Консорциум штаммов микроорганизмов-деструкторов: Micrococcus varians PR69, Micrococcus roseus УД6-4, Bacillus firmus S20, Bacillus subtilis PR28, используемый для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов

(51) 09 1/10 (2006.01) 12 1/20 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к области биотехнологии и экологии и касается создания нового консорциума бактерий, который может быть использован для очистки почвенных экосистем от нефти и нефтепродуктов. Предлагается консорциум штаммов микроорганизмов 69,УД 6-4,20,28, обладающий высокой нефтеокисляющей активностью в отношении алифатической и ароматической фракции нефти. Штаммы выделены из почвы, хронически загрязненной нефтью и нефтепродуктами. В полевых условиях консорциум углеводородокисляющих микроорганизмов снижает концентрацию нефти в почве на 90,40 за 1,5 месяца, что улучшает экологическую обстановку окружающей среды.(72) Саданов Аманкелди Курбанович Шорабаев Ерик Жарылкасынович Чукпарова Айгуль Ултараковна Кулжанова Камшат Арыстановна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Национальный центр биотехнологии Республики Казахстан Комитет науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) КОНСОРЦИУМ ШТАММОВ МИКРООРГАНИЗМОВ-ДЕСТРУКТОРОВ 69,УД 6-4,20,28, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ОЧИСТКИ ПОЧВЫ ОТ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ 21686 Изобретение относится к области биотехнологии и экологии и касается получения нового консорциума штаммов, который может быть использован для биологической очистки почвы от нефти и нефтепродуктов. Известен биопрепарат для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов, включающий аэробные нефтеокисляющие бактерии ВКПМ В-6000,. ИЖ-46, . 56 Д и. -1 в концентрации 1,2-5,0107 кл/мл препарата,отличающийся тем, что он дополнительно содержит нефть, сахарозу и полиэтиленгликоль при следующем соотношении, мас. нефть -0,5-1,сахароза - 1-5, полиэтиленгликоль - 1-5, остальное вода (патент 2191752, БИ 30, 2002, С 023/34). Недостатком этого препарата является использование трех не идентифицированных культур, дорогого углеводного источника сахарозы, отсутствие данных по степени очистки. Известен консорциум штаммовВКМ -2070,ВКМ -2071,ВКМ 2072,ВКМ -2074,-2073,используемый для очистки почв, почвогрунтов, вод от нефти,нефтепродуктов и остаточной замазученности (патент 2160719 С 1). Недостатком данного консорциума штаммов является неспособность осуществлять утилизацию нефти и нефтепродуктов при высоком содержании минеральных солей и засушливых природных условий. Задачей изобретения является получение нового консорциума штаммов,характеризующегося высокой нефтеокисляющей активностью в аридных условиях и галотолерантностью. Технический результат - ускорение процесса очистки почвы от нефти и нефтепродуктов в засушливо-климатических условиях. Характеристика штамма 69 Штамм 69 выделен из нефтезагрязненной почвы Атырауской области. Штамм представляет собой кокки, одиночные и в парах, 1,25 мкм в диаметре. Не кислотоустойчивые,грамположительные, спор не образуют. На СПА культура образует округлые, выпуклые оранжевого цвета колонии, диаметром 1-2 мм. Край колоний ровный, пигментов в среду не выделяет. Аэроб. При росте на СПБ образует придонный рост со скудным осадком. Штамм не токсичен и не патогенен. Физиолого-биохимические признаки Использует маннит и арабинозу с образованием кислоты. Крахмал не гидролизует, желатину не разжижает. Сероводород и индол не образует. Нитраты восстанавливает до нитритов. Дает положительную реакцию на каталазу и отрицательную на оксидазу. Обладает уреазной активностью. Растет на СПБ при 7 . Хранят на скошенных агаризованных средах с 1 нефтью или с углеводородом при температуре 4 С. Пересев осуществляют через 3 месяца. Растет при температуре 1537 С, оптимум температуры роста -2530 С. Штамм характеризуется высокой способностью к утилизации нефти и нефтепродуктов. Штамм бактерий 69 депонирован в коллекции микроорганизмов РКМ под номером - 0181. Характеристика штаммаУД 6-4 ШтаммУД 6-4 выделен из образцов нефтезагрязненной почвы, отобранных в Атырауской области. Штамм представляет собой кокки, одиночные и в парах,1,25 мкм. Не кислотоустойчивые,грамположительные, спор не образуют. На СПА культура образует округлые, выпуклые колонии красного цвета, диаметром 1 -2 мм. Край колоний ровный, пигментов в среду не выделяет. Аэроб. При росте на СПБ образует придонный рост со скудным осадком. Штамм не токсичен и не патогенен. Физиолого-биохимические признаки В качестве источника углерода использует глюкозу. Крахмал не гидролизует, желатину не разжижает. Сероводород образует, индол не образует. Нитраты восстанавливает до нитритов. Дает положительную реакцию на каталазу и отрицательную на оксидазу. Обладает уреазной активностью. Растет на СПБ при 7 . Хранят на скошенных агаризованных средах с 1 нефтью или с углеводородом при температуре 4 С. Пересев осуществляют через 3 месяца. Растет при температуре 1037 С, оптимум температуры роста -2530 С. Штамм характеризуется высокой способностью к утилизации нефти и нефтепродуктов. Штамм