Способ выявления предрасположенности к развитию инфаркта миокарда у мужчин

(51) 12 1/68 (2006.01) 01 33/48 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к медицине, в частности к кардиологии и может быть использовано для выявления лиц с генетически детермированным риском развития у мужчин в казахской популяции. Техническим результатом изобретения является повышение точности прогнозирования. Это достигается тем, что в заявляемом способе выявления предрасположенности к развитию инфаркта миокарда у мужчин путем определения в венозной крови полиморфизма гена рецептора тромбоцитов/а, согласно изобретению,исследуют кровь мужчин казахской национальности молодого возраста,в которой выявляют полиморфизм гена , и при выявлении генотипа НРА-3 а/а судят о предрасположенности к развитию инфаркта миокарда.(72) Мусагалиева Айсулу Толекаевна Байтасова Назия Багадурбековна(73) Республиканское государственное казенное предприятие Научно-исследовательский институт кардиологии и внутренних болезней Министерства здравоохранения Республики Казахстан(56) Демидова Д.В., Сироткина О.В., Кудинов С.В.,Шварц Е.И. Межгенное взаимодействие между генами рецептора тромбоцитов/а и серотонинового транспортера в формировании предрасположенности к инфаркту миокарда у мужчин в молодом возрасте Докл. РАН, 2002, 387, 6, с. 827-829.(54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К РАЗВИТИЮ ИНФАРКТА МИОКАРДА У МУЖЧИН 21936 Изобретение относится к медицине, в частности к кардиологии и может быть использовано для выявления лиц с генетически детермированным риском развития у мужчин в казахской популяции. Известен способ диагностики генетической предрасположенности к инфаркту миокарда у мужчин, включающий выявление генотипов геномного локуса, содержащего аллель гена, при котором у исследуемых пациентов проводят генотипирование полиморфизма 641 гена 2 и при выявлении генотипа геномного локуса 321,содержащего аллель гена хемокинового рецептора 2 с заменойна А в 190-й позиции кодирующей части, приводящей к заменена в позиции аминокислотной последовательности белка 2 641,диагностирую генетическую предрасположенность к инфаркту миокарда у мужчин.(Патент РФ 2182175, кл. 12 1/68, опубл. 10.05.2002 г.) Недостатком данного способа является недостаточная точность диагностики для отдельных популяций, в частности для казахской, что ограничивает возможности использования этого способа в клинической и профилактической медицине. Известен также способ выявления предрасположенности к инфаркту миокарда у мужчин путем выявления полиморфизма гена а в рецепторе тромбоцитов / .(Демидова Д.В., Сироткина О.В., Кудинов С.В.,Шварц Е.И. Межгенное взаимодействие между генами рецептора тромбоцитов /и серотонинового транспортера в формировании предрасположенности к инфаркту миокарда у мужчин в молодом возрасте // Докл. РАН. - 2002. 387,6. - с. 827 - 829). Недостатком данного способа является то, что этот комплекс мембранных гликопротеинов/тромбоцитов неравновесно сцеплен с развитием инфаркта миокарда как у европейцев, так и у казахов, поэтому в разных этнических группах с развитием инфаркта миокарда ассоциированы разные генотипы. Задачей изобретения является создание эффективного способа выявления предрасположенности к развитию инфаркта миокарда у мужчин казахской национальности молодого возраста, позволяющего на этапе медико генетического консультирования предупреждать риск возникновения данного заболевания и своевременно проводить профилактические мероприятия, что в свою очередь позволяет снизить вероятность возможных осложнений и летальных исходов на догоспитальном этапе. Техническим результатом изобретения является повышение точности прогнозирования. Это достигается тем, что в заявляемом способе выявления предрасположенности к развитию инфаркта миокарда у мужчин путем определения в венозной крови полиморфизма гена рецептора тромбоцитов/а, согласно изобретению,исследуют кровь мужчин казахской национальности 2 молодого возраста,в которой выявляют полиморфизм гена , и при выявлении генотипа НРА-3 а/а судят о предрасположенности к развитию инфаркта миокарда. Тромбоциты играют ключевую роль в первичном гемостазе. В соответствии с имеющимися представлениями тромбоциты циркулируют в крови в относительно неактивном состоянии и не взаимодействуют с инактивным эндотелием,выстилающим кровеносные сосуды. При повреждении стенки сосуда или дисфункции эндотелия происходит контакт тромбоцитов с экстрацеллюлярным матриксом и адгезивными молекулами, что запускает процесс активации и агрегации тромбоцитов. Независимо от пускового сигнала процесс агрегации заканчивается конформационными изменениями поверхностного гликопротеина/а, обеспечивая возможность связывания тромбоцита с фибриногеном. Комплекс/а состоит из двух субъединицгликопротеина а и гликопротеина ,нековалентно связанных между собой, которые кодируются разными генами, расположенными близко друг к другу на 17-ой хромосоме. Способ осуществляется следующим образом. У пациента осуществляют забор крови из локтевой вены в объеме 5-10 мл в стерильную пластиковую пробирку, содержащую 100 мкл 0.5 М ЭДТА рН 8.0 в качестве антикоагулянта. Собранную таким образом кровь замораживают и хранят при 20 С. ДНК выделяют из лейкоцитов крови стандартным фенол-хлороформным методом. Амплификацию проводят в 15 мкл реакционной смеси, содержащей 67 мМ - рН 8.8, 16.6 мМ(4)24, 0.1 тритон Х-100, 2.5 мМ 2, по 50 пмоль каждого праймера, 200 мкМ , 1 единицу активности (1 ед.)ДНК полимеразы и 1 мкг геномной ДНК. После рестрикции фрагменты ДНК подвергают электрофоретическому разделению в 6 ПААГ. Определяют полиморфизм гена рецептора тромбоцитов/а (НРА-3 а/). При выявлении у мужчины казахской национальности в возрасте до 45 лет генотипа НРА-3 а/а судят о предрасположенности к развитию инфаркта миокарда. Пример 1. Больной С. 42 г., казах, находился на стационарном лечении в НИИ кардиологии и внутренних болезней с диагнозом Ишемическая болезнь сердца. Стенокардия напряжения ФК 111. Постинфарктный кардиосклероз (2003) ХСН 1. При поступлении предъявлял жалобы на давящие, сжимающие боли в области сердца при небольших физических и психоэмоциональных нагрузках, иногда в покое, купирующиеся приемом нитроглицерина в течение 5 минут, одышку при ходьбе (50-100 м ), общую слабость. Из анамнеза в 2003 перенес острый трансмуральный переднеперегородочный инфаркт миокарда. С тех пор регулярно получает стационарное лечение в НИИ кардиологии и 21936 внутренних болезней. Последнее ухудшение в течение месяца. Поступил для подбора терапии Наследственность не отягощена, не курит. Проведено обследованиеэ-5,0 Нв -143 г/л ЦПК-0,85 Лейкоциты-5,8 э-5 с-42 п-1 л-16 м-5 СОЭ-4 мм/час. Б/х крови креатинин-113 глюкоза 5,1 ммоль/л мочевина 4,48 общий белок-71 г/л билирубин-15 АЛТ-11 МЕ, АСТ-12 МЕ ПТИ-83 натрий-142 калий-3,9. Гликемический профиль 4 5 6,7. Липидный спектр холестерин-5,9 ммоль/л альфа-холестерин-0,7 ммоль/л -липопротеиды-2,9 ммоль/л ТГ-2,0 ммоль/л, КА-4,9 ЕД. ЭКГ Ритм синусовый с ЧСС 64 уд в мин. Рубцовые изменения на переднее-перегородочной,верхушечной области. Признаки хронической аневризмы. ЭхоКГ А-3,7 см ЛП-3,05 см КДР-5,92 см КСР 4,31 см КДО-174,8 КСО-83,6 мл У 0-91,1 мл ФВ 52 Тмжп-0,75-0,86 см Тзслж-0,8-1,3 см Дельта С 27. Аорта уплотнена. Расширена полость левого желудочка. Клапаны интактны. Обширный гипокинез передне-перегородочной области. Сократительная функция левого желудочка снижена. Признаки хронической аневризмы левого желудочка. У больного было взято 5 мл венозной крови и выделено ДНК. Методом полимеразной цепной реакции с использованием олигонуклеотидных прай-меров определен полиморфизм гена рецептора тромбоцитов/а (НРА-3 а/). Был выявлен генотип НРА-3 а/а. Таким образом, у молодого мужчины с неотягощенной наследственностью, некурящего развился инфаркт миокарда. Одним из факторов предрасполагавшим к развитию инфаркта миокарда явился генотип НРА-3 а/а. В исследование включено 185 мужчин казахской национальности. 98 из них - больные ИБС с постинфарктным кардиосклерозом без сопутствующих заболеваний, не состоящие друг с другом в родстве. Средний возраст больных составил 51,60,86 лет. Группу здоровых лиц составили 87 мужчин казахской национальности без клинических проявлений ИБС, отрицательными данными нагрузочных проб, средний возраст которых 47,31,1 лет. Результаты анализа полиморфизма генапредставлены в таблице 1. Таблица 1 Частотное распределение генотипов и аллелей гена(НРА-3 а/в). Больные ИБС Генотипы НРА-3 а/а НРА-3 а/в НРА-3 в/в Всего Аллели НРА-3 а НРА-3 в Всего В результате проведенных исследований установлено, что генотип НРА-3 а/а наиболее распространен как, в группе больных, так и в группе здоровых лиц и составляет 53 и 45,соответственно. Генотип НРА-3 в/в в обеих группах встречается реже, чем НРА-3 а/а (у больных 16, у здоровых- 21). При сравнительном анализе частоты распространенности генотипов генав группе больных ИБС и здоровых лиц достоверно значимых различий не обнаружено (2 2,04, р 0,35) Анализ частотного распределения аллелей данного гена выявил,что наиболее распространенным аллелем в группе больных и здоровых лиц является аллель НРА-3 а (68, 60,соответственно). При сравнительном анализе частотного распределения аллелей между группами больных ИБС и здоровых лиц достоверно значимых различий не выявлено (22,4, р 0,12). Таким образом, нами не выявлено взаимосвязи НРА-3 а/в полиморфизма генас развитием ИБС в общей группе обследованных лиц. Учитывая, что ИБС - это заболевание мультифакторное, в развитие которого роль средовых факторов нарастает с возрастом, мы проанализировали частотное распределение генотипов и аллелей гена рецептора тромбоцитов 21936 Таблица 2 Частотное распределение генотипов и аллелей гена(НРА-3 а/в) у мужчин казахской национальности в возрасте до 45 лет Больные ИБС Генотипы А- 3 а/а НРА-3 а/в НРА-3 в/в Всего Аллели НРА-3 аА- 3 в Всего Анализ частотного распределения генотипов гена(А- 3 а/в) между группами больных ИБС и здоровых лиц казахской национальности в возрасте до 45 лет показал, что в группе здоровых лиц частота генотипа НРА- 3 в/в в 1,6 раза больше,чем в группе больных ИБС, данная зависимость достоверна (27,2, р 0,026). При анализе частоты аллелей гена(НРА 3 а/в) выявлено, что аллель НРА- 3 в в группе здоровых лиц встречается достоверно чаще, чем среди больных лиц (2 6,7, р 0,009). Полученные результаты позволяют говорить о наличии взаимосвязи между полиморфизмом гена(НРА- 3 а/в) и развитием ИБС у мужчин казахской национальности в возрасте до 45 лет. Таким образом, при анализе распространенности генотипов и аллелей данного гена в группе лиц до 45 лет выявлено, что генотип НРА-3 в/в и аллель НРА-3 в достоверно чаще встречаются в группе здоровых лиц, что позволяет говорить о протективной роли НРА- 3 в аллеля гена рецептора тромбоцитову мужчин казахской национальности в молодом возрасте. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ выявления предрасположенности к развитию инфаркта миокарда у мужчин путем определения в венозной крови полиморфизма гена рецептора тромбоцитов/а, отличающийся тем, что исследуют кровь мужчин казахской национальности молодого возраста, в которой выявляют полиморфизм гена , и при выявлении генотипа НРА-3 а/а судят о предрасположенности к развитию инфаркта миокарда.