Консорциум штаммов Clostridium chauvoei R15, Clostridium chauvoei B-0290, используемый для получения вакцины против эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота

(51) С 12 120 (2006.01) 61 3908 (2006.01) 12 1145 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к области микробиологии, в частности к консорциумам штаммов клостридий для приготовления вакцины и для специфической профилактики эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота. Технический результат, обеспечиваемый изобретением, выражается в создании консорциума штаммов культур клостридий, биомассы культуры,которые в совокупности обеспечивает высокий профилактический эффект и способствует значительному повышению иммуногенности препарата. Консорциум штаммов 15 ,В - 0290, используемый для получения вакцины против эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота. Указанные штаммы культур депонированы в лаборатории Музей культур микроорганизмов ДГП Научно-исследовательском ветеринарном институте (КазНИВИ).(72) Горелов Юрий Михайлович Сущих Владислава Юрьевна Каримов Абдилкарим Абрахманович(73) Дочернее государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научноисследовательский ветеринарный институт Республиканского государственного предприятия на праве хозяйственного ведения Научнопроизводственный центр животноводства и ветеринарии Министерства сельского хозяйства Республики Казахстан(54) КОНСОРЦИУМ ШТАММОВ 15,-0290, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ЭМФИЗЕМАТОЗНОГО КАРБУНКУЛАКРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА 20549 Изобретение относится к области микробиологии, в частности к консорциумам штаммов клостридий для приготовления вакцины и для специфической профилактики эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота. Известен консорциум штаммов 15 и 2/14,используемый при производстве концентрированной гидроокисьалюминиевой формолвакцины против эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота и овец ТУ 640 РК 00482536 - РГП 07-99 на Вакцину концентрированную гидроокисьалюминиевую формолвакцину против эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота, 2003. Недостатком известного консорциума является то, что штаммы 15 и 2/14 в совокупности обладают недостаточно высокой профилактической эффективностью. Задачей изобретения является создание консорциума культур клостридий обладающей высокой профилактической эффективностью и способствующему значительному повышению иммуногенности препарата. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в создании консорциума штаммов культур клостридий, биомассы культуры,которые в совокупности обеспечивает высокий профилактический эффект и способствует значительному повышению иммуногенности препарата. Консорциум штаммов 15 ,В - 0290, используемый для получения вакцины против эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота. Указанные штаммы культур депонированы в лаборатории Музей культур микроорганизмов ДГП Научно-исследовательском ветеринарном институте (КазНИВИ). Идентификацию штаммов культур входящих в консорциум, проводят по основным биологическим свойствам(морфологическим,культуральным,биохимическим), согласно определителю бактерий Берджи, Москва (1997 г.).15. Происхождение штамма. Штамм культуры 15 выделен от больного эмфизематозным карбункулом теленка и депонирован из Всесоюзного Государственного научно-контрольного института(Россия) в 1996 г. Выделенный штамм характеризуется следующими признаками. Назначение штамма Полученный штамм культивируем на жидких питательных средах мясопептонный-печеночный бульон, перевар Хоттингера и в термостат при температуре 36-37 С. Штамм отличается быстрым ростом на питательных средах. Заметное развитие отмечают через 16-18 часов после посева материала. Используется для профилактики эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота. 2 15 обладает морфологическими признаками характерными для возбудителя эмфизематозного карбункула крупного рогатого.15 представляют собой подвижные грамотрицательные палочки с закругленными концами. Культуральные свойства. Штамм 15 растет на жидких питательных средах(МППБ, МПК, ПГКМД) при температуре 37-38 С, с обильным газообразованием, сбраживает галактозу,сахарозу, глюкозу, левулезу, лактозу, разжижает желатину, не образует сероводород и индол. Спорообразование. Штамм 5 образует большие споры продолговатой и круглой формы, расположенные центрально или субтерминально. Капсул штамм 15 не образует. Антигенные свойства. В организме животных после введения антигена 5 образуются специфические агглютинины в титрах 132-164. Вирулентность. 20-48-часовая культура штамма 15 вызывает гибель морских свинок в дозе 0,4 см 3. Реактогенность. Культура 15, введенная подкожно морским свинкам,кроликам в объеме 0,2 см 3 вызывает воспалительную реакцию на месте введения с повышением местной температуры на 0,5-1,0 С и значительным отеком, а на 2-3 сутки вызывает некроз тканей, щбель животных наступает через 3-4 сутки. Иммуногенность. Морские свинки после введения инактивированного антигена, полученного из разрушенных клеток штамма 15 в дозе 0,5 см 3 в 65-68 случаях приобретают устойчивость к заражению 48-часовой культурой, введенной в дозе 0,2 см 3 в мышцы задней конечности. Инактивированный антиген, полученный из штамма Штаммпри двукратном введении в дозе 3,0 -5,0 см 3 крупному рогатому скоту обуславливает напряженный иммунитет у 75-85, с образованием агглютининов в титрах 116-1128. Реверсабельность. Штамм 15 по основным культуральным, морфологическим и биологическим свойствам не отличается от эпизоотических культур. Многократные пересевы не изменяют морфологических и культуральных свойств. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма 15 стабильно сохраняются на питательной среде Китт-Тароцци в течение 30-90 суток, на среде ПГКМД до 12 месяцев. 4-5 разовые пассажи культуры на питательных средах не изменяют его свойств. Лиофильно высушенные культуры сохраняют свои исходные свойства не менее 2-х лет. Штамм 15 отобран нами по интенсивности роста на бактериологических средах 20549 и способности накапливать большое количество бактериальной массы.В 0290. Морфологические свойства. Штамм-0290 подвижные грамотрицательные палочки с закругленными концами. Культуральные свойства. Штамм-0290 растет на жидких питательных средах (МППБ, МПК, ПГКМД) при температуре 3738 С, с обильным газообразованием, сбраживает галактозу, сахарозу, глюкозу, левулезу, лактозу,разжижает желатину, не образует сероводород и индол. Спорообразование. ШтаммВ - 0290 образует большие споры продолговатой и круглой формы, расположенные центрально или субтерминально. Капсул штаммВ-0290 не образует. Антигенные свойства. В организме животных после введения антигенаВ 0290 образуются специфические агглютинины в титрах 132-164. Вирулентность. 20-48-часовая культура штаммаВ - 0290 вызывает гибель морских свинок в дозе 3,0 см 3. Реактогенность. КультураВ- 0290, введенная подкожно морским свинкам,кроликам в объеме 0,8-1,2 см 3 вызывает воспалительную реакцию на месте введения с повышением местной температуры на 0,5-1,0 С и значительным отеком, а на 3-5 сутки вызывает некроз тканей, гибель животных наступает через 7 суток. Иммуногенность. Морские свинки после введения инактивированного антигена, полученного из разрушенных клеток штаммаВ- 0290 в дозе 3,0 см в 65-68 случаях приобретают устойчивость к заражению 48-часовой культуройВ -0290, введенной в дозе 0,2 см 3 в мышцы задней конечности. Инактивированный антиген, полученный из штамма Штаммпри двукратном введении в дозе 5,0 см 3 крупному рогатому скоту обуславливает напряженный иммунитет у 75-85, с образованием агглютининов в титрах 116-1128. Реверсабельность. ШтаммВ-0290 по основным культуральным, морфологическим и биологическим свойствам не отличается от эпизоотических культур. Многократные пересевы не изменяют морфологических и культуральных свойств. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штаммаВ - 0290 стабильно сохраняют-ся на питательной среде Китт-Тароцци в течение 30-90 суток, на среде ПГКМД до 12 месяцев. 4-5 разовые пассажи культуры на питательных средах не изменяют его свойств. Лиофильно высушенные культуры сохраняют свои исходные свойства не менее 2-х лет.ШтаммВ - 0290,отобран нами как авирулентный по интенсивности роста на бактериологических средах и способности накапливать значительное количество бактериальной массы. Пример 1. Питательные среды для культивирования клостридий, их инактивация и концентрирование. Для культивирования клостридий используют мясопептонный печеночный бульон (МППБ) под вазелиновым маслом и среду панкреотических гидролизатов казеина, вываренного мясного фарша и дрожжей (ПГКМД). Культивирование штаммов 15 иВ - 0290. Для получения антигенов для вакцины пробирки с МППБ под вазелиновым маслом засеянные культурами 15 иВ - 0290 помещают в термостат с температурой 37 С и выдерживают 24 часа. После проверки чистоты роста путем микроскопии мазков,культуры - каждую раздельно, высевают во флаконы объемом 0,4 л со средой ПГКМД. Для засева одного флакона используют весь объем суточной культуры, выращенной в двух пробирках. Посевы выдерживают при 37 С 24 часа и вновь проверяют на чистоту и типичность морфологии. Пример 2. Изготовление вакцины против эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота. Полученные культуры используют для засева в бутыли с ПГКМД, в количестве 10-15 от общего объема. Засеянные бутыли помещают на 2-3 суток в термостат при 37 С. Для проверки чистоты и типичности морфологии микробных клеток, выборочно делают мазки и микроскопируют. Чистые культуры с типичной морфологией микроорганизмов в концентрации 2-4 млрд.см 3 с рН 5,5 - 6,5 при температуре 37-39 С обезвреживают формалином, который добавляют в количестве 0,5-0,7 в чистом виде или разведенном до 20 концентрации (пересчет ведут на 40 формальдегид). Формалинизированные культуры выдерживают при температуре 38-42 С в течение 10 суток,периодически перемешивая 2-3 раза в сутки. По истечению указанного срока культуры проверяют на стерильность путем высева на МПБ,МППБ, МПА. Наблюдение за посевами ведут 10 суток, в течение которых они должны оставаться стерильными. В реактор с формалинизированными культурами после установления их стерильности, добавляют стерильный 3 раствор гидрата окиси алюминия(ГОСТ 18287) в количестве 155 к общему объему при рН 4,5-7,0. После добавления гидрата окиси алюминия в реакторы, содержимое хорошо перемешивают и оставляют на 2-5 суток при температуре 12-18 до полного просветления надосадочной жидкости. Отстоявшиеся анакультуры концентрируют путем деконтации над осадочной жидкости в количестве 2/3 объема. Соблюдая правила асептики.смешивают оставшиеся части обеих культур в одном реакторе и нагревают до 423 С и при постоянном перемешивании добавляют стерильный 3 20549 горячий (45-60 С) 2-3 раствор агар-агара или желатины из расчета 50 г сухого вещества на 100 дм 3 вакцины. Использование предложенного консорциума микроорганизмов, состоящего из штаммов культур 15 иВ 0290,позволит получать вакцину противэмфизематозного карбункула крупного ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Консорциум штаммов 15,-0290, используемый для получения вакцины против эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота