Инактивированная вакцина против трихофитии крупного рогатого скота

(51) 61 39/00 (2006.01) 12 1/14 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ безвредной и высокоэффективной инактивированной вакцины против трихофитии крупного рогатого скота. Инактивированная вакцина против трихофитии крупного рогатого скота, включающий антиген из штамма грибаи адъювант на физиологическом растворе, в качестве корпускулярного антигена используют штамм гриба-0271, а в качестве консерванта глицерин и формалин при следующих соотношениях компонентов, мас. антиген из штамма-0271(1,0 мг белка в 1,0 см 3 вакцины) 10,0-15,0 антиген из штамма гель гидрата окиси алюминия(72) Умитжанов Мынбай Боранбаева Райхан Султанмуратовна Бижанов Болат Рахметович Шалабаев Болат Абуович(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(54) ИНАКТИВИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ТРИХОФИТИИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА(57) Изобретение относится к области биотехнологии,микологии,микробиологии,иммунологии, а именно противомикологических вакцин и может быть использовано для активной профилактики и лечения трихофитии крупного рогатого скота. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении стабильной, 29588 Изобретение относится к области биотехнологии,микологии, микробиологии, иммунологии, а именно противомикологических вакцин и может быть использовано для активной профилактики и лечения трихофитии крупного рогатого скота. Известна ассоциированная инактивированная вакцина против трихофитии крупного рогатого скота, включающая антигены из штамма гриба,и адъювант на физиологическом растворе Патент Российской Федерации 2093178, кл А 61 039/116, 12 001/14, А 61 039/116, А 61 039/00, А 61 039/02,1997. Недостатком ассоциированной инактивированной вакцины против трихофитии крупного рогатого скота, является е низкая профилактическая и лечебная эффективность применяемого штамма гриба. Задачей изобретения является повышение иммуногенности вакцины и расширение диапазона эффективности специфической профилактики и лечения трихофитии крупного рогатого скота к видам гриба рода . Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении стабильной,безвредной и высокоэффективной инактивированной вакцины против трихофитии крупного рогатого скота. Инактивированная вакцина против трихофитии крупного рогатого скота включающий антиген из штамма грибаи адъювант на физиологическом растворе, в качестве корпускулярного антигена использует штамм гриба-0271, а в качестве консерванта глицерин и формалин при следующих соотношениях компонентов, мас. антиген из штамма-0271(1,0 мг белка в 1,0 см 3 вакцины) 10,0-15,0 гель гидрата окиси алюминия(98-ный химически чистый) 8,0-12,0 формалин 8,0-12,0 физиологический раствор остальное. Штамм гриба, используемый для изготовления инактивированной вакцины против трихофитии крупного рогатого скота, депонированы в лаборатории генофонда микроорганизмов ТОО КазНИВИ и обладают следующими свойствами. Штамм гриба-0271. Культуральные свойства. Культуры гриба медленно растущие. Колония (на средах с тиамином,инозитом растет лучше) возникает в виде врастающего в субстрат серовато-желтоватого кожистого бугорка на 10-13-ые сутки, через 1,5 месяца колония достигает диаметра 15-17 мм. По периферии колонии часто имеется мучнистость. Мицелий широкий,ровный,септированный(диаметром 3-3,5 мкм), часто ракетковидный,довольно скоро распадаются на цепочки артроспор 3-й неделе) хламидоспоры (диаметром 5-8 мкм). Иногда встречаются ветви, напоминающие рога оленя. Макро- и микроконидии возникают обычно на средах с добавлением дрожжевого экстракта. Микроконидии немногочисленные, овальные,грушевидные, палочковидные, дубинкообразные,тонкие, размерами от 3 до 5 мкм (чаще 1-3,5 2-7,5 мкм). Макроконидии немногочисленные или отсутствуют, неправильной формы, удлиненные,тупоконечные и встречаются совсем редко в виде коротких 3-5-клеточных веретен с тонкой гладкой стенкой, со слегка закругленными концами размером 3,7-7,525-45 мкм. Биохимические свойства. Штамм гриба-0271 КазНИВИ 16 испытывают потребности в витаминах, тиамине,инозитоле,аминокислоте,микроэлементах,дрожжевом экстракте для роста и спорообразования. Сероводород и индол не образуют. Антигенные свойства. На введения культуры штамма в организме телят, кроликов и морских свинок образуются специфические агглютинины в титрах 140-11280. Маркерные признаки. Биохимические - на суслоагаре при 7,2-7,4 до