Инактивированная вакцина против эпизоотического лимфангоита лошадей

(51) 61 39/00 (2011.01) 61 47/42 (2011.01) 12 1/14 (2011.01) 61 31/10 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении стабильной,безвредной и высокоэффективной инактивированной вакцины против возбудителей эпизоотического лимфангоита лошадей. Инактивированная вакцина против эпизоотического лимфангоита лошадей, включающая антиген штамма гриба, его ресуспензирование физиологическим раствором с добавлением геля гидрата окиси алюминия, она содержит тималин и формалин при следующем соотношении компонентов, мас. антиген из штамма-0269(4,0 мг белка в 1,0 см 3 вакцины) 20,0-30,0 гель гидрата окиси алюминия(72) Кадыров Серикбай Оразбаевич Шалабаев Болат Абуович(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт(54) ИНАКТИВИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ЭПИЗООТИЧЕСКОГО ЛИМФАНГОИТА ЛОШАДЕЙ(57) Изобретение относится к области биотехнологии и микологии, а именно к противомикологическим вакцинам и может быть использовано для активной профилактики эпизоотического лимфангоита лошадей. Изобретение относится к области биотехнологии и микологии, а именно к противомикологическим вакцинам и может быть использовано для активной профилактики эпизоотического лимфангоита лошадей, обусловленной грибом рода . Известна инактивированная вакцина против эпизоотического лимфангоита лошадей,включающая антиген из штамм гриба, его ресуспензирование физиологическим раствором с добавлением геля гидроокиси алюминия Носков А.И. Вакцина против эпизоотического лимфангоита лошадей / Бюл.науч.техн.информ. ВНИИ вет.санитарии и эктопаразитологии - 1956 - 1 - с. 59-60. Недостатком указанной вакцины является то, что она не полностью обеспечивает создания иммунитета против эпизоотического лимфангоита лошадей. Задачей изобретения является повышение иммуногенности вакцины и расширение диапазона эффективности специфической профилактики эпизоотического лимфангоита лошадей к местным видам гриба рода . Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении стабильной,безвредной и высокоэффективной инактивированной вакцины против эпизоотического лимфангоита лошадей. Инактивированная вакцина против эпизоотического лимфангоита лошадей,включающая антиген штамма гриба,его ресуспензирование физиологическим раствором с добавлением геля гидрата окиси алюминия, она содержит тималин и формалин при следующих соотношениях компонентов, мас. антиген из штамма-0269(4.0 мг белка в 1,0 см 3 вакцины) 20,0-30,0 гель гидрата окиси алюминия физиологический раствор остальное. Штамм гриба, используемые для изготовления инактивированной вакцины против эпизоотического лимфангоита лошадей, депонирован в лаборатории По изучению генофонда микроорганизмов ТОО КазНИВИ и обладает следующими свойствами. Штамм гриба-0269. Морфологические признаки. Вакцинный штамм-0269 КазНИВИП 08 обладает морфологическими признаками,характерными для возбудителя лимфангоита лошадей. Окрашенные по Грамму культуры гриба грамположительные. Культуральные свойства. Молодые 7-дневные колонии совершенно гладкие, ровные. Колония на средах значительно улучшает рост мицелия добавление к среде глюкозы, маннита, глицерина и особенно, дополнительная прибавка пептона, к 10 му дню достигает диаметра 12-16 мм, на среде Чапека - 10-12 мм. После 10-14 дней становятся складчатыми, иногда с трещинами, бархатистопушистыми, зелено-коричневыми. Бахромчатые, погруженные в субстрат края колонии коричневого цвета. Обратная сторона колоний темно-коричневого в зрелых и старых культурах темного цвета. Мицелий септированный,ветвящиеся, шириной до 3-5 мкм, редко завитки(спирали и кольцевидные) окончания гиф и интеркалярными хламидоспорами диаметром 3-5103-4 мкм. Многочисленные хломидоспоры встречается по разной форме,округлые,грушевидной,толстостенной и с зернистой на коротких ножках расположены по бокам мицелия. Средние размеры их 3-5 мкм. Артроспоры встречается в старых культурах. Биохимические свойства. Штамм гриба-0269 КазНИВИП 08 хорошо растет на МПА, значительно улучшает рост мицелия добавление к среде глюкозы, маннита,глицерина и особенно, дополнительная прибавка пептона, избирательно поражаемом данным грибом. Культивирует при температуре 25-27 С в течение 810 дней. В этих условиях наблюдается ускорение лагфазы и усиливается накопление биомассы (у эталонного штамма за 15 сут). Бахромчатые,погруженные в субстрат края колонии коричневого цвета. Обратная сторона колоний темнокоричневого в зрелых и старых культурах темного цвета. Из числа углеводов плохо усваивается сахароза. Факторами роста является глюкоза,глицерин, пептон и маннит. Элементами питания является азот, углерод, водород, кислород, а наиболее важные микроэлементы - фосфор и сера. Все эти микро- и макроэлементы участвуют во всех биохимических реакциях происходящих в клетках. Сероводород и индол не образуют. Антигенные свойства. На введения культуры штамма в организме лошадей, кроликов и морских свинок образуются специфические агглютинины в титрах 140 - 11280. Маркерные признаки. Биохимические - на МПА при 7,4-7,6 до концентрации белка 6-8 мг/см 3. Многочисленные хломидоспоры, округлые,грушевидной, толстостенной и с зернистой на тонких коротких ножках расположены по бокам мицелия. Средние размеры их 3-72-3 мкм. Артроспоры встречается старых культурах по форме они слегка булавовидные, удлиненно овальные с тупым наружным концом, размером 4-8 мкм в диаметре. Физиологические хемогетеротроф. По отношению к кислороду аэроб. Не обладает метаболическими свойствами. В минеральном питании для основного обмена грибов, необходимо азот, углерод, кислород, водород, фосфор, калий,магний, железо, медь, цинк, марганец, молибден,кальций, кобальт, ванадий. Иммунохимические - в реакциях РСК и РДСК титры антител составляет от 110 до 11280 2 отличается от эпизоотических штаммов слабой вирулентностью, высокой спорогенностью и активностью при внутримышечном введении. Патогенные свойства. Штамм гриба-0269 КазНИВИП 08 патогенный для лошадей, ослов и мулов. Иммуногенность. При двукратном внутримышечном введении штамма в дозе 5,0 см 3 создают напряженный иммунитет у привитых лошадей, продолжительностью не менее 12 месяцев. Реактогенность. Штамм гриба-0269 КазНИВИП 08 слабореактогенен для лошадей при внутримышечном введении. Споророобразование. Максимальный уровень спорообразования на МПА 300-350 млн/см 3. Реверсабельность и реактогенность. Штамм гриба отличается от эпизоотических изолятов слабой вирулентностью, отсутствием заражения при контакте между животными, высокой активностью при внутримышечном введении. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма гриба-0269 КазНИВИП 08 стабильно сохраняются на протяжении 5 лет при условии редких пересевов (2-3 раза в год), не ослабляя патогенные свойства. Штамм гриба-0269 КазНИВИП 08 не снижает активности при температуре 2-10 С в течение 12 месяцев, в нативном состоянии в течение 6 месяцев, в замороженном при минус 40 С в течение 6 месяцев,при 20 С в течение 2 лет. Пример 1. Инактивированную вакцину против эпизоотического лимфангоита лошадей используют внутримышечно двукратно с интервалом 10 дней при следующем соотношении компонентов антиген из штамма-0269(4.0 мг белка в 1,0 см 3 вакцины) 20,0 гель гидрата окиси алюминия физиологический раствор остальное. Пример 2. Инактивированную вакцину против эпизоотического лимфангоита лошадей используют так же, как в примере 1 при следующем соотношении компонентов антиген из штамма-0269 так же, как в примере 2 при соотношении компонентов антиген из штамма-0269 гель гидрата окиси алюминия физиологический раствор остальное. Готовая инактивированная вакцина против эпизоотического лимфангоита лошадей представляет собой жидкость коричневатого цвета. Вакцина сохраняет свои биологические свойства при условии хранения в закрытых сухих, темных помещениях при температуре 2-10 С. Срок годности вакцины 12 мес. со дня окончании разлива вакцины. Пример 4. Для получения инактивированной вакцины против эпизоотического лимфангоита лошадей берут 5-6 сут культуру штамма-0269, выращивают в матрасовых колбах на МПА при 7,4-7,6 и температуре 28-30 С в течение 7-9 дней. Выращенную грибницу инактивируют 3 формалином и снимают с поверхности питательной среды стеклянными грибными скребками и гомогенизируют в миксерах. Затем дополнительно подвергают разрушению ультразвуком на УЗДН-А частотой волн 22 кГц, интенсивностью 100 Вт/см 2 в течение 30 мин. После разрушения гомогенная масса помещается в холодильник при температуре 4,8 С в течение 1 сут затем берется проба для микроскопического анализа на наличие не разрушенных спор с последующим посевом на питательные среды. Затем берутся 3 пробы для бактериологического и микологического контроля в дозе 1,0 см 3. Далее полученную гомогенную массу центрифугируют при 6000 об/мин в течение 20 мин и через вата марлевые фильтруют. Верхний слой гомогената необходимо для изготовления инактивированной вакцины. С помощью фотоэлектроколориметром определяют концентрацию полученного белка в 1,0 см 3 полученного супернатанта. После чего к грибной суспензии антигена на физиологическим растворам добавляют гель гидрата окиси алюминия (12,0-15,0) по сухому веществу. Посуточную смесь ставят в холодильник до 1 сут и время от времени перемешивают 3-4 раза. После этого к вакцине добавляют тималин и формалин для консервации. Все тщательно перемешивают, разливают по 100,0 см 3 в стерильные флаконы, закатывают и этикетируют. Хранят холодильнике при температуре 4-8 С. гель гидрата окиси алюминия Инактивированная вакцина против эпизоотического лимфангоита лошадей, включающая антиген штамма гриба,ресуспензированный физиологическим раствором с физиологический раствор остальное. Пример 3. Инактивированную вакцину против эпизоотического лимфангоита лошадей используют добавлением геля гидрата окиси алюминия,отличающаяся тем, что она содержит антиген штамма гриба-0269, а также дополнительно содержит тималин и формалин при следующем соотношении компонентов, мас. гель гидрата окиси алюминия антиген из штамма-0269