Штамм – А/лошадь/узын-агаш/02/07(H3N8) вируса гриппа лошадей, используемый для приготовления диагностических препаратов

(51) 12 7/00 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ также для приготовления диагностических и вакцинных препаратов против гриппа. Задачей изобретения является получение штамма А/Лошадь/Узын-агаш/02/07, позволяющего его использовать для изучения особенностей первичной структуры генома, а также для приготовления диагностических и вакцинных препаратов против гриппа. Вирус репродуцируют системе куриного эмбриона при оптимальной (37 С) температуре до инфекционного титра 8,5 ЭИД 50/0,2 мл. Аллантоисная культура выделенного штамма А/Лошадь/Узын-агаш/02/07 имеет гемагглютинирующую активность (в пределах 1512/мл),допустимая длительность хранения при -20 С -2 года. Инфекционная активность БОЕ изолята А/Лошадь/Узын-агаш/02/07 методамина культуре клеток МДСК составляла 7,16 ЭИД 50/0,2. Штамм депонирован в коллекции микроорганизмов ДГП НИИПББ НЦБ МОН РК М-15-08/Д. Штамм А/Лошадь/Узын-агаш/02/07 также может быть использован для производства диагностических препаратов, предназначенных для определения циркулирующих вирусов гриппа в природных популяциях.(72) Икранбегийн Риза Баймаханова Байкен Бекарыстановна Глебова Татьяна Ивановна Шаменова Мира Галаутдиновна Сансызбай Аблай Рысбаевич(73) Дочернне государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Институт микробиологии и вирусологии Республиканского государственного предприятия на праве хозяйственного ведения Центр биологических исследований Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) ШТАММ А/ЛОШАДЬ/УЗЫНАГАШ/02/07(38) ВИРУСА ГРИППА ЛОШАДЕЙ,ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ(57) Изобретение относится к области вирусологии и может быть использовано для научных целей, а 22436 Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и может быть использовано для научных целей, а также для приготовления диагностических и вакцинных препаратов против гриппа лошадей. Известно что, в последние годы вирусы гриппа характеризуются нарастанием гетерогенной изменчивости, что приводит к появлению нового антигенного варианта. Так штамм вспышки гриппа лошадей 2007 года был близок к эталонному штамму////2008(38) А/Лошадь/УзынАгаш/02/07 выделенный на территории Казахстана,а разработка собственных диагностических и вакцинных средств на основе местных штаммов является актуальной приоритетной задачей для сельского хозяйства Казахстана. ( . , . ,,, . ,,,. .//ЕГО .14,3- 2008). Задачей изобретения является получение нового штамма А/Лошадь/Узын-агаш/02/07, позволяющего его использовать для изучения особенностей первичной структуры генома, а также для приготовления диагностических и вакцинных препаратов против гриппа. Получен штамм А/Лошадь/Узынагаш/02/07(Н 3 К 8), обладающий оригинальным антигенным составом. Хранится в коллекции микроорганизмов ДТП НИИПББ НЦБ МОН РК М-15-08/Д. Предлагаемый вариант А/Лошадь/Узынагаш/02/07(38) представляет собой вирус, РНК штамм вируса гриппа лошадей, относится ко второму типу (38), семейству ,двыделен из носоглоточного смыва племенных лошадей, в августе 2007 г. в УзынАгашском районе с симптомами гриппозной инфекции. Идентифицирован в РТГА с набором диагностических сывороток к вирусу гриппа А. Инфекционная активность изолята А/Лошадь/Узын-агаш/02/07 методамина культуре клеток МДСК составляет 8,5 ЭИД 50/0,2 мл. БОЕ изолята А/Лошадь/Узын-агаш/02/07 на культуре клеток МДСК составила 7,16 /мл. Вирус репродуцируют в системе куриного эмбриона при оптимальной (37 С) температуре до инфекционного титра 6,00 ЭИД 50/0,2 мл. Аллантоисная культура выделенного штамма А/Лошадь/Узын-Агаш/02/07 имеет гемагглютинирующую активность(в пределах 1512/мл). Допустимая длительность хранения при -20 С -2 года. Молекулярно-генетическая характеристика А/Лошадь/Узын-агаш/02/07 проведена в лаборатории Молекулярная генетика птичьего гриппа Университета Мэриленд,США. Идентификация выделенных изолятов проведена методом ПЦР анализа с использованием универсальных и специфических праймеров для 8 генов вируса гриппа А (фиг. 1). 2///191/2003(38). Антигенная структура. Результаты МИФА, РИД,РТГА и РПНА с использованием набора референссывороток к вирусам гриппа с подтипами гемагглютининов Н 1-Н 14 и нейраминидазы 1-10,представленные в (таблице 1), показывают, что изолят является вирусом гриппа А с гемагглютинином Н 3 и с сероподтипом нейраминидазы 8. Спектр гемагглютинации. Вирус гриппа активно агглютинирует эритроциты петуха. Терморезиситентность. В отличие от обычного лабораторного штамма исследуемый вирус отнесен к термостабильным, поскольку сохранял способность вызывать агглютинацию эритроцитов курицы после прогревания при 56 С в течение 360 мин частично элюировался с куриных эритроцитов через 30 мин инкубации при 37 С. Удельная активность нейраминидазы в расчете на 1 АЕ составляет 10,42. Выделение вируса гриппа было подтверждено электронно-микроскопическим методом, который показал наличие характерных вирусных частиц(фиг. 2). Лабораторный штамм вируса гриппа характеризуется размерами 80-120 нм,преимущественно округлыми формами. Они равномерно покрыты шипиками - пепломерами гликопротеидов. А изолят вируса А/Лошадь/УзынАгаш/02/07 характеризуется в первую очередь отсутствием четко видимых шипиков-пепломеров. Препарат содержит агрегаты флеоморфных частиц размерами от 20 до 200 нм. К выделенному изоляту А/Лошадь/Узын-Агаш/02/07(Н 38) получена иммунная кроличья сыворотка. Схема иммунизации. Иммунную сыворотку получали путем двукратной иммунизации кроликов вирусной суспензией 1. Первая иммунизация подкожно с полным адъювантом Фрейда 150 мкг белка 2. Вторая иммунизация подкожно и внутривенно по 150 мкг белка с трех недельным интервал 3. Титр иммунной сыворотки заявляемого штамма в РТГА с гомологичным антигеном составляет 1640. Таким образом, в аллантоисном изоляте предлагаемого штамма присутствуют вирусные частицы, сходные с эталонным штаммом вируса гриппа птиц, но отличающийся от них значительной хрупкостью, меньшей электронной плотностью,отсутствием видимых поверхностных шипов,чрезмерным агрегированием. Судя по антигенной формуле поверхностных антигенов, которые характерны для вирусов гриппа человека А/Лошадь/Узын-Агаш/02/07 низкопатогенный изолят вируса гриппа с сочетанием гемагглютинина Н 3 и нейраминидазы 8 впервые выделен на территории Казахстана в Узын-Агашском районе Алматинской области. 22436 Таблица 1 Серологическая характеристика штамма А/Лошадь/Узын-Агаш/02/07 (38) Вирус А/Лошадь/ Узын-Агаш/ 02/07 Антигенное свойство в РИД РТГА Серотип А Сероподтип Н 3 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм - А/лошадь/Узын-Агаш/02/07(Н 38) вируса гриппа лошадей, семейства Мух,рода , депонированный в коллекции микроорганизмов ДГП Научно-исследовательский институт Проблем биологической безопасности Научный Центр Биотехнологии МОН РК за номером М-15-08/Д, используемый для приготовления диагностических препаратов