Способ диагностики гипертонической энцефалопатии

(51) 01 33/48 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ использовано для диагностики гипертонической энцефалопатии,как частого церебрального осложнения при артериальной гипертонии. Для диагностики гипертонической энцефалопатии у больных артериальной гипертонией определяют уровень белка 100 в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа, и при содержании белка 100 в сыворотке крови менее 67 нг/мл диагностируют гипертоническую энцефалопатию. Использование способа позволяет в короткие сроки с высокой специфичностью установить диагноз гипертоническая энцефалопатия,что дает возможность своевременно выявить группу больных высокого цереброваскулярного риска, нуждающуюся в проведении лечебно-профилактических мероприятий.(72) Тундыбаева Мейрамгуль Капсиметовна Джусипов Алихан Казахпаевич(73) Республиканское государственное казенное предприятие Научно-исследовательский институт кардиологии и внутренних болезней Министерства здравоохранения Республики Казахстан(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ ЭНЦЕФАЛОПАТИИ 21810 Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, кардиологии и неврологии, и может быть использовано для диагностики гипертонической энцефалопатии(ГЭ), частого церебрального осложнения при артериальной гипертонии (АГ). Известен способ диагностики энцефалопатии, в котором пациенту предъявляют психологические тесты. В качестве тестов используют фигуры С 9 и Е 8 из задания Включенные фигуры. При этом сначала предъявляют простую фигуру в течение 10 секунд, затем ее убирают из поля зрения и предъявляют фигуру со сложным рисунком и пациенту предлагают найти и обвести простую фигуру в сложном рисунке. При выполнении заданий более чем за 180 секунд диагностируют энцефалопатию. (Патент РФ,2294142, МПК А 61 В 5/16, опубликовано 09.10.2006). Этот способ диагностики имеет ряд существенных недостатков неспецифичность метода, поскольку на правильность и скорость выполнения психологических тестов, оказывает влияние уровень образованности, возраст и характерологические свойства личности. В качестве прототипа выбран способ диагностики дисциркуляторной энцефалопатии,заключающийся в микроскопическом исследовании биологической ткани, при этом берут сыворотку крови, выдерживают в пробирке в течение 18-24 ч при 5-8 С, наносят на поверхность предметного стекла в количестве 0,02 мл в форме капли и высушивают не менее 24 ч при 20-25 С и относительной влажности 60-70 и при наличии штриховых трещин в краевой зоне капли диагностируют 1-ю стадию заболевания, при наличии серповидных образований в центральной зоне капли и единичных токсических сгустков в краевой - 2 А стадию, при наличии серповидных образований в краевой зоне, множественных токсических сгустков - 2 Б стадию заболевания, при раздвоении капли, наличии пакетов серповидных образований в краевой и центральной зонах,большого количества токсических сгустков - 3 стадию заболевания.- изменение микроскопических характеристик биологического материала - крови не является специфической характеристикой энцефалопатии и может изменяться при различных соматических состояниях, что снижает точность способа- продолжительная диагностика - на выполнение способа затрачивается не менее 2-х суток необходимость четкого соблюдения определенных условий температурного режима и уровня влажности. Задача изобретения - разработка способа диагностики гипертонической энцефалопатии,повышающего точность и быстроту выявления пациентов с ГЭ, что дает возможность своевременно выявить группу больных высокого цереброваскулярного риска, нуждающуюся в проведении лечебно-профилактических мероприятий. 2 Технический результат заявляемого способа состоит в обеспечении высокой точности и быстроты постановки диагноза. Кроме того, предлагаемый способ отличается,тем, что он несложен и может служить методом экспресс диагностики в терапии, кардиологии и неврологии. Сущность предложенного способа диагностики гипертонической энцефалопатии состоит в исследовании сыворотки крови,согласно изобретению проводят определение уровня белка 100 методом иммуноферментного анализа и при содержании белка 100 менее 67 нг/мл диагностируют гипертоническую энцефалопатию. Нейроспецифический белок 100 продуцируется и секретируется клетками головного мозга астроцитами и клетками микроглии, оказывая цитокиноподобное ауто и паракринное действие на клетки мозга,проявляя ростовые,проапоптотические и нейротрофические свойства,вследствие чего содержание белка в сыворотке крови отражает не только структурные, но и функциональные нарушения головного мозга. Способ осуществляют следующим образом. Для исследования производят забор венозной крови из локтевой вены в количестве 5 мл натощак. Свежая сыворотка крови является рекомендованным образцом для определения белка 100. Набор для количественного определения белка 100 иммуноферментным методом, Великобритания) является твердофазным,неконкурентным методом, основанным на прямой сэндвич-технологии. Стандарты и образцы пациентов инкубируют вместе с биотинилированными анти 100 