бактерийУД 6-4 депонирован в коллекции микроорганизмов РКМ под номером - 0180. Характеристика штамма 20 Штамм 20 выделен из нефтезагрязненной почвы Атырауской области. Штамм представляет собой грамположительные палочки с закругленными концами, образует споры эллиптической формы. На СПА культура образует округлые, выпуклые колонии бледно-розового цвета, диаметром 2-3 мм. Край колоний ровный,пигментов в среду не выделяет. Аэроб. При росте на СПБ образует пленку,бульон прозрачный со скудным осадком. Штамм не токсичен и не патогенен. Физиолого-биохимические признаки В качестве источника углерода использует глюкозу и маннозу. Крахмал гидролизует, желатину разжижает. Казеин не гидролизует. Сероводород и индол не образует. Нитраты восстанавливает до нитритов. Дает положительную реакцию на каталазу и отрицательную на оксидазу. Обладает уреазной активностью. Растет на СПБ при 7 . 21686 Растет при температуре 1537 С, оптимум температуры роста -2530 С. Хранят на скошенных агаризованных средах с 1 нефтью или с углеводородом при температуре 4 С. Пересев осуществляют через 3 месяца. Штамм характеризуется высокой способностью к утилизации нефти и нефтепродуктов. Штамм бактерий 20 депонирован в коллекции микроорганизмов РКМ под номером 0182. Характеристика штамма 28 Штамм 28 выделен из нефтезагрязненной почвы Атырауской области. Штамм представляет собой грамположительные палочки с закругленными концами, образует споры эллиптической формы. На СПА культура образует округлые, выпуклые колонии розового цвета,диаметром 2-3 мм. Край колоний ровный,пигментов в среду не выделяет. Аэроб. При росте на СПБ образует пленку,бульон прозрачный со скудным осадком. Штамм не токсичен и не патогенен. Физиолого-биохимические признаки В качестве источника углерода использует глюкозу с образованием кислоты. Крахмал и казеин гидролизует, желатину разжижает. Сероводород и индол не образует. Нитраты восстанавливает до нитритов. Дает положительную реакцию на каталазу и отрицательную на оксидазу. Растет на молочножелточном солевом агаре, а также при 7 . Растет при температуре 1537 С, оптимум температуры роста -2530 С. Хранят на скошенных агаризованных средах с 1 нефтью или с углеводородом при температуре 4 С. Пересев осуществляют через 3 месяца. Штамм характеризуется высокой способностью к утилизации нефти и нефтепродуктов. Штамм бактерий 28 депонирован в коллекции микроорганизмов РКМ под номером - 0183. Сущность изобретения поясняется следующими конкретными примерами Пример 1. Ассоциацию углеводородокисляющих культур 69,УД 6-4,20,28 выращивали при аэрации, на жидкой среде следующего состава, г/л-10 43 - 1,0 К 2 НРО 4 - 1,0 КН 2 РО 4 - 1,0 472 - 0,2 СаС 12- 0,02 дистиллированная вода - 1 л, рН среды 7,07,2. Среду разливают по 100 мл в колбы объемом 250 мл и стерилизуют при 1 атм. 30 минут. В качестве единственного источника углерода использовали сырую нефть в концентрации 5. Культивируют на качалке при 180 об./мин при 2528 С 7 суток. Потребление нефти определяют гравиметрическим методом,экстрагируя остаточную нефть гексаном и хлороформом. Контролем служит минеральная среда с нефтью без бактерий. Утилизация нефтяных углеводородов за это время составила - алифатической фракции нефти на 55,82, ароматической на 27,73. Данные представлены в таблице 1. Пример 2. Проводили изучение нефтеокисляющей активности консорциума штаммов в полевых условиях. Объектом служила загрязненная почва на территории месторождения Жанаталап,НГДУ Жаикмунайгаз Исатайского района Атырауской области, тип почвы солонец-солончак. В почву одновременно вносили четыре штамма углеводородокисляющих микроорганизмов при титре клеток каждого 108-109 кл/г почвы. После внесения консорциума проводили рыхление. Контролем служил вариант без бактерий. Время культивирования 1,5 месяца. Остаточное количество нефти в почве определяли гравиметрическим методом,экстрагируя нефть гексаном и хлороформом. Результаты исследования показали,что в опытном образце содержание нефти снизилось на 90,4 (табл. 2). Таким образом, предлагаемый консорциум штаммов 69,УД 6-4,20,28 способен утилизировать алифатическую фракцию нефти на 55,82, ароматическую на 27,73, при ее содержании в минеральной среде 5, и в полевых условиях 90,4. Данный консорциум может быть использован для очистки нефтезагрязненных почв. Таблица 1 Деструкция консорциумом микроорганизмов 5 сырой нефти в жидкой среде Варианты Контроль Консорциум Степень утилизации сырой нефти с месторождения С. Балгимбаев,Алифатическая фракция нефти Ароматическая фракция нефти 3,00 3,02 55,82 27,73 Таблица 2 Степень деградации нефти в почве под воздействием консорциума 21686 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Консорциум штаммов микроорганизмовдеструкторов(депонированный в Республиканской коллекции микроорганизмов НЦБ РК,- 0181),УД 6-4 (депонированный в Республиканской коллекции микроорганизмов НЦБ(депонированный в Республиканской коллекции микроорганизмов НЦБ РК,- 0182),28 (депонированный в Республиканской коллекции микроорганизмов НЦБ РК,0183), используемый для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов.