Способ хроматографического разделения биологически активных веществ

(51) 01 30/02 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Способ хроматографического разделения биологически активных веществ, выделенных из зерновых сельскохозяйственных культур путем растворения анализируемой пробы в трихлоридном растворе, нанесения полученного раствора на колонку с анализатором в виде сорбента из карбонизованных абрикосовых косточек,многоступенчатого элюирования этанолом с последующей детекцией ультрафиолетом. Способ хроматографического разделения биологически активных веществ, выделенных из зерновых сельскохозяйственных культур позволяет получать белково - липидные комплексы в виде сферосом, использовать Казахстанское сырье,повысить производительность,механическую прочность используемого сорбента, пригодного для длительной эксплуатации хроматографа.(72) Мансуров Зулхаир Аймухаметович Гильманов Мурат Курмашевич Керимкулова Алмагуль Рыскуловна Азат Сеитхан Гукенгеймер Елена Юрьевна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Институт проблем горения Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(56) Гильманов М.К., Дильбарканова Р. Строение и функции сферосом растительной клетки // Монография, Алматы, Галым, 1997 г., с.164.(54) СПОСОБ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО РАЗДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ(57) Изобретение относится к биохимии, в частности, к хроматографическому разделению биологически активных веществ. Изобретение относится к биохимии, в частности,к хроматографическому разделению биологически активных веществ. Известен способ хроматографического разделения биологически активных веществ,выделенных из зерновых сельскохозяйственных культур путем растворения анализируемой пробы в трихлоридном растворе, нанесения полученного раствора на колонку с анализатором в виде сорбента из карбонизованной рисовой шелухи,многоступенчатого элюирования этанолом с последующей детекцией ультрафиолетом. (РК Предварительный патент 19493, Кл. 01 30/02,опубл. 15.05.08, бюл. 5) Недостатком известного способа является невозможность выделять из биологически активных веществ белково - липидные комплексы в виде сферосом. Используемый сорбент в известном способе относится к микропористому углю с размером пор менее 1,6 нм, следовательно, не позволяет осуществить молекулярно ситовую хроматографию, необходимую для получения сферосом. Наиболее близким по техническому решению к заявляемому, является способ хроматографического разделения биологически активных веществ,выделенных из зерновых сельскохозяйственных культур, включающий растворение анализируемой пробы в 0,05 моль/л трисхлоридном растворе,центрифугирование и нанесения полученного раствора на колонку с анализатором в виде сорбента- октилсефарозой, многоступенчатого элюирования этанолом и детекцией ультрафиолетом. При этом,получают белково - липидные комплексы в виде сферосом. (Гильманов М.К., Дильбарканова Р./ Строение и функции сферосом растительной клетки// Монография, Алматы, Галым, 1997 г.,с.164) Недостатком известного способа является высокая стоимость, низкая механическая прочность,обусловленная тем, что сорбент изготовлен из углеводного полимера агарозы, получаемого из водорослей. Сорбент из агарозы легко атакуется грибками и микроорганизмами, в результате чего,становится непригодным для длительной эксплуатации. Задачей заявляемого технического решения является разработка недорогого способа хроматографического разделения биологически активных веществ, выделенных из зерновых сельскохозяйственных культур для получения белково - липидных комплексов в виде сферосом. Техническим результатом заявляемого способа является использование Казахстанского сырья,повышенная производительность,высокая механическая прочность используемого сорбента,пригодного для длительной эксплуатации хроматографа. Задача решается тем,что способ хроматографического разделения биологически активных веществ, выделенных из зерновых сельскохозяйственных культур путем растворения анализируемой пробы в трихлоридном растворе,2 нанесения полученного раствора на колонку с анализатором в виде сорбента из карбонизованных абрикосовых косточек,многоступенчатого элюирования этанолом с последующей детекцией ультрофиолетом. Отличительным признаком заявляемого технического решения является использование в качестве сорбента карбонизованных абрикосовых косточек. В заявляемом способе использование сорбента из карбонизованных абрикосовых косточек,являющимися отходами производства РК, позволяет решить поставленную задачу и способствует достижению технического решения, в отличие от