моноклональными антителами (полученными из мыши) в покрытых стрептавидином ячейках микропланшета. В процессе инкубации белок -100, содержащиейся в стандартах или образцах пациентов, адсорбируется на покрытых стрептавидином ячейках микропланшета с биотинилированными анти 100 моноклональными антителами. Стрипы затем промывают и инкубируют с пероксидазой хрена меченой анти 100 моноклональными антителами. После промывки в каждую ячейку добавляют буферный субстрат/хромогенный реагент (перекись водорода и 3,3,5,5-тетраметилбензидин) и проходит ферментная реакция. В процессе реакции развивается голубая окраска, если присутствует антиген. Интенсивность окраски пропорциональна количеству антигена -100, присутствующему в образце. Интенсивность окраски измеряют на микропланшетном ридере при 620 нм (или возможно при 405 нм после добавления стопраствора). Стандартные кривые строят для каждого анализа в координатах оптическая плотность против концентрации для каждого стандарта. Концентрацию -100 в образцах пациента рассчитывают по калибровочной кривой и при содержании белка 100 в сыворотке крови менее 67 нг/мл диагностируют гипертоническую энцефалопатию. 21810 Предлагаемый способ диагностики гипертонической энцефалопатии прошел клиническое испытание при обследовании 18 практически здоровых добровольцев (1 группа) и 64 нелеченных больных АГ - степени, среднего и высокого риска (по классификации ВОЗ/МОАГ, 1999 г.). Всем обследованным проводился забор крови и определение уровня белка 100, указанным выше способом. Содержание белка в сыворотке крови распределились в диапазоне от 35 нг/мл до 96,8 нг/мл (медиана распределения - 66,5 нг/мл). По уровню белка 100 пациенты с АГ были распределены на 2 группы 1 группа- 38 больных с уровнем белка 100 выше 67 нг/мл 2 группа - 26 больных с уровнем белка 100 менее 67 нг/мл. Содержание белка 100 в сыворотке крови,данные комплексного клинического,нейропсихологического и нейровизуализационного обследования у больных АГ и в контрольной группе представлены в таблице 1. Для проведения статистического анализа в исследованных группах использована программа статистической обработки информации 6,0 (, , 2006). Вычисляли среднюю и ошибку средней (М). Сравнение осуществлялось с помощью критериев Стьюдента(сравнение средних). Уровень достоверности оценивался значением р. Различия при сравнении считались достоверными с вероятностью более 95 при р 0,05. Таблица Показатели белка 100 в сыворотке крови, данные клинического, нейропсихологического и нейровизуализационного обследования у больных АГ и в контрольной группе Показатель(расширенный нейропсихологический тест) Неправильные ответы 23,47,8 Количество категорий 8,101,749 Персеверации 5,75,6 Концептуализация 92,45,3 Перивентрикулярный лейкоареоз,степень выраженности, балл Субкортикальный лейкоареоз, общий балл Единичные лакуны Примечание - Различия с показателями группы здоровых лиц. Достоверность различий- р 0,05- р 0,01 В ходе комплексного клинического и нейровизуализационного обследования у больных АГ с уровнем белка выше 67 нг/мл не выявлено клинико-инструментальных признаков цереброваскулярного заболевания, у пациентов с уровнем белка менее 67 нг/мл показатели нейропсихологического тестирования и признаки компьютерной (магнитно-резонансной томографии) соответствовали гипертонической энцефалопатии. Полученный диагностический критерий по уровню белка 100 в сыворотке крови был полностью подтвержден данными клинико-инструментального исследования. Приводим примеры. Пример 1. Пациент Б., 1955 года рождения. Около 8-ми лет страдает артериальной гипертонией с максимальными цифрами АД 180/110 мм рт.гт. Из анамнеза отсутствуют указания на перенесенный инсульт,травмы головного мозга, нейродегенеративные заболевания. Уровень белка 100 в сыворотке крови составил 74,8 нг/мл, поскольку содержание белка 100 в сыворотке крови более 67 нг/мл, это дает основании исключить развитие ГЭ Пример 2. Пациентка К., 1951 года рождения. Около 10-ти лет страдает артериальной гипертонией с максимальными цифрами АД 200/120 мм рт.ст. Из анамнеза отсутствуют указания на перенесенный инсульт,травмы головного мозга,нейродегенеративные заболевания. Уровень белка 100 в сыворотке крови составил 52,4 нг/мл,поскольку содержание белка 100 в сыворотке крови более 67 нг/мл, что свидетельствует о развитии ГЭ. Таким образом, у больных АГ формирование ГЭ сопровождается снижением содержания нейроспецифического белка 100 в крови, что позволяет рассматривать данный фактор, как диагностический маркер развития энцефалопатии. Использование предложенного метода имеет следующие преимущества 3 21810 1) высокая специфичность в диагностике ГЭ 2) быстрая диагностика 3) обеспечивает возможность своевременного и рационального проведения комплекса терапевтических мероприятии. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ диагностики гипертонической энцефалопатии путем исследования сыворотки крови,отличающийся тем, что проводят определение уровня белка 100 методом иммуноферментного анализа и при содержании белка 100 менее 67/ нг/мл диагностируют гипертоническую энце-фалопатию.