концентрации 300-330 млн/см 3. Микроконидии немногочисленные, овальные,грушевидные, палочковидные, дубинкообразные на средах с добавлением дрожжевого экстракта встречается размеры от 3 до 5 мкм (чаще 1-3,5 2-7,5 мкм). Макроконидии немногочисленные или отсутствуют, неправильной формы, удлиненные встречаются совсем редко в виде коротких 3-5 клеточных веретен с тонкой гладкой стенкой, со слегка закругленными концами размером 3,77,525-45 мкм. Физиологические хемогетеротроф. По отношению к кислороду аэроб. Не обладает метаболическими свойствами. Иммунохимические - в реакциях РСК и РНГА титры антител составляет от 140 до 11280 отличается от эпизоотических штаммов слабой вирулентностью, высокой спорогенностью и активностью при внутримышечном введении. Патогенные свойства. Штамм гриба-0271 КазНИВИ 16 патогенен для крупного рогатого скота (зооантропофил), человека и лабораторных животных. Иммуногенность. При двукратном внутримышечном введении штамма в дозе 20106 микроконидии создают напряженный иммунитет у привитых телят, кроликов и морских свинок к последующему заражению трихофитией с продолжительностью не менее 12 месяцев. Безвредность. Штамм гриба-0271 КазНИВИ 16 безвреден для телят, кроликов и морских свинок в дозе 20106 микроконидии при внутримышечном введении. Реактогенность. Штамм гриба-0271 КазНИВИ 16 слабореактогенен для телят при внутримышечном введении. У привитых животных спустя 2-3 недели на месте инъекции развивается специфически локализованный поверхностный очажок диаметром 1,5-2,0 см, который самопроизвольно излечивается в течение 2-х недель. Спорообразование. Максимальный уровень спорообразования на суслоагаре 300-330 млн/см . Реверсабельность и реактогенность. Штамм гриба-0271 КазНИВИ 16 отличается от эпизоотического изолята слабой вирулентностью, отсутствием заражения при контакте между животными, высокой активностью при внутримышечном введении животным. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма гриба-0271 КазНИВИ 16 стабильно сохраняются на протяжении 3-4 лет при условии редких пересевов (2-3 раза в год) не ослабляет патогенные свойства. Сохраняемость в лиофильно-высушенном состоянии в присутствии 10 сахарозы и 1,5 желатина или жидкого обезжиренного молока штамм гриба-0271 КазНИВИ 16 не снижает активности при температуре 2-10 С в течение 12 месяцев в нативном состоянии в течение 6 месяцев, в замороженном при минус 40 С в течение 6 месяцев,при 20 С ниже в течение 2 года. После растворения из лиофилизированного состояния физиологическим раствором хлорида натрия или дистиллированной водой с 7,2-7,4 гриб сохраняет биологическую активность при температуре 28 С в течение 5 час,при 4 С - 3 сут. Пример 1. Для получения инактивированной вакцины против трихофитии крупного рогатого скота берут 21 сут культуру штамма-0271, и выращивают в колбах Тартаковского на суслоагаре при 7,2-7,4 и температуре 28 С в течение 21 сутки. Выращенную грибницу каждой культуры в условиях асептики снимают с поверхности питательной среды стеклянными грибными скребками и помещают в стерильные банки. На каждый собранный вакцинный штамм добавляем по 300,0 см 3 стерильный физиологический раствор. Грибную массу каждого штамма гомогенизируют в миксерах,затем с помощью стерильного физиологического раствора, полученные грибные гомогенаты штамма инактивируют 3-ным формалином. Затем дополнительно подвергают разрушению ультразвуком на УЗДН-А частотой волн 22 кГц,интенсивностью 100 Вт/см 2 в течение30 мин 60 минут. После разрушения гомогенная масса помещается в холодильник при температуре 4-8 С в течение 1 сут. Затем берется проба для микроскопического анализа на наличие не разрушенных спор с последующим посевом на питательные среды. После этого берутся 3 пробы для бактериологического и микологического контроля в дозе 1,0 см 3. Далее полученную гомогенную массу центрифугируют при 6000 об/мин в течение 20 мин. С помощью фотоэлектроколориметра определяют концентрацию полученного белка в 1,0 см 3 полученной суспензии. После к грибной суспензии антигена на солевом растворедобавляют гель гидрата окиси алюминия(8-12) по сухому веществу. Посуточную смесь ставят в термостат до 1 сутки и время от времени перемешивают 3-5 раз. После этого к вакцине добавляют глицерин (98-ный химически чистый) из расчета 8-12 от объема гомогената. Все тщательно перемешивают,разливают по 10,0-200,0 см 3 в стерильные флаконы объемом 10,0-200,0 см 3, закрывают резиновыми пробками, закатывают алюминиевыми