Способ диагностики аскаридозной инвазии

(51) 61 1/24 (2006.01) 01 33/48 (2006.01) 01 33/487 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ предполагаемом способе впервые демонстрируется возможность использования принципа самоорганизации ротовой жидкости для диагностики аскаридозной инвазии по характеру формирования и расположения кристаллов. Способ диагностики аскаридозной инвазии основан на исследовании кристаллограмм биологической жидкости,а в качестве биологической жидкости используют ротовую жидкость, больных аскаридозом. При отсутствии выраженной переходной зоны у большинства образцов, наличии у боковых осей кристаллов кончиков копьевидной формы,нетипичных дендритов и менее разветвленных, тонких кристаллов в центральной зоне, диагностируют аскаридозную инвазию. Применение кристаллографического метода исследования биологических жидкостей заключается в возможности дифференциальной диагностики различных патологических процессов,в том числе аскаридозной инвазии. Он технически прост и доступен любой лаборатории.(72) Култанов Берикбай Жукенович Есильбаева Баян Турдалиевна Кислицкая Валентина Николаевна Джангильдинова Светлана Александровна Татина Елена Степановна Едильбаева Танзира Токтархановна Турмухамбетова Анар Акылбековна Досмагамбетова Раушан Султановна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Карагандинский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Республики Казахстан(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АСКАРИДОЗНОЙ ИНВАЗИИ Изобретение относится к области медицины, а именно к клинической лабораторной диагностике и может применяться для диагностики аскаридозной инвазии. Существует способ лабораторной диагностики аскаридоза в биологической жидкости, методом полимеразной цепной реакции(ПЦР),предложенным К. Мюллисом, основанном на обнаружении в материале исследования фрагментов ДНК гельминтов. Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты 1) ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК,который требуется амплифицировать 2) два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента 3) термостабильная ДНК-полимераза 4) дезоксинуклеотидтрифосфаты (, , С, Т) 5) ионы 2, необходимые для работы полимеразы 6) буферный раствор. ПЦР проводят в амплификаторе - приборе,обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1 С. Чтобы избежать испарения реакционной смеси, в пробирку добавляют высококипящее масло,например,вазелиновое. Добавление специфических ферментов может увеличить выход ПЦР-реакции. Б.Глик, Дж.Пастернак Молекулярная биотехнология. Принцип и применение.- М. Мир,2002.-с.94-104. Недостатком данного метода является его трудоемкость, наличие дополнительного оснащения и оборудования, выполнения ряда условий, а также сложности при оценке полученных результатов, не позволяющих выявить степень тяжести инвазии. Задача изобретения создание простого, дешевого и информативного способа диагностики аскаридозной инвазии. В предлагаемом способе впервые демонстрируется возможность использования принципа самоорганизации ротовой жидкости для диагностики аскаридозной инвазии по характеру формирования и расположения кристаллов. Способ диагностики аскаридозной инвазии основан на исследовании кристаллограмм биологической жидкости,а в качестве биологической жидкости используют ротовую жидкость, больных аскаридозом. При отсутствии выраженной переходной зоны у большинства образцов, наличии у боковых осей кристаллов кончиков копьевидной формы,нетипичных дендритов и менее разветвленных, тонких кристаллов в центральной зоне, диагностируют аскаридозную инвазию. Способ осуществляется следующим образом. Для изучения особенностей твердой фазы биологической жидкости при паразитарной инвазии до и после лечения использовалась полученная при свободном вытекании слюна. Каплю ротовой жидкости объемом 0,1 мл автоматической микропипеткой наносили на поверхность обезжиренного предметного стекла, накрывали 2 чашкой Петри и высушивали при температуре 2325 С, относительной влажности 60-70 в строго горизонтальном положении. Продолжительность периода высыхания составляла 24 ч. Исследования структуры слюны выполняли с помощью оптического микроскопа Микимед-5 при 40-ка и 100-кратном увеличении. С помощью цифровой окулярной видеокамерыс разрешением матрицы 14 Мпикс изображение передавалось на экран монитора. Участки кристаллограмм записывались в виде графического файла с разрешением 96 в формате . Анализ кристаллограмм проводился в графическом редакторе. При описании кристаллограмм учитывались рекомендации А.