Способ получения эритроцитарного диагностикума для выявления аллергических и аутоиммунных дерматитов

(51) 61 35/12 (2006.01) 61 35/18 (2006.01) 61 17/00 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Техническим результатом является получение стандартизированного препарата для выявления аллергических и аутоиммунных дерматитов у животных. Способ получения эритроцитарного диагностикума для выявления аллергических и аутоиммунных дерматитов у животных включает в себя следующие технические операции получение стабилизированных эритроцитов барана за счет фиксации их 3 формалином, получение антигена из тканей эпидермиса, дермы и подкожной клетчатки крупного рогатого скота или лошади,сенситинизация стабилизированных эритроцитов антигеном, консервирование 0,05 азидом натрия и лиофильное высушивание.(72) Омарбекова Гульжан КабылжановнаМуралинов Каримхан Каирханович Муралинова Жулдыз КаримхановнаКозинда Оскар(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ И АУТОИММУННЫХ ДЕРМАТИТОВ(57) Изобретение относится к ветеринарной иммунологии, в частности к способу получения эритроцитарного диагностикума для выявления аллергических и аутоиммунных дерматитов. Изобретение относится к ветеринарной иммунологии, в частности к способу получения эритроцитарного диагностикума для выявления аллергических и аутоиммунных дерматитов. Способ получения эритроцитарного диагностикума для выявления аллергических и аутоиммунных дерматитов у животных включает стабилизацию формалином эритроцитов барана,сенситинизацию танином и сенсибилизацию их антигеном из белкового экстракта тканей эпидермиса, дермы и подкожной клетчатки крупного рогатого скота. Предложенное изобретение расширяет арсенал способов получения эритроцитарных диагностикумов. Реакция непрямой гемагглютинации с использованием эритроцитарного диагностикума, полученного по предложенному способу,превышает чувствительность реакции потребления комплемента в 8-10 раз, реакцию диффузной преципитации - в 80-100 раз. Изобретение относится к ветеринарной иммунологии, в частности к способу получения эритроцитарного диагностикума для выявления аллергических и аутоиммунных дерматитов. Известен способ получения эритроцитарного диагностикума для выявления вируса гриппа, по которому вначале эритроциты барана стабилизируют формалином, танинизируют, затем проводят сенсибилизацию нейрамини-дазным антигеном вируса гриппа (А.с. СССР 1256748, кл. А 61 39/00, 39/02, 1986). Препарат, полученный известным способом,предназначен только для выявления заболевания органов дыхания, вызванного вирусом гриппа. Имеется способ диагностики аутоиммунных буллезных дерматозов, который заключается в проведении непрямой иммунофлюоресценции инкубированных в термостате во влажной камере при температуре 37,0-37,2 С в течение 50-60 минут криостатных срезов исследуемой кожи и оценке иммуно-гистохимической картины по локализации кадгеринового комплекса в ткани. При выявлении нарушения эксперессии кадгеринового комплекса вплоть до его отсутствия диагностируют аутоиммунный буллезный дерматоз. Использование способа позволяет выявить аутоиммунные буллезные дерматозы в ранние сроки заболевания.(Махнева Н. В., Белецкая Л. В.02352947 С 1 200904202009/1 ) Данный метод диагностики может быть использован только для диагностики аутоиммунных буллезных дерматитов в начальной стадии болезни. Задачей изобретения является разработка способа получения эритроцитарного диагностикума для выявления аллергических и аутоиммунных дертарных диагностикумов. Способ получения эритроцитарного диагностикума для выявления аллергических и аутоиммунных дерматитов у животных включает стабилизацию формалином эритроцитов барана,сенситинизацию танином и сенсибилизацию их антигеном из белкового экстракта взвесью тканей 2 эпидермиса, дермы и подкожной клетчатки крупного рогатого скота или лошади. Способ осуществляют следующим образом. Эритроциты барана фиксируют 3 раствором формалина по методу . Эритроцитарную массу трижды отмывают 0,85 раствором хлорида натрия и суспендируют до 10 взвеси, смешивают с равным объмом формалина, содержащего 3 СН 34 и 0,85 раствором хлорида натрия рН-7,2. Для танинизации смешивают равные объемы 5 взвеси формалинизиро-ванных эритроцитов с раствором танина в разведении 150000, рН - 7,2 и выдерживают в течение 30 мин при 37 С. Затем эритроциты трижды отмывают изотоническим раствором хлорида натрия и ресуспендируют до 5 