колпачками,и этикетируют. Пример 2. Инактивированную вакцину против трихофитии крупного рогатого скота используют внутримышечно двукратно с интервалом 14 суток при следующих соотношениях компонентов антиген из штамма-0271(1,0 мг белка в 1,0 см 3 вакцины) 10,0 антиген из штамма гель гидрата окиси алюминия(98-ный химически чистый) 8,0 формалин 8,0 физиологический раствор остальное. Пример 3. Инактивированную вакцину против трихофитии крупного рогатого скота используют так же, как в примере 2 при следующих соотношениях компонентов антиген из штамма-0271(1,0 мг белка в 1,0 см 3 вакцины) 12,0 антиген из штамма гель гидрата окиси алюминия(98-ный химически чистый) 10,0 формалин 10,0 физиологический раствор остальное. Пример 4. Инактивированную вакцину против трихофитии крупного рогатого скота используют так же, как в примере 2 при следующих соотношениях компонентов антиген из штамма-0271(1,0 мг белка в 1,0 см 3 вакцины) 15,0 антиген из штамма гель гидрата окиси алюминия(98-ный химически чистый) 12,0 формалин 12,0 физиологический раствор остальное. Готовая инактивированная вакцина против трихофитии крупного рогатого скота представляет собой жидкость коричневато-желтоватого цвета. Вакцина сохраняет свои биологические свойства при условии хранения в закрытых сухих, темных помещениях при температуре 2-10 С. Срок годности вакцины 24 месяца со дня окончании разлива вакцины. 3 Пример 5. Для изучения иммуногенной активности инактивированной вакцины против трихофитии крупного рогатого скота будет изучены на кроликах. Опытную группу вводят внутримышечно по 1,0 см 3 ресуспензированной инактивированной вакцины в область крупа дважды, бедренным группам мышц с интервалом 14 суток. Спустя 25-28 суток после второй иммунизации, все 5 голов кроликов опытной группы, а также 3 голов из контрольной группы (не иммунизированных животных) экспериментально заражают вирулентной эпизоотической культурой из рода . В течение 30-35 суток за опытной и контрольной группой животных ведут наблюдение, а клинический осмотр животных осуществляют через каждые 3-5 дней. От животных с клиникой трихофитии отбирают патологический материал, при трихофитии высевы на питательные среды уточняют визуально полученный диагноз заболевания данных животных трихофитией. При обнаружении у животных трихофитии, а также подтверждения диагноза, животных подвергают двух или трехкратному введению терапевтической дозы инактивированной вакцины в тех же интервалах, что и профилактические дозы данного биологического препарата. Результаты проведенной работы учитываются спустя 25-30 суток после второй иммунизации. Заболевших животных прививают терапевтической дозой инактивированной вакциной против трихофитии крупного рогатого скота. Результаты иммуногенной активности (профилактической и терапевтической дозы) инактивированной вакцины против трихофитии крупного рогатого скота отражены в таблицах 1 и 2. Из таблиц 1 и 2 видно, что инактивированная вакцина против трихофитии крупного рогатого скота при ее проверке на иммуногенную активность проявила высокую профилактическую и терапевтическую эффективность, в том числе и при лечении заболевших животных с явной клинической формой трихофитии. Использование предлагаемой вакцины в ветеринарной практике позволит повысить эффективность мероприятий по профилактике и терапии крупного рогатого скота от дерматофита трихофитии крупного рогатого скота в Республике Казахстан. Таблица 1 Профилактическая эффективность инактивированной вакцины против трихофитии крупного рогатого скотап/п Результаты опытов (количество заболевших животных при экспериментальном заражении вирулентной эпизоотической культурой гриба родаНе заболело Заболело Диагноз подтвердился Диагноз не подтвердился Опытные группы (дважды иммунизированные животные) Кролики 5 5 Контрольные группы (не иммунизированные животные) Кролики 5 5 5 Таблица 2 Проверка терапевтической эффективности инактивированной вакцины против трихофитии крупного рогатого скотап/п Инактивированная вакцина против трихофитии крупного рогатого скота, включающий антиген из штамма грибаи адъювант на физиологическом растворе, отличающаяся тем,что в качестве корпускулярного антигена используют штамм гриба-0271, а в качестве консерванта глицерин и формалин при следующих соотношениях компонентов, мас. антиген из штамма-0271(1,0 мг белка в 1,0 см 3 вакцины) антиген из штамма гель гидрата окиси алюминия Результаты исследования выздоровело не выздоровело 5 0