Б. Денисова. Для оценки особенностей кристаллизации ротовой жидкости при аскаридозной инвазии были исследованы кристаллограммы 30 пациентов с аскаридозной инвазией в возрасте от 18 до 45 лет. Группой сравнения послужили 30 практически здоровых лиц в возрасте от 18 до 45 лет без заболеваний полости рта. Основным видом кристаллов слюны являются так называемые дендриты, или скелетные кристаллы, представленные основными ветвями скелета и отходящими от них ветвями второго и последующих порядков. В кристаллограмме слюны выделяют краевую, переходную и центральную зоны (фиг.1). При описании кристаллограмм учитывали наличие переходной зоны, длину кристаллов, наличие на них отростков 2-го и последующих порядков,форму окончания отростков, ширину основной оси кристаллов,наличие кристаллов нетипичной формы. Кристаллограммы ротовой жидкости в группе сравнения характеризовались наличием четко выраженных краевой,промежуточной и центральной зон. Центральная зона кристаллограммы занимала большую часть капли и была заполнена дендритами. В большинстве случаев дендриты занимали всю центральную зону капли, в 25 случаев в центральной части наблюдалось разреженное расположение дендритов (фиг.2). Длина дендритов центральной части кристаллограммы варьировала от 0,4 до 1,3 мм,ширина главной оси кристалла - от 0,01 до 0,06 мм. У 95 образцов наблюдалась четко выраженная переходная зона. У всех образцов дендриты имели типичное строение хорошо выраженные основные ветви и ветви второго порядка, у 80 образцов наблюдались ветви третьего порядка. Длина ветвей второго порядка составляла от 0,1 до 0,8 мм. В большинстве случаев окончания боковых ветвей кристаллов имели округлую форму. В большинстве кристаллограмм ротовой жидкости у больных аскаридозной инвазией отсутствовала четко выраженная переходная зона. В центральной зоне помимо обычных дендритов или при полном их отсутствии наблюдались кристаллы разнообразной формы. В 30 случаев в центральной зоне кристаллограмм наблюдались крупные крестообразные разветвленные кристаллы (фиг.3, а), 29570(фиг.3, б). Длина основных кристаллов слюны в группе с аскаридозом варьировала в широких пределах - от 0,2 до 2 мм, длина ветвей второго порядка - от 0,2 до 0,5 мм, ширина главной оси кристалла - от 0,01 до 0,08 мм. В 90 образцов у кристаллов слюны,характерных для лиц с аскаридозной инвазией, на отростках второго порядка наблюдались только микроотростки, то есть кристаллы были менее разветвленные, чем в группе сравнения. В 10 кристаллограмм ротовой жидкости у больных аскаридозной инвазией наблюдались коралловидные кристаллы (фиг.4), в части кристаллограмм наблюдалось сочетание крестообразных и коралловидных кристаллов, папоротникообразных и коралловидных кристаллов. Коралловидные кристаллы в большинстве случаев занимали центральную часть кристаллограммы и имели разную толщину главной оси - от 0,01 до 0,05 мм. В 90 кристаллограмм ротовой жидкости в изучаемой группе у кристаллов наблюдалась копьевидная форма окончания ветвей второго и последующих порядков (фиг.5). Характеристика средних показателей кристаллов ротовой жидкости у лиц группы сравнения и больных аскаридозом представлена в таблице 1. Таким образом, предложенный способ позволяет производить диагностику аскаридозной инвазии. Таблица 1 Характеристика кристаллов центральной части капли слюны у лиц группы сравнения и лиц с аскаридозной инвазией. Показатели Наличие нетипичных дендритов в центральной зоне кристалограммы Длина кристаллов центральной зоне, мм Длина отростков второго порядка,мм Наличие отростков третьего порядка на отростках второго порядка Ширина главной оси кристалла,мм Выраженность переходной зоны Форма кончиков отростков выражена у 95 образцов 65 - округлая 30-тупая 5 - копьевидная Примечание- достоверность по сравнению с контролем, р 0,05 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ диагностики аскаридозной инвазии,включающий исследование биологической жидкости, отличающийся тем, что исследуют кристаллограмму слюны пациента, и, при отсутствии выраженной переходной зоны у большинства образцов, кончиков боковых осей кристаллов копьевидной формы,наличии нетипичных дендритов в центральной зоне кристаллограммы,папоротникообразных,крестообразных, коралловидных кристаллов, в целом менее разветвленных и более тонких кристаллов центральной зоны, - диагностируют у него аскаридозную инвазию.