взвеси раствором хлорида натрия. Для получения эритроцитарного диагностикума смешивают равные объемы 5-ной взвеси танинизированных эритроцитов с раствором белкового экстракта из тканей эпидермиса, дермы и подкожной клетчатки в разведении 120. Полученные реагенты выдерживают в течение 120 минут при 56 С и периодически их перемешивают. После этого эритроциты,сенсибилизированные антигеном, трижды отмывают 0,9 раствором хлорида натрия рН-7.2. содержащим 0,4 нормальной кроличьей сыворотки, затем ресуспендируют до 2,5-ной взвеси и консервируют 0,05 раствором азида натрия. При хранении в температурном режиме 46 С в течение одного года препарат сохраняет первоначальную активность. Полученным диагностикумом проводят постановку реакции непрямой гемагглютинации,макрометодом в полистироловых пластинах и микрометодом в микротитровальной пластине типа Такачи как в лабораторных, так и в полевых условиях экспресс методом. Пример Тканевые сенситины приготовляют из тканей эпидермиса, дермы и подкожной клетчатки крупного рогатого скота или лошади. Ткани эпидермиса, дермы и подкожной клетчатки крупного рогатого скота измельчают ножницами,тщательно отмывают от примеси крови вначале дистиллированной водой, а затем трижды 0,85 раствором хлорида натрия до исчезновения видимых примесей крови. Затем осушают фильтровальной бумагой, взвешивают, переносят в стерильную ступку и растирают со стерильным стеклом,по мере растирания постепенно прибавляют физиологический раствор до расчта 9 мл на 1 г ткани. Приготовленную 10 суспензию выдерживают 24 часа при 4 С, затем встряхивают и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут и используют в качестве сенситина. Сенситизацию осуществляют смешиванием равных объемов 2,5 танинизированных,формалинизированных эритроцитов с раствором антигена в разведении 140. Смесь выдерживают в течении 120 минут при 56 С. периодически перемешивая. После чего эритроциты трижды отмывают 0,85 раствором хлорида натрия рН-7,2, 27860 содержащим 0,4 нормальной кроличьей сыворотки, консервируют 0,05 азидом натрия и разливают в ампулы по 2 мл и подвергают лиофильной сушке. Перед употреблением содержимое ампулы растворяют в 2 мл физиологического раствора. Определение активности и специфичности проводят в реакции непрямой гемагглютинации, для чего в 8 лунок полистироловой пластины наливают по 0,5 мл стабилизатора (раствор твин - 60. в разведении 125000). В первую лунку добавляют 0,5 мл позитивной сыворотки в разведении 140. делают последовательные двукратные разведения по 8 лунку, аналогичные разведения делают с негативной контрольной сывороткой затем во все лунки,пипеткой-капельницей добавляют по 0,05 мл (2 капли) диагностикума 2,5 концентрации. Пластинку встряхивают и оставляют при температуре 20-21 С. спустя 2-3 часа учитывают результаты. Результаты считаются положительными, когда эритроциты выстилают дно лунки равномерным слоем в виде зонтика, реакция должна быть положительной не менее чем в 6 лунках. В контроле, в отрицательных результатах, эритроциты выпадают на дно лунки в виде пуговки. Положительный результат гемагглютинации с позитивной сывороткой должен быть не менее, чем в 6-ти лунках, что соответствует титру 11280. В контрольных лунках все результаты отрицательные. Эритроцитарный диагностикум для выявления аллергических и аутоиммунных дерматитов у животных применялся для диагностики аллергического и аутоиммунного дерматита в хозяйствах Алматинской области, а также в клинике Казахского национального аграрного университета. Всего было проведено диагностических исследований у 275 крупного рогатого скота, 78 лошадей, 184 овец, 26 собак и 14 кошек. При контрольной проверке было установлено,что результаты реакций совпадают с данными других реакций потребления комплемента и диффузной преципитации. Установлено, что реакция непрямой гемагглютинации с использованием полученного эритроцитарного диагностикума для выявления аллергических и аутоиммунных дерматитов превышает чувствительность реакции потребления комплемента в 8-10 и реакцию диффузной преципитации -в 80-100 раз. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения эритроцитарного диагностикума для выявления аллергических и аутоиммунных дерматитов у животных,отличающийся тем, что стабилизированные эритроциты барана, сенситинизируют антигеном из белкового экстракта тканей эпидермиса, дермы и подкожной клетчатки крупного рогатого скота или лошади.