Штамм Penicillium funiculosum M-55-13/D антогонист фитопатогенных грибов

(51) 61 39/40 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Штамм-55-13/ выделен на плотной среде Чапека из образца семян пшеницы, отобранного в Акмолинской области,ТОО Макинский элеватор в 2012 г. Оптимальные условия культивирования температура 25-27 С,7-10 суток. Идентифицирован с использованием определителя Шварцман С.Р., Васягина М.П.,Бызова З.М., Филимонова Н.М. Флора споровых растений Казахстана - Алма-Ата, 1973. Штамм-66 депонирован в Коллекции микроорганизмов Республиканского государственного предприятия Научноисследовательский институт проблем биологической безопасности Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан под номером -55-13/. ШтаммМ-55-13/ активный антагонист по отношению к фитопатогенным грибам, ,,, а также продуцент комплекса карбогидраз, фермента глюкозооксидазы.(72) Нечай Наталья Леонидовна Ремеле Валентина Ванифатьевна Махамбетова Рысай Исимгуловна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский институт переработки сельскохозяйственной продукции(57) Изобретение относится к области сельскохозяйственной микробиологии и биотехнологии. Технической задачей изобретения является получение и селекция штамма грибаМ-55-13/, являющегося активным антагонистом по отношению к фитопатогенным грибам,, ,, а также продуцентом комплекса карбогидраз, фермента глюкозооксидазы. Изобретение относится к области сельскохозяйственной микробиологии,биотехнологии,а именно к получению биологического продукта для борьбы с болезнями сельскохозяйственных растений. Известен штамм мицелиального гриба- продуцент комплекса карбогидраз, содержащего целлюлазы, бетаглюканазы, ксиланазы, пектиназы и маннаназы(2006.01), дата публикации 10.10.2004 г.), который может применяться для биодеградации целлюлозои гемицеллюлозосодержащих субстратов, в том числе отходов промышленности и сельского хозяйства, для биодеградации клеточных стенок растений, а также в пищевой и спиртовой промышленности, в пивоварении, в качестве добавок в кормах, для силосования кормов в сельском хозяйстве. Известен штаммКМ МГУ 433 - продуцент фермента глюкозооксидазы(Патент РФ 2170762, М кл. 12 1/14, дата публикации 20.07.2001 г.), которая широко применяется в медицинской диагностике для определения содержания глюкозы в крови, а также в пищевой промышленности для удаления остатков кислорода в соках, пиве и герметически запакованных пищевых продуктах. Недостатком отмеченных штаммов является то,что они выделены в другой почвенноклиматической зоне (Российская Федерация) и применение разработанных на их основе биопрепаратов в других регионах не будет достаточно эффективным. Более близкого технического решения по совокупности признаков и достигаемого положительного эффекта (прототипа) обнаружить не удалось. Технической задачей изобретения является получение штамма грибаМ 55-13/,обладающего антагонистической активностью против фитопатогенов, который можно использовать для защиты растений от комплекса болезней вызываемых грибами, а также продуцента комплекса карбогидраз, фермента глюкозооксидазы. ШтаммМ-55-13/ выделен на плотной среде Чапека из образца семян пшеницы, отобранного в Акмолинской области,ТОО Макинский элеватор в 2012 г. Оптимальные условия культивирования температура 25-27 С,7-10 суток. Идентифицирован с использованием определителя Шварцман С.Р., Васягина М.П.,Бызова З.М., Филимонова Н.М. Флора споровых растений Казахстана - Алма-Ата, 1973. Штамм-66 депонирован в Коллекции микроорганизмов Республиканского государственного предприятия Научноисследовательский институт проблем биологической безопасности Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан под номером -55-13/. Штамм характеризуется следующими признаками. 