известного способа, в котором в качестве сорбента используют октилсефарозу, основой которой является дорогой, менее доступный природный сахар - агароза. В заявляемом способе используемый сорбент из карбонизованных абрикосовых косточек представляет собой макропористый активный уголь- минеральный материал, в отличие от известного способа, в котором используют сорбент из октилсефарозы, которая является органическим веществом в виде геля. Углерод - минеральный материал обладает высокой прочностью по сравнению с известным - октилсефарозой,вследствие чего, он обеспечивает возможность пропускать анализируемую пробу через колонку анализатора с большим давлением, таким образом,повышая скорость разделения биологически активных веществ. Кроме того, углерод минеральный материал, являющийся стойкой композицией, по отношению к микробиологическим средам. Следовательно,заявляемый способ обеспечивает многократность регенерации сорбента,т.е. многократное хроматографическое разделение биалогически активных веществ, в отличие от известного способа,который предполагает использование сорбента из октилсефарозы, которая может храниться не более трех суток, так как микроорганизмы из окружающей среды, съедают сахар - агарозу, являющийся основой сорбента. Таким образом, использование в заявляемом техническом решении сорбента из карбонизованных абрикосовых косточек,позволяет повысить длительность эксплуатации хроматографа для разделения биологически активных веществ для получения белково - липидных комплексов в виде сферосом. Так как молекула сферосомы представляет собой округлые тельца диаметром 100 нм, то для ее получения путем хроматографического разделения биологически активных веществ необходимо использование сорбента с крупными порами. Сорбент из карбонизованных абрикосовых косточек является макропористым активным углем, размер макро- пор которого составляет более 200 нм. Таким образом, используемый в заявляемом способе сорбент из карбонизованных абрикосовых косточек при хроматографическом разделении биологически активных веществ обеспечивает получение белково 26936- липидных комплексов в виде сферосом, что подтверждает рентгенофазовый анализ. Элюирование 0,05 молярным трисхлоридным раствором при хроматографическом разделении биологически активных веществ обеспечивает сохранность сферосом, т.е. не происходит их разрушение, в отличии от элюировании этанолом. Заявляемый способ хроматографического разделения биологически активных веществ,выделенных из зерновых сельскохозяйственных культур, осуществляют следующим образом. Размолотые беззародышевые половинки зерновых сельскохозяйственных культур растворяют в трихлоридном растворе с получением гомогената. Гомогенат центрифугируют, наносят на колонку с анализатором в виде сорбента из карбонизованных абрикосовых косточек. Затем проводят элюирование 0,05 молярным трисхлоридным раствором с последующей детекцией ультрофиолетом. Рентгенофазовый анализ подтверждают получение белково липидных комплексов в виде сферосом в результате хроматографического разделения биологически активных веществ. Пример 1 Для чистоты реализации способа хроматографического разделения биологически активных веществ, выделенных из зерновых сельскохозяйственных культур с целью получения белково - липидных комплексов в виде сферосом,проводят его подготовку. Порошок анализатора в виде сорбента из карбонизованных абрикосовых косточек кипятят в течение 4-х часов в дистиллированной воде для удаления воздуха из всех его пор. Колонку хроматографа промывают 1 молярным раствором соды (а 2 СО 3) для удаления примесей, загрязняющих сорбент. Затем промывают колонку 3-х кратным объемом дистиллированной воды и уравновешивают стандартным 0,05 молярным трисхлоридным раствором с 7,4. 6 гр размолотых беззародышевых половинок сухих зерен либо пшеницы сорта Стекловидная 24, либо кукурузы, либо ячменя тщательно растирают в фарфоровой ступке в 0,05 молярном трисхлоридном растворе с 7,4 с получением гомогената - бесклеточного экстракта. Гомогенат центрифугируют 10 мин при 10000 об/мин, и наносят на колонку с анализатором в виде сорбента из карбонизованных абрикосовых косточек. Затем проводят элюирование 0,05 молярным трисхлоридным раствором с последующей детекцией ультрафиолетом. В результате реализации заявляемого способа хроматографического разделения беззародышевых половинок сухих зерен либо пшеницы сорта Стекловидная - 24, либо кукурузы, либо ячменя получают белково - липидные комплексы в виде сферосом, что подтверждает рентгенофазовый анализ. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ хроматографического разделения биологически активных веществ, выