Способ экстракции ДНК из бактерий для последующего секвенирования

(51) С 07 Н 21/04 (2006.01) С 12 15/00 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ стерильной деионизированной воды и помещали колонии штаммов бактерий бруцелл (54,565,10/2),вортексовали. Пробирки помещали в термомиксерпри 100 С на 10 мин. Затем в морозильник при -80 С на 10 мин. Проделывали эти процедуры 2 раза. Вортексовали, центрифугировали 3 мин при максимальной скорости (13200 об/мин) на центрифуге . Забирали супернатант (ДНК) в новую пробирку. Предложенный метод выделения хромосомной ДНК из бактерий,для последующего секвенирования - простой, быстрый и доступный для выполнения в лабораторных условиях. Предложенный метод экономически выгоден.(76) Даугалиева Аида Тлековна , Турсункулов Шахайдар Жорабекович(54) СПОСОБ ЭКСТРАКЦИИ ДНК ИЗ БАКТЕРИЙ ДЛЯ ПОСЛЕДУЮЩЕГО СЕКВЕНИРОВАНИЯ(57) Область применения изобретения в лабораторной диагностике заболеваний животных методом секвенирования, который требует ДНК высокой чистоты в сравнительно больших объемах. Сущность изобретения. Из чашки Петри брали 1-2 клеточные матричные колонии, диаметром 2-3 мм или культуру из пробирки. В пробиркуналивали 200 мкл 21935 Область применения изобретения в лабораторной диагностике заболеваний животных методом секвенирования, который требует ДНК высокой чистоты в сравнительно больших объемах. Уровень техники. В настоящее время существует способ экстракции ДНК из бактерий, в частности бруцелл(54,565,10/2) для последующего секвенирования,реагентами из китаТМ , согласно наставлению набора. Добавляли 100 мкл этого реактива в пробирку(на 2 мл) и помещали в нее колонию (брали из чашки Петри 1-2 клеточные матричные колонии, диаметром 2-3 мм или культуру из пробирки). Вортексовали 20 сек. Затем пробирки помещали в термомиксерпри 100 С на 10 мин. Оставляли на 3 мин для остывания, с последующим центрифугированием в центрифугев течение 2 мин при 12000 об/мин. Получали чистые образцы ДНК(супернатант) с соотношением А (260)/А (280) больше 1,8 где А (260) и А (280) - оптическая плотность раствора при длине волны 260 и 280 нм,соответственно. Спектрофотометрически установили концентрацию ДНК - 50 нг/мл. Супернатанта в количестве 50 мкл наливали в новую пробирку и делали разведение 1100 (5 мкл супернатанта в 495 стерильной деионизированной воде). Однако данный метод обладал существенным недостатком,так как требовал существенных материальных затрат, в связи с приобретением дорогостоящего набора. Сущность изобретения. Из чашки Петри брали 1-2 клеточные матричные колонии, диаметром 2-3 мм или культуру из пробирки. В пробиркуналивали 200 мкл стерильной деионизированной воды и помещали колонии штаммов бактерий бруцелл (54,565,10/2),вортексовали. Пробирки помещали в термомиксерпри 100 С на 10 мин. Затем в морозильник при -80 С на 10 мин. Проделывали эти процедуры 2 раза. Вортексовали, центрифугировали 3 мин при максимальной скорости (13200 об/мин) на центрифуге . Забирали супернатант (ДНК) в новую пробирку. Спектрофотометрически также была установлена концентрация ДНК - 50 нг/мл. Сведения,подтверждающие возможность осуществления изобретения. Из чашки Петри брали 1 - 2 клеточные матричные колонии, диаметром 2-3 мм или культуру из пробирки. В пробиркуналивали 200 мкл стерильной деионизированной воды и помещали колонии штаммов бактерий бруцелл (54,565,10/2), вортексовали. Пробирки помещали в термомиксерпри 100 С на 10 мин. Затем в морозильник при -80 С на 10 мин. Проделывали эти процедуры 2 раза. Вортексовали,центрифугировали 3 мин при максимальной скорости (13200 об/мин) на центрифуге . Забирали супернатант (ДНК) в новую пробирку. Предложенный метод выделения хромосомной ДНК из бруцелл - простой, быстрый и доступный для выполнения в лабораторных условиях. Концентрация в обоих случаях одинаковая, однако,последний метод экономически выгоднее по сравнению с первым. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ экстракции ДНК из бактерий для последующего секвенирования, отличается от известного химического способа выделения ДНК бактерий с помощью реагентов из китатем, что клетки бактерий разрушают физическим методом, а именно воздействием высоких и низких температур.