2 Культурально-морфологические признаки колонии на среде Чапека диаметром 4,5-5,5 см,складчатые, с ровным краем, поверхность шерстистая. Мицелий светлый, желтоватый. Реверс колонии палево-оранжевый. Конидиогенез слабый,светлый, желтоватый. При микроскопировании обнаружены биверти - циллятные кисточки, метулы прижатые, гладкие (8-9,72,5-2,9 мкм). Фиалиды ацерозные (8-92,5-2,8 мкм), с короткой шейкой. Конидии эллиптические, мелкие (2,21,5-2,0 мкм),гладкие. Биологические свойства на лабораторных животных (патогенность) Согласно существующей классификации штаммов (метод, указ. Постановка исследований для обоснования ПДК производственных штаммов и на основе готовых форм препаратов в воздухе рабочей зоны), культураМ 55-13/ принадлежит к 3-му классу опасности. Активность штамма Протеолитическая активность низкая, столбик разжижения желатины составляет 2 мм, зона гидролиза казеина - 4 мм,амилолитическая активность слабая,зона просветления среды с содержанием крахмала не более 3 мм. Штамм проявляет целлюлозолитическую активность остаточное количество нерасщепленной целлюлозы(фильтровальной бумаги) при культивировании гриба на жидкой среде Гетчинсона в течение 28 сут. составляет 41. Фитотоксичность отсутствует, не отмечено снижение силы роста ростков и корней у проростков пшеницы при использовании культуральной жидкостиМ-55-13/. Не является фитопатогенном. Антагонистическая активность по отношению к,,проявляет гиперпаразитизм. Способ определения активности штамма Целлюлозолитическая,амилолитическая,протеолитическая активности - по методу В.И. Билай, 1982 г., Т.П. Сизовой, 1982 г. Фитотоксичность - по методу О.А. Берестецкого,1978 г. Фитопатогенность - по методу В.И. Билай,1982 г., Т.П. Сизовой, 1982 г. Антагонистическая активность - методом агаровых блоков или штриха (Н.С. Егоров, 1986 г). Отношение к углероду ассимилирует сахарозу,ксилозу, глюкозу, лактозу, галактозу, крахмал,глюкан. Отношение к азоту усваивает неорганический и органический азот,хорошо ассимулирует нитратную и аммонийную форму азота. Область применения штамма для получения биопрепарата для защиты растений от фитопатогенных грибов, получение ферментных препаратов. Продукт синтезируемый штаммом - комплекса карбогидраз, фермент глюкозооксидаза. Способ, условия и состав сред для хранения штамма Хранение в лиофильно высушенном состоянии при температуре не выше 0 С. Хранение на коротко скошенной агаризованной среде под минеральным маслом при температуре 4-5 С в течение 1 года. Используется среда Чапека при температуре инкубации 25-27 С в течение 710 дней. Среда Чапека (г/л) 3-3, КН 2 РО 4-1,О 4-0,5, -0,5, -0,01, сахароза - 30, агарагар - 20, вода дистиллированная - 1 л. Стерилизация среды при 0,5 атм. - 20-30 мин. Хранение на скошенной агаризованной среде при температуре 4-5 С, пересев 1 раз в 3 месяца. Используется среда Чапека при температуре инкубации 25-27 С в течение 7-10 дней. Способ, условия и состав сред для размножения Используется среда Чапека при температуре инкубации 25-27 С в течение 7-10 дней. Среда Чапека (г/л) 3-3, КН 2 РО 4-1, О 4 - 0,5,-0,5, -0,01, сахароза - 30, агар-агар - 20, вода дистиллированная - 1 л. Стерилизация среды при 0,5 атм. - 20-30 мин. ШтаммМ-55-13/ является активным антагонистом по отношению к фитопатогенным грибам, ,,, а также продуцентом комплекса карбогидраз, фермента глюкозооксидазы. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм гриба-66,депонирован в Коллекции микрооргнизмов РГП Научно-исследовательский институт проблем биологической безопасности КН МОН РК под номером М-55-13/,являющийся активным антагонистом по отношению к фитопатогенным грибам,, ,, а также продуцентом комплекса карбогидраз, фермента глюкозооксидазы.