Способ прогнозирования воспалительных осложнений при микоплазменной инфекции у беременных.

(51) 01 33/68 (2009.01) 01 23/28 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ МИКОПЛАЗМЕННОЙ ИНФЕКЦИИ У БЕРЕМЕННЫХ(57) Изобретение относится к медицине, к акушерству, и может быть использовано для прогнозирования воспалительных осложнений при микоплазменной инфекции у беременных. В результате проведения молекулярно-генетического анализа крови у пациентки выявляется один из 3 генотипических вариантов генапо его полиморфизму 308. При наличии у женщины гомозиготного мутантного генотипа АА риск развития воспалительных процессов в организме увеличен в 6,7 раза, носительство генотипического вариантаувеличивает риск их возникновения в 2,6 раза.(72) Мамедалиева Нагима Мусралиевна Исенова Сауле Шакеновна Святова Гульнара Салаватовна(73) Республиканское государственное предприятие Научный Центр акушерства, гинекологии и перинатологии Министерства здравоохранения Республики Казахстан.(56) Дубенский В.В. Патогенетическое значение иммунологических нарушений в развитии осложненных урогенитальных инфекций и болезни Рейтера и их коррекция с помощью препаратов интерферона и цитокинов.// Автореф. дисс. д.м.н. М., 1999(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ ПРИ Изобретение относится к медицине,к акушерству, и может быть использовано для прогнозирования воспалительных осложнений при микоплазменной инфекции у беременных. Проблема инфекционных заболеваний женских половых органов и сегодня остается одной из самых актуальных и важных, как в медико-социальном, так и в научно-практическом аспектах. Обзор отечественной и зарубежной литературы свидетельствует о разноречивости данных клинической значимости микоплазменной инфекции в акушерстве. Одни авторы склонны трактовать микоплазмоз как нормоценоз, другие исследователи считают ее причиной невынашивания, внутриутробной гибели плода,пороков развития ЦНС плода. Следует отметить также и противоречивые мнения относительно информативности различных методов диагностики мико-уреаплазмоза (Сидельникова В.М., 2005 г.,Анкирская А.С., 1998 гг,К.С.,.,1997 г.). Известен способ прогнозирования осложнений беременности на основе изучения вариабельности ритма сердца (ВРС) матери (С.А. Клещеногов, А.Н. Флейшман. Прогнозирование осложнений беременности на основе изучения вариабельности ритма сердца матери.// Бюллетень СО РАМН.3(121), 2006.-с.52-59.). Оценка ВРС проводится методом спектрального компьютерного анализа с дальнейшей обработкой полученных параметров 1) статистические параметры (размах величины кардиоинтервала , стандартное отклонение временного ряда , квадратный корень из средней суммы квадратов разностей соседних кардиоинтервалов 2) частотный спектр(преобразование Фурье) 3) нелинейные параметры ВРС аппроксимированная энтропия АрЕ детрентный флуктуационный анализи др. При нарушении баланса системной регуляции от доминирующего в норме парасимпатического паттерна к системной регуляции от доминирующего в норме парасимпатического паттерна к преобладанию симпатико-адреналовых тонических влияний, создаются условия для генерализованных вазоконитрикторных реакций, особенно в области маточно-плацентарного кровообращения,что приводит к страданию плода. Недостатками данного метода являются 1) необходимость использования специального компьютерного оборудования с соответствующим программным обеспечением 2) возможность прогнозирования осложнений только текущей беременности. Наиболее близким по сущности является способ диагностики иммунологических нарушений по определению провосиалительных цитокинов интерферона-альфа, интерлейкина-1 (ИЛ-1) и 4(, кластер дифференцировки) в крови беременных. Повышение уровня интерферона и ИЛ-1 и уменьшение количества 4(, кластер дифференцировки) относительно физиологической нормы являются патогенетически значимыми изменениями иммунитета у больных с ЦМВ в ассоциации с 2 урогениталыюй инфекцией,которые можно использовать в качестве прогностических маркеров при первичном обследовании таких пациентов(Дубенский В.В. Патогенетическое значение иммунологических нарушений в развитии осложненных урогенитальных инфекций и болезни Рейтера и их коррекция с помощью препаратов интерферона и цитокинов.// Автореф. дисс. д.м.н. М., 1999.). Однако этот способ не эффективен при беременности и не дает достоверной информации в период подготовки к беременности. Задачей настоящего изобретения является разработка способа, позволяющего с высокой точностью осуществить прогноз развития воспалительных осложнений при микоплазменной инфекции до наступления беременности и на ранних сроках беременности. Поставленная задача достигается предлагаемым способом прогнозирования воспалительных осложнений путем анализа крови на носительство генов цитокинов(фактор некроза опухоли альфа) у беременных с микоплазменной инфекцией. При наличии у женщины гомозиготного мутантного генотипа АА риск развития провоспалительных процессов в организме увеличен в 6,7 раза,носительство генотипического вариантаувеличивает риск их возникновения в 2,6 раза. Предлагаемый нами способ позволяет прогнозировать воспалительные осложнения до наступления беременности и на ранних сроках беременности у пациенток с микоплазменной инфекцией. Для решения поставленной задачи были обследованы беременные с микоплазменной инфекцией - основная группа (94) и пациентки с физиологическим течением беременности без инфекции контрольная группа(100). Беременные исследуемых групп были однородными но следующим показателям возраст, социальное положение, паритет беременности и родов. Материалом молекулярно-генетического исследования являлась кровь. Использованы образцы ДНК беременных основной и контрольной групп. Для анализа полиморфизма 308 гена использован диагностический набор праймеров и рестриктаз (ООО Центр молекулярной генетики г. Москва, Россия, код набора - ). Амплификация ДНК в полимеразной цепной реакции (ПЦР) с применением специфичных олигонуклеотидных праймеров проведена на амплификаторс(США). Детекция результатов электрофореза проводилась с использованием Системы документации гелей(, США). В результате проведения молекулярногенетического анализа у обследуемой пациентки выявляется один из 3 генотипических вариантов генапо его полиморфизму 308. Результаты изучения полиморфизма 308 гена фактора некроза опухоли у беременных с микоплазменной инфекцией и контрольной группе здоровых беременных представлены в таблице 1. Таблица 1. Частота генотипов и аллелей генапо полиморфизму 308 (в) Генотипы Основная группа (94) Контрольная группа(100) Аллели 16 17,03,9 6 6,02,4 Аллель 90 47,93,6 124 62,03,4 Аллель 98 52,1 3,6 76 38,03,4 Примечание -- имеются достоверные отличия отданных контрольной группы (р 0,05). Частота нормального генотипав основной Полученные данные свидетельствуют о том, у группе составила 12,83,4 и является более низкой беременных в зависимости от носительства в сравнении с показателем контрольной группы мутантного аллеля А в гомозиготном и(30,04,6), различия статистически достоверны гетерозиготном состоянии можно еще до(28,5 р 0,004). наступления беременности провести коррекцию Частота гетерозиготного генотипав иммунных изменений для профилактики развития основной группе составила 70,24,7, что не имеет микоплазменной инфекции, так как другие маркеры достоверных отличий от данных контрольной появляются позже только во время беременности. группы (64,04,8) (20,85 р 0,4). Пример 1. Беременная А., 28 лет. Поступила с Получены достоверно высокие частоты диагнозом Беременность 19-20 недель, угроза гомозиготного по мутантному аллелю генотипа АА - прерывания беременности. Анемиястепени. 17,03,9 и мутантного аллеля А - 52,13,6 в Отягощенный акушерский анамнез два выкидыша. Из основной группе в отличие от данных группы самопроизвольных контроля (6,02,4, 38,03,4, 27,8 и 25,9 экстрагенитальной патологии - хронический пиелонефрит, из гинекологических заболеваний соответственно р 0,05). Частота нормального аллелясоставляет хронический аднексит. При ПЦР исследовании соскоба на урогенитальные 47,93,6 в основной группе и является достоверно цервикального выявлен микоплазмоз. При более низкой, чем в контрольной группе (62,03,4) инфекции ультразвуковом исследовании плацента по(27,8 р 0,05). Таким образом, частоты нормального генотипа передней стенке, отмечаются эхографические незрелости плаценты. Показателиив основной группе достоверно более низкие, признаки а частоты мутантного (патологического) генотипа гормонов в пределах нормы. В результате АА и аллеля А достоверно более высокие в проведения молекулярно-генетического анализа у основной группе беременных в отличие от группы обследуемой пациентки был выявлен генотип АА контроля (р 0,05). гена, что указывало на предрасположенность Данные по распределению генотипов к воспалительным осложнениям и позволило полиморфизма 308 генав основной и прогнозировать развитие плацентарной на фоне воспалительных контрольной группах подтверждаются значениями недостаточности коэффициента относительного рискаизменений вызванной микоплазменной инфекцией.(относительный риск), позволяющего определить Проведено комплексное лечение степень риска развития патологии с учетом микоплазменной инфекции препаратом джозамицин носительства различных генотипов и гаплотипов.(чувствительность микоплазмы 100). Значения коэффициентапри носительстве Контрольный анализ ПЦР без патологии. При генотипов АА и , частота которых была повторном обращении в сроке 34-35 недель была достоверно выше среди беременных основной диагностирована внутриутробная гипоксия плода группы. Выявлено, что при наличии у женщины легкой степени по данным кардиотограммы гомозиготного мутантного генотипа АА риск (показатель состояния плода (ПСП) - 1,1) развития провоспалительных процессов в организме Беременность закончилась своевременными родами,увеличен в 6,7 раза, носительство генотипического ребенок доношенный с массой тела 3100 г, ростом вариантаувеличивает риск их возникновения в 50 см, оценкой по шкале Апгар 7-8 баллов. Роды 2,6 раза. осложнились плотным прикреплением плаценты, по Полученные результаты свидетельствуют о поводу чего была проведена операция ручного наличии взаимосвязи носительства патологического отделения последа. При гистологическом мутантного аллеля А генас развитием исследовании плаценты признаки дистрофических изучаемой патологии. Носительство изменений во всех структурных элементах неблагоприятных генотипов АА игенаплаценты, патологическая незрелость ворсинчатого со снижением компенсаторно является статистически достоверным генетическим дерева фактором риска развития провоспалительных приспособительных реакций и воспалительной процессов в организме беременной,что инфильтрацией плаценты, что соответствует хронической плацентарной подтверждается значениями коэффициента картине недостаточности, субкомпенсированной формы. относительного риска . 3 Заключение по заявляемому способу Прогнозируемое развитие плацентарной недостаточности на фоне воспалительных изменений вызванной микоплазменной инфекцией на основании выявленного генотипа АА гена,подтвердилось. Пример 2. Беременная Ж., 30 лет. Повторно беременная, первородящая женщина. Беременность 25-26 недель. Угроза прерывания беременности. Отягощенный акушерский анамнез самопроизвольный выкидыш в 6 недель. Экстрагенитальную патологию, гинекологические заболевания отрицает. При УЗ исследовании плод соответствует сроку гестации,плацента расположена на задней стенке, 23 мм толщиной, 0 степени зрелости. Данных за плацентарную недостаточность нет. При ПЦР исследовании цервикального соскоба на урогенитальные инфекции выявлен миконлазмоз. Показатели гормонов в пределах нормы. В результате проведения молекулярно-генетического анализа у обследуемой пациентки был выявлен генотипгена,что указывало на низкую предрасположенность к воспалительным осложнениям и позволило прогнозировать физиологическое течение беременности. Проведено комплексное лечение микоплазменной инфекции препаратом джозамицин(чувствительность микоплазмы 100). Контрольный анализ ПЦР без патологии. В дальнейшем беременность протекала без осложнений, закончилась своевременными родами. Роды были без осложнений, физиологические,послеродовый период протекал без патологических отклонений. Родился доношенный ребенок с массой тела 3300 г, ростом 53 см, оценкой по шкале Апгар 89 баллов, период адаптации новорожденного протекал без осложнений. При морфологическом и гистологическом исследовании плаценты признаков воспалительных изменений не выявлено. Вышеизложенное подтверждает прогностическую ценность заявляемого метода. Таким образом, заявляемый способ является эффективным и обладает рядом преимуществ 1. Прогнозирование патологии возможно до беременности и на ранних сроках беременности. 2. Способ является высокочувствительным и специфичным, так как основывается на определении генотипа. 3. Клиническое применение способа позволит осуществлять адекватную патогенетическую терапию и предотвращать неблагоприятные исходы беременности. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ прогнозирования воспалительных осложнений при микоплазменной инфекции у беременных путем исследования анализа крови,отличающийся тем, что в крови иммуногенетическим методом определяют носительство генов цитокинов(фактор некроза опухоли альфа) у беременных с микоплазменной инфекцией,и при наличии у женщины гомозиготного мутантного генотипа АА или гетерозиготного А прогнозируют развитие воспалительных осложнений, а при генотипепрогнозируют физиологическое течение беременности.