Поливалентная сухая концентрированная вакцина против лептоспироза животных, способ получения вакцины, способ профилактики лептоспироза животных

(51) 61 39/116 (2006.01) А 61 К 39/02 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН) в равных количествах. Способ получения сухой концентрированной вакцины против лептоспироза животных включает раздельное выращивание штаммов лептоспир, их инактивирование, добавление алюмокалиевых квасцов, концентрирование, смешивание, расфасовку во флаконы и лиофилизацию. Способ профилактики лептоспироза животных предусматривает однократное внутримышечное введение вакцины в дозах взрослым животным 2-4 мл, а молодняку - 0,5-1 мл. Способ обеспечивает повышение эффективности специфической профилактики заболевания и снижение трудозатрат при проведении вакцинации. Предложенное изобретение позволяет повысить иммуногенность и выход вакцины, стабильность ее в процессе хранения, повысить эффективность профилактики лептоспироза животных, а также снизить затраты на получение вакцины.(72) Бияшев Кадыр Бияшевич Киркимбаева Жумагуль Слямбековна(54) ПОЛИВАЛЕНТНАЯ СУХАЯ КОНЦЕНТРИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ЛЕПТОСПИРОЗА ЖИВОТНЫХ, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИНЫ, СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ЛЕПТОСПИРОЗА ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и касается получения вакцины против лептоспироза сельскохозяйственных животных и способа профилактики этой инфекции. Разработана сухая поливалентная концентрированная вакцина против лептоспироза животных,включающая антигены восьми возбудителей лептоспироза (штаммы,12828 Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности к способам получения вакцины и профилактики лептоспироза животных. Лептоспироз - инфекционное, природноочаговое, антропозоонозное заболевание, протекающее с явлениями септицемии, геморрагического гастроэнтерита, язвенного стоматита, некрозов кожи, а также проявляющееся абортами и рождением нежизнеспособного потомства. К лептоспирозу восприимчивы все виды млекопитающих и человек. Источником и резервуаром лептоспироза являются переболевшие животные, а также грызуны, являющиеся пожизненными лептоспироносителями заражение происходит при водопое, купании, поедании трупов грызунов или инфицированных кормов. Смертность среди заболевших животных в последние годы возросла и составляет до 30-40 , нанося значительный экономический ущерб. В настоящее время дифференцированы более 200 сероваров лептоспир, объединенных в 22 серогруппы. Некоторые серовары лептоспир встречаются только на территории Казахстана, вызывая заболевания у животных и людей. Из очагов лептоспироза Восточно-Казахстанской области от больных животных в 77,8 была выделена, пораженность крупного рогатого скота составила 80 , собак - 80 , свиней - 30 , кошек 50 , грызунов - 60 . Известна поливалентная вакцина против лептоспироза сельскохозяйственных животных и пушных зверей (предварительный патент 5880, кл. А 61 К 39/02, 1998). Поливалентная вакцина против лептоспироза сельскохозяйственных животных и пушных зверей включает штаммыо,,в равных количествах, формалин (0,4-0,5 ), квасцы (0,13-0,15),хлористый кальций (0,13-0,1), водно-сывороточная среда (до 1 л). Способ изготовления поливалентной вакцины против лептоспироза сельскохозяйственных животных и пушных зверей включает раздельное выращивание вышеуказанных штаммов лептоспир,инактивацию формалином,добавление алюмокалиевых квасцов,концентрирование,смешивание в равных объемах, закатывание металлическими колпачками, расфасовку во коны и профилактики флаСпособ этикетирование.лептоспироза сельскохозяйственных животных и пушных зверей включает однократное внутримышечное введение поливалентной вакцины молодняку крупного рогатого скота, свиней, лошадей, верблюдов, ослов до 1 года - 3 мл, собакам и пушным зверям до 1 года - 1 мл,взрослым животным - от 3 до 7 мл. Недостатками данной вакцины являются- для данной вакцины не используются серовары лептоспир, встречающихся на территории Казахстана, что обуславливает низкую иммуногенность известной вакцины- способ изготовления вакцины устарел, не экономичен для иммунизации требуется большая иммунизирующая доза из-за отсутствия концентрирования бактериальных масс. В настоящее время с целью увеличения выхода и стабильности вакцины наиболее выгодным является изготовление вакцины в сухом виде, что обеспечивает длительную сохранность иммуногенной активности вакцины и повышение эффективности профилактики лептоспироза животных. Задачей изобретения является разработка поливалентной сухой концентрированной вакцины против лептоспироза животных, способа получения вакцины и способа профилактики лептоспироза животных. Техническим результатом изобретения является повышение иммуногенности, выхода и стабильности вакцины в процессе хранения, снижения трудозатрат и повышение эффективности профилактики лепто-спироза животных. Поливалентная сухая концентрированная вакцина против лептоспироза животных включает штаммы лептоспир 47,27,65,77,11,91,28 в соотношении 1111111, при этом она содержит дополнительно штамм 55. пособ получения поливалентной сухой концентрированной вакцины против лептоспироза животных включает раздельное выращивание штаммов лептоспир 47,27,65,77,11,91,28, их инактивирование формалином, добавление алюмокалиевых квасцов, концентрирование инактивированных культур, смешивание их в равных объемах, расфасовку во флаконы, при этом дополнительно выращивают штамм 55, выращенные культуры штаммов 47,27,65,77,11,91,28,55 инактивируют формалином в концентрации 0,3, добавляют алюмокалиевые квасцы - 0,1, концентрирование инактивированных культур осуществляют путем центрифугирования, смешивают, расфасовывают во флаконы и лиофилизируют. Способ профилактики лептоспироза животных включает однократное, внутримышечное введение поливалентной вакцины, причем доза для молодняка крупного и мелкого рогатого скота, оленей, свиней, лошадей, верблюдов и ослов до 1 года составляет 1-2 мл, для молодняка собак и пушных зверей до 1 года - 0,5-0,8 мл, для крупного и мелкого рогатого скота, оленей, свиней, лошадей, верблюдов и ослов старше 1 года - 2-4 мл, для собак и пушных зверей старше 1 года - 2 мл. Пример 1. Изготовление вакцины,,засевают для получения матровой расплодки каждый отдельно по 3 см 3 в 200 мл флакон, содержащий 100 см 3 водно-сывороточной среды(ВСС), рН 7,2-7,4. Одновременно культуры засевают в пробирки с ВСС. Посевы во флаконах и в пробирках культивируют 5-7 суток при температуре 28 С. Интенсивность роста лептоспир, их подвижность и морфологию определяют просмотром культур в затемненном поле, приготовленных из пробирок и флаконов. Среды в пробирках и во флаконах остаются прозрачными, без осадка, хлопьев, без запаха. Наблюдается лишь незначительная опалесценция при встряхивании. Проверенные культуры из флаконов засевают каждую отдельно в 10-литровые бутыли с 4-5 литрами среды ВСС в количестве 40-50 см 3. Культуры выращивают в течение 5 суток при температуре 28 С и используют в качестве матровой расплодки. Последнюю перед засевом в 20-литровые бутыли проверяют на чистоту микроскопией мазков в затемненном поле. Выращенные и проверенные на чистоту матровые культуры каждого щтамма засевают в отдельности в 20-литровые бутыли с водно-сывороточной средой из расчета 120-130, т. е. одна часть культуры на 20-30 частей питательной среды. Посевы выдерживают в термостате при температуре 28 С до максимального накопления в среде лептоспир (100120 и выше лептоспир в поле зрения) в течение 5-7 суток. Среда остается прозрачной, без осадков и хлопьев. Рост культуры в каждой бутыли контролируют в затемненной поле. Бутыли с хорошим ростом (100120 и выше лептоспир в поле зрения) отбирают для приготовления вакцины. Инактивирование культур каждого серовара лептоспир, выращенных в бутылях, производят в отдельности, путем внесения 0,3 формалина, содержащего не менее 36,5 формальдегида. Инактивацию культур производят в течение 7 суток при температуре 37-38 С. Через указанный срок проверяют полноту инактивации культур (посевами на питательные среды, определения рН и концентрации лептоспир в поле зрения микроскопа). К инактивированной культуре добавляют 0,1 алюмокалиевых квасцов. Концентрацию инактивированной культуры проводят на роторной центрифуге (С-100) при 10000 оборотах. Полученную бактериальную массу растворяют стерильным изотоническим раствором хлорида натрия, доводят содержание лептоспир до 109 в мл. После установления стерильности (отсутствия роста на питательных средах) различные серовары лептоспир смешивают в равных объемах и расфасовывают в ампулы по 4 мл, которые закрывают марлей и лиофилизируют. Одновременно надосадочную жидкость разливают во флаконы, плотно закрывают пробками, обкатывают металлическими колпачками и используют в качестве растворителя сухой вакцины против лептоспироза. Датой изготовления вакцины считают дату окончания лиофилизации. Пример 2. Контроль вакцины Вакцину проверяют на стерильность, безвредность и иммуногенность. Для проверки на стерильность из 5 флаконов вакцины каждой серии делают посевы по 0,2 мл на ВСС, ПС, МПБ, МПА, на среду Китт-Тароцци по 2 пробирки на каждый флакон. Посевы со всеми средами выдерживают в термостате при 37 С. Питательные среды с посевами должны оставаться стерильными. Для проверки на безвредность отбирают 10 белых мышей живой массой 16-18 г, 5 морских свинок массой 350-400 г. Отобранным животным вводят вакцину белым мышам подкожно по 0,3 мл, морским свинкам подкожно по 5 мл. Все животные должны остаться живыми в течение 10 суток после введения вакцины. Контроль иммуногенной активности осуществляют на кроликах. Для этого трем кроликам массой 1,5-1,8 кг подкожно однократно вводят вакцину в дозах 4108 лептоспир. На 12-14 день после инъекции у кроликов берут кровь для определения агглютинирующего титра сывороток в реакции микроагглютинации - лизиса. Для постановки реакции используют штаммы, из которых готовилась вакцина. При наличии агглютинирующего титра сывороток крови кроликов в разведении 1200-1400 и выше вакцина считается активной. Пример 3 Вакцину применяют для профилактических и вынужденных прививок животным однократно внутримышечно. Крупный и мелкий рогатый скот, олени, свинки,лошади, верблюды, ослы, собаки, лисицы вакцинируются в возрасте 1 года и старше в дозах 2-4 мл. Молодняк этих видов животных иммунизируют в возрасте до 1 года в дозах 1-2 мл, молодняк собак и пушных зверей до 1 года - в дозе 0,5-0,8 мл, собак и пушных зверей старше 1 года - в дозе 2 мл. Вакцина пригодна для применения в течение 12 месяцев со дня изготовления при условии хранения ее при температуре 4-15 С в затемненном месте. Использование предлагаемого способа изготовления и применения поливалентной вакцины против лептоспироза животных из основных возбудителей лептоспироза обеспечивает по сравнению с существующим способом следующие преимущества а) предлагаемая вакцина защищает животных от заболевания лептоспирозом, обусловленным основными сероварами лептоспир при однократном введении вакцины в дозах 2-4 мл, в то время как известную вакцину вводят в дозах 3-5 мл. К тому же,известная вакцина не профилактирует лептоспироз крупного и мелкого рогатого скота, оленей, верблюдов, лошадей и пушных зверей, обусловленного лептоспирами 3) иммунизирующая доза для животных у предлагаемой вакцины в 1,5 раз меньше, чем у применяемой. Увеличился выход и стабильность вакцины,ампула с вакциной рассчитана на 200-400 голов с) снижение трудозатрат ветеринарными специалистами на обслуживание животных и повышение эффективности профилактики. Ожидаемый ежегодный экономический эффект от использования поливалентной концентрированной вакцины против лептоспироза животных составит 50-60 тенге на один затраченный тенге. Предложенное изобретение позволяет повысить иммуногенность и выход вакцины, стабильность ее в процессе хранения, снизить затраты на получение вакцины и повысить эффективность профилактики лептоспироза животных. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Поливалентная сухая концентрированная вакцина против лептоспироза животных, включающая штаммы лептоспир 47,27,65,77,11,91,28 в соотношении 1111111, отличающаяся тем, что она содержит дополнительно штамм 55. 2. Способ получения поливалентной сухой концентрированной вакцины против лептоспироза животных, включающий раздельное выращивание штаммов лептоспир 47,27,65,77,11,91,28, их инактивирование формалином, добавление алюмокалиевых квасцов, концентрирование инактивированных культур, смешивание их в равных объемах, расфасовку во флаконы, отличающийся тем, что дополнительно выращивают штамм 55,выращенные культуры штаммов 47,27,65,77,11,91,28,55 инактивируют формалином в концентрации 0,3 , добавляют алюмокалиевые квасцы - 0,1, концентрирование инактивированных культур осуществляют путем центрифугирования, смешивают, расфасовывают во флаконы и лиофилизируют. 3. Способ профилактики лептоспироза животных, включающий однократное, внутримышечное введение поливалентной вакцины, отличающийся тем, что вводят вакцину по п. 1, причем доза для молодняка крупного и мелкого рогатого скота, оленей, свиней, лошадей, верблюдов и ослов до 1 года составляет 1-2 мл, для молодняка собак и пушных зверей до 1 года - 0,5-0,8 мл, для крупного и мелкого рогатого скота, оленей, свиней, лошадей, верблюдов и ослов старше 1 года - 2-4 мл, для собак и пушных зверей старше 1 года - 2 мл.