Способ получения растительного средства, обладающего вирусингибирующей активностью

(51) 61 36/704 (2006.01) 61 135/00 (2006.01) 61 31/12 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ выявления новых свойств препарата. Экспериментально установлено, что водный экстракт обладает выраженными вирусингибирующими свойствами по отношению к орто- и парамиксовирусам. Технический заявляемый результат - упрощение способа и расширение арсенала средств,обладающих вирусингибирующей активностью,расширение возможностей применения горца земноводного в официнальной медицине. Предлагаемый способ позволяет получить средство, представляющее собой высушенный водный экстракт из травы фармакопейного вида горца земноводного. Способ заключается в том, что траву горца земноводного измельчают, экстрагируют водой при соотношении сырьеэкстрагент - 19 непрерывно в течение 3 часов при 90-100 С, фильтруют,концентрируют. Горец земноводный введен в Реестр лекарственных растений Республики Казахстан(72) Шевченко Анастасия Сергеевна Корулькин Дмитрий Юрьевич Музычкина Раиса Алексеевна Березин Владимир Элеазарович Богоявленский Андрей Павлинович(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Казахский национальный университет им. аль-Фараби Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА,ОБЛАДАЮЩЕГО ВИРУСИНГИБИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ(57) Изобретение относится к области медицины, в частности к средствам из лекарственных растений,обладающим вирусингибирующей активностью. Целью настоящего изобретения является расширение области применения суммарного фитокомплекса горца земноводного за счет Изобретение относится к области медицины и химико-фармацевтической промышленности,а именно к созданию средств,обладающих вирусингибирующей активностью в отношении вируса гриппа птиц А/крачка/Южная Африка/1/61(53) и вируса гриппа человека А/Алматы/8/98(32), а также 2 парамиксовирусов вирус болезни Ньюкасла, штамм ПМВ-1/курица/Алматы/541/04 и вирус Сендай, штамм 960. Средство представляет собой сумму полифенольных соединений из казахстанского вида горца земноводного (.),получаемое экстракцией водой. Изобретение расширяет ассортимент средств с вирусингибирующей активностью в отношении вышеперечисленных вирусов. Наиболее близким по своему действию средством с вирусингибирующей активностью является препарат гипорамин, представляющий собой сумму биологически активных веществ из листьев облепихи крушиновидной, содержащий не менее 60 галлоэллаготаннинов. Биологически активными компонентами препарата являются гидролизуемые таннины, в том числе стриктинин (2722 О 102,52 О),изостриктинин(С 48 Н 32 О 31),казуариктин (С 41 Н 28 О 266 Н 2 О). Из анализа опубликованных данных о вирусингибирующей активности известных лечебных средств, применяемых в медицине(ремантадин, оксолин, бонафтон), следует, что вирусингибирующее действие препаратов зависит от структуры активных соединений. Однако этих данных недостаточно для прогнозирования вирусингибирующей активности в отношении спектра действия. Например,ремантадин,используемый для лечения гриппа А, неактивен в отношении вируса гриппа В. Таким образом, факт наличия вирусингибирующей активности у известных соединений в отношении определенных вирусов не является достаточным критерием наличия чувствительности к этим препаратам других, даже близкородственных видов вирусов. Наиболее близким аналогом к заявляемому является Лекарственное средство для лечения вирусных заболеваний (Патент РФ 2118163, МПК А 61 35/78, опубл. 27.08.1998 г.). Согласно данному способу, гипорамин получают из листьев облепихи крушиновидной путем экстракции водой и органическим растворителем, например, ацетоном,удаления органического растворителя, обработки водного раствора двухкомпонентной смесью алифатического углеводорода с бутиловым спиртом,концентрированием водной фазы с последующим высушиванием водного концентрата. Биологическое действие препарата обусловлено синергическим эффектом входящих в него биологически активных соединений. 50 г измельченных листьев облепихи крушиновидной с содержанием таннинов 21,5 и влажностью 7,1 заливают 0,5 л 50-ного водного ацетона, через 1 ч сливают экстракт, к сырью добавляют свежий растворитель, равный объему слива. Таким образом проводят еще три экстракции. 2 Водно-ацетоновые экстракты объединяют и упаривают до объема 0,3 л. Водный кубовый остаток пятикратно обрабатывают смесью нефраса с бутиловым спиртом (21) в соотношении 11, водную фазу упаривают до 0,1 л и сушат на лиофильной сушилке (время сушки 20 ч.). Выход 16,30 г (32,5 от массы сырья) с содержанием таннинов в препарате 64,05 (с учетом влаги в образце). Данный способ обладает рядом недостатков органический растворитель,многостадийность,сложность в исполнении, низкий выход получаемого продукта, многие биологически активные вещества распадаются при высокой температуре экстракции. Задачей заявляемого изобретения является разработка способа получения лекарственного средства,обладающего вирусингибирующей активностью по отношению к ортои парамиксовирусам, из местного растительного сырья. Технический результат расширение ассортимента средств,обладающих вирусингибирующей активностью, за счет средств,получаемых из природного казахстанского сырья, а также упрощение способа получения по сравнению с существующими. Технический результат достигается путем экстракции растительного сырья (измельченная трава горца земноводного) водой при соотношении сырьеэкстрагент - 19 непрерывно в течение 3 часов при температуре кипения. Способ включает минимальное число стадий экстракция и концентрирование полученного экстракта. Хроматографический анализ состава заявляемого препарата показал наличие в биологически активном комплексе дубильных веществ, тритерпеновых сапонинов,флавоноидов,кумаринов. Количественный анализ компонентов состава конденсированных дубильных веществ - 18.2,гидролизуемых дубильных веществ - 12.6,тритерпеновых сапонинов - 10.3, флавоноидов 0.8, кумаринов - 1.2, органических кислот - 7.5. Ниже приведены примеры получения биологически активного комплекса. Пример 1. Траву горца земноводного высушивают, измельчают до частиц размером 3 мм. Взвешенное количество измельченного сухого растительного сырья заливают горячей водой в соотношении сырьерастворитель - 19 и экстрагируют непрерывно в течение 2-х часов при температуре 90-100 С. Извлечение фильтруют,концентрируют и сушат в вакууме. Выход субстанции - 23.7. Пример 2. Траву горца земноводного высушивают, измельчают до частиц размером 3 мм. Взвешенное количество измельченного сухого растительного сырья заливают горячей дистилированной водой в соотношении сырье растворитель - 18 и экстрагируют непрерывно в течение 3-х часов при температуре 90-100 С. Извлечение фильтруют, концентрируют и сушат в вакууме. Выход субстанции - 25.9. Пример 3. Траву горца земноводного высушивают, измельчают до частиц размером 3 мм. Взвешенное количество измельченного сухого растительного сырья заливают горячей дистилированной водой в соотношении сырьерастворитель - 19 и экстрагируют непрерывно в течение 4-х часов при температуре 90-100 С. Извлечение фильтруют, концентрируют и сушат в вакууме. Выход субстанции - 23.7. Оптимальным заявлено соотношение 19 и время 3 часа по максимальному сухому остатку экстрактивных веществ. В таблице 1 приведены выходы конечного продукта в процентах, в зависимости от времени экстракции. Таблица 1 Выход экстрактивных веществ при соотношении сырьерастворитель -19 в зависимости от времени экстракции Соотношение сырьерастворитель 19 Действие фитокомплекса,полученного заявленным способом, было исследовано в диапазоне доз 0,4-10,0 мг/кг из расчета 0,02-0,25 мг на куриный эмбрион (таблица 2). Для определения вирусингибирующей активности были взяты штаммы вируса гриппа птиц А/крачка/Южная Африка/1/61 (53) и вируса гриппа человека А/Алматы/8/98 (32), а также 2 парамиксовируса вирус болезни Ньюкасла, штамм ПМВ-1/курица/Алматы/541/04 и вирус Сендай,штамм 960. Вирусы выращивали в аллантоисной полости 9-10 дневных куриных эмбрионов в течение 36 часов при 37 С. Вирусингибирующие свойства препаратов изучали методом скрининг-тест, рассчитанным на нейтрализацию вируса в количестве 100 ЭИД 50 заданными дозами препаратов. Критерием вирусингибирующего действия считали наличие достоверного отличия титра вируса по сравнению с контролем. Таблица 2 Вирусингибирующая активность препарата горца земноводного Процент подавления инфекционной активности вируса гриппа,0,4 мг/кг 2 мг/кг 10 мг/кг 0,02 мг/к.э. 0,1 мг/к.э. 0,5 мг/к.э. 0,01 0,05 0,25 вирус гриппа человека А/Алматы/8/98 (32) Водный экстракт горца 100,00,0 100,00,0 земноводного вирус гриппа птиц А/крачка/Южная Африка/1/61 (53) Водный экстракт горца 100,00,0 100,00,0 земноводного ПМВ-1/курица/Алматы/541/04 Водный экстракт горца 100,00,0 100,00,0 земноводного Вирус Сендай, штамм 960 Водный экстракт горца 100,00,0 100,00,0 земноводного Установлено, что водный экстракт горца полностью подавлял репродукцию 100 инфекционных доз вирусов гриппа, вируса болезни Ньюкасла и вируса Сендай во всем диапазоне исследуемых концентраций. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения растительного средства,обладающего вирусингибирующей активностью,включающий экстракцию с последующим фильтрованием и концентрированием фильтрата в вакууме досуха, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют траву горца земноводного (.), в качестве экстрагента - воду при соотношении сырьеэкстрагент - 19, температуре 90-100 С и времени экстракции - 3-4 часа.