском развития сердечно-сосудистых осложнений, нуждающихся в проведении лечебнопрофилактических мероприятий. 2 Технический результат заявляемого способа состоит в обеспечении высокой точности и быстроты постановки диагноза. Кроме того, предлагаемый способ несложен и может служить методом экспрессдиагностики. Сущность предложенного способа состояния микроциркуляции у больных артериальной гипертонией состоит в исследовании крови, согласно изобретению проводят определение уровня экспрессии растворимых форм молекул межклеточной адгезии и при уровне растворимой молекулы адгезии эндотелия сосудовменее 1000 нг/мл, растворимой межклеточной молекулы адгезиименее 380 нг/мл, растворимого Е-селектина менее 51 нг/мл диагностируют компенсаторные нарушения микроциркуляции. При уровне растворимой молекулы адгезии эндотелия сосудовот 1000 до 1500 нг/мл, растворимой межклеточной молекулы адгезииот 380 до 420 нг/мл и растворимого Еселектина от 51 до 75 нг/мл диагностируют субкомпенсаторные нарушения микроциркуляции. При уровне растворимой молекулы адгезии эндотелия сосудовсвыше 1500 нг/мл, растворимой межклеточной молекулы адгезиисвыше 420 нг/мл, растворимого Е-селектина свыше 75 нг/ мл диагностируют декомпенсаторные нарушения микроциркуляции. В предложенном нами изобретении с целью оценки состояния микроциркуляции у больных артериальной гипертонией используют определение в крови уровня экспрессии растворимых форм молекул межклеточной адгезии как самостоятельных диагностических критериев поражения сосудистой стенки, прежде всего ее пускового механизма эндотелиальной дисфункции. Эндотелий участвует как в физиологической регуляции сосудистого тонуса, так и в структурной трансформации сосудов при патологических условиях. Молекулы адгезии обеспечивают взаимодействие клеток крови с эндотелиальными клетками, создавая первичную защиту эндотелия от повреждения, опосредуя прочное прилипание циркулирующих лейкоцитов к эндотелию. Находясь на поверхности клетки, они вовлекаются в межклеточные взаимодействия, обеспечивая один из способов регуляции повреждающего процесса. При артериальной гипертонии начальное повреждение эндотелия обуславливается гемодинамической нагрузкой и хроническим повреждением факторами риска атеросклероза. В последующем гипертония способствует увеличению проницаемости эндотелия и накоплению липопротеидов в интиме. Нарушенная проницаемость эндотелиального слоя ведет к увеличенному притоку воспалительных и ростовых субстанций из циркуляции в сосудистую стенку. Соответственно этому, увеличение концентрации циркулирующих молекул межклеточной адгезии может являться индикатором сосудистого поражения,а вещества, способные блокировать клеточную адгезию и миграцию моноцитов в артериальную стенку,имеют терапевтическое значение. Структурная перестройка резистивных сосудов является одним из важнейших, инициирующих 21605 механизмов,обеспечивающих стабилизацию повышенного артериального давления. Способ определения в крови уровня экспрессии растворимых форм молекул межклеточной адгезии позволяет усовершенствовать оценку состояния микроциркуляции,создает новые критерии диагностики и прогнозирования поражения сосудов при артериальной гипертонии, позволяет оценить вклад необходимостиопределения в крови уровня экспрессии растворимых форм молекул межклеточной адгезии. Способ осуществляют следующим образом. Для исследования производят забор венозной крови из локтевой вены в количестве 5 мл натощак. Свежая сыворотка крови является рекомендованным образцом для определения растворимых форм молекул межклеточной адгезии. Количественное определение растворимой молекулы адгезии эндотелия сосудов,растворимого Е-селектина проводят иммуноферментным методом с использованием коммерческих наборов фирмы . . Применение их основано на методе твердофазного,неконкурентного энзим-связанного иммуносорбентного анализа ( - ),принцип которого заключается в качественном и количественном определении изучаемого антигена путем его послойного связывания со специфичными к нему антителами. Моноклональные антитела,специфичные к исследуемому антигену,фиксированы на поверхности лунок 96-луночной планшетки. При добавлении к ним изучаемых образцов или стандартов исследуемый антиген связывается иммобилизованными антителами. После удаления методом отмывания не связавшихся протеинов, в лунки добавляют поликлональные антитела,связанные с энзимом. Они наслаиваются на иммобилизованный в ходе первой инкубации антиген по принципу сэндвича. После этого их излишек отмывают и в лунки добавляют раствор хромогенного субстрата, который, прореагировав с энзимом, дает характерное окрашивание. По интенсивности последнего оценивают содержание в пробе исследуемого антигена. По содержанию в крови растворимой молекулы адгезии эндотелия сосудов , растворимой межклеточной молекулы адгезиии растворимого Еселектина оценивают состояние микроциркуляции при артериальной гипертонии. При уровне молекулы адгезии эндотелия сосудовменее 1000 нг/мл, межклеточной молекулы адгезиименее 380 нг/мл, Е-селектина менее 51 нг/мл диагностируют компенсаторные нарушения микроциркуляции. При уровнеот 1000 до 1500 нг/мл,от 380 до 420 нг/мл и растворимого Е-селектина от 51 до 75 нг/мл диагностируют субкомпенсаторные нарушения микроциркуляции. При уровнесвыше 1500 нг/мл,свыше 420 нг/мл, растворимого Еселектина свыше 75 нг/ мл диагностируют декомпенсаторные нарушения микроциркуляции. Способ обладает высокой точностью и воспроизводимостью, т.к. уровень в крови растворимых форм адгезии отражает реальный уровень изменений микроциркуляторного русла и не зависит от внешних причин (курения, состава атмосферного воздуха, характера питания и т.д.) Предлагаемый способ оценки состояния микроциркуляции прошел клинические испытании при обследовании 15 практически здоровых добровольцев (1 группа) и 71 нелеченных больных АГ - степени, среднего и высокого риска (по классификации ВОЗ/МОАГ, 1999 г.). В качестве маркера микроангиопатии проводилось исследование мочи на наличие микроальбуминурии(МАУ) тест-полосками Микраль-тест . Оценивалась утренняя порция мочи трижды на протяжении 2 недель, тест на МАУ считался положительным при наличии альбумина в двух порциях. По результатам оценки экскреции альбумина с мочой больные АГ были разделены на 3 группы. Первую группу составили 37 пациентов с нормоальбуминурией (НАУ), вторую- 15 больных АГ с МАУ и третью - 11 человек с макроальбуминурией. В качестве стандартных маркеров дисфункции эндотелия оценивалось состояние эндотелийзависимой вазодилатации(ЭЗВД) по методу Д.и величина напряжения сдвига на эндотелии в процессе проведения пробы с реактивной гиперемией (РГ). Изменение диаметра плечевой артерии на фоне РГ(Дрг) оценивали в процентном отношении к исходной величине. Определяли величину напряжения сдвига на эндотелии на фоне РГ (рг). Статистическая обработка полученных результатов производилась с использованием программы 6.0. Данные представлены в виде Мт. Достоверными считали различия при р 0,05. Результаты исследования представлены в табл. 1. В целом у больных АГ по группе в сравнении с контролем отмечены различия в показателях систолического(САД) и диастолического артериального давления (ДАД), растворимых форм молекул адгезии и Е-селектина. 21605 Таблица Клиническая характеристика и уровень маркеров дисфункции эндотелия у обследованных лиц Показатель Больные АГ В целом по Контрол. трем группам группа (14) 1 группа 2 группа 3 группа-1, нг/мл 362,5930,46 407,35116,82 545,8213,0 410,61130,02 254,2667,93-1,нг/мл 913,97204,02 1244,33259,07 2785,71103,29 1159,94720,14 689,93125,72 Е-селектин, нг/мл 43,427,98 67,658,07 78,4434,23 57,422,46 24,538,07 Дрг 12,632,11 10,321,76 6,821,45 8,321,23 15,711,44 рг, дин/см 2 38,451,63 31,890,96 24,020,72 28,701,35 43,672,85 Примечание- различия значимы (р 0,05) при сравнении больных АГ в целом по трем группам с контролем- различия значимы при сравнении первой группы со второй- при сравнении второй группы с третьей,- при сравнении первой группы с третьей. Кром того, подтверждено наличие у пациентов с АГ дисфункции эндотелия в виде снижения эндотелийзависимой вазодилатации и величины напряжения сдвига на эндотелии на фоне РГ. При анализе изучаемых показателей в группах с различной выраженностью нефроангипатии установлено различие всех групп по уровню САД и по величине ДАД третьей группы в сравнении с первой и второй. Анализ содержания в сыворотке растворимых форм молекул адгезии показал различие между вышеуказанными группами по уровню -1 и третьей группы в сравнении с первой и второй по величине -1. Циркулирующий Е-селектин значимо повышался у больных АГ на этапе протеинурии (отмечены различия по уровню Еселектина третьей группы в сравнении с первой и второй). Достоверное снижение прироста плечевой артерии на фоне РГ также выявлено только у пациентов с макроальбуминурией, в отличие от показателя гемодинамической нагрузки на эндотелий - сдвигового стресса ( ) величины напряжения сдвига, снижение которого зафиксировано уже на этапе микроальбуминурии с последующим различием и группе с протеинурией. Таким образом, показано, что снижение функции почек усиливает поражение микроциркуляторного русла. Проведенный корреляционный анализ в целом по группе больных АГ продемонстрировал связь молекул межклеточной и сосудистой адгезии с наличием МАУ (соответственно 25,6, р 0,02,26,28 р 0,03), уровня -1 с САД (0,66,р 0,01) и приростом плечевой артерии на РГ(0,41,0,002),-1 с величиной напряжения сдвига (0,34, р 0,004), Е-селектина с ДАД (0,80,р 0,05) и рг (0,38, р 0,02). Также отмечены значимые связи растворимых молекул адгезии с выраженностью факторов риска артериальной гипертонии-1 с выраженностью абдоминального ожирения (ОТ/ОБ) (0,84, р 0,002) 4 и общим холестерином (0,58, 0,001), -1 с курением ( 26,3, р 0,001). Проведен дисперсионный анализ с целью оценки возможности влияния уровня растворимых молекул адгезии на степень выраженности нарушения микроциркуляции, в частности между группой 1 без признаков нарушения микроциркуляции и группой 2 с начальными нарушениями микроциркуляции-1893,27, 2 группы (2) 3424,60. Среднегрупповая дисперсия 1442,63, 0,73. Т.к.находится в пределах от 0,7 до 1,0, то значит доказано сильное влияние признака (уровня 1) на выраженность нарушения микроциркуляции. Дисперсия (1) 1 группы по содержанию-1) сказывается на выраженности нарушения микроциркуляции. Дисперсия 1 группы по содержанию селектина(2)60,85. Среднегрупповая дисперсия 61,48,0,47, т.е. 0,3, следовательно, влияние признака (уровня селектина) сказывается на выраженности нарушения микроциркуляции. Приводим примеры. Пример 1. Пациент С, 1963 года рождения. Около пяти лет страдает артериальной гипертонией с максимальными цифрами АД 160/90 мм рт.ст. Из анамнеза отсутствуют указания на хронические заболевания почек. Вторичный характер гипертонии при комплексном обследовании исключен. Уровень-1 в крови составил 330 нг/мл (менее 380 нг/мл), -1 - 690 нг/мл (1000 нг/мл), селектина - 44 нг/мл (менее 51 нг/мл), что указывает на компенсаторные нарушения микроциркуляции у данного больного артериальной гипертонией. Пример 2. Пациентка Д., 1951 года рождения. Около пятнадцати лет страдает артериальной гипертонией с максимальными цифрами АД 200/120 мм рт.ст. Из анамнеза отсутствуют указания на хронические заболевания почек. Вторичный 21605 характер гипертонии при комплексном обследовании исключен. Уровень -1 в крови составил 410 нг/мл (в пределах от 380 до 420 нг/мл), -1 1250 нг/мл (от 1000 до 1500 нг/мл), -селектина - 61 нг/мл (от 51 до 75 нг/мл). Согласно данным лабораторно-инструментального обследования у данной больной имеются субкомпенсаторные нарушения сосудистой гемодинамики, что можно расценить как наличие клинических проявлений гипертонической ангиопатии, что указывает на субкомпенсаторные нарушения микроциркуляции у данной больной артериальной гипертонией. Таким образом, у больных с артериальной гипертонией развитие ангиопатии сопровождается повышением экспрессии растворимых форм молекул адгезии, что позволяет использовать их, как дополнительные диагностические маркеры состояния микроциркуляторного русла. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ оценки микроциркуляции у больных артериальной гипертонией путем исследования крови,отличающийся тем, что определяют уровень эксперессии растворимых форм молекул межклеточной адгезии и при уровне молекулы адгезии эндотелия сосудовменее 1000 нг/мл, межклеточной молекулы адгезиименее 380 нг/мл, Е-селектина менее 51 нг/мл диагностируют компенсаторные нарушения микроциркуляции, при уровнеот 1000 до 1500 нг/мл,от 380 до 420 нг/мл и растворимого Е-селектина от 51 до 75 нг/мл диагностируют субкомпенсаторные нарушения микроциркуляции при уровнесвыше 1500 нг/мл, свыше 420 нг/мл, растворимого Е-селектина свыше 75 нг/мл диагностируют декомпенсаторные нарушения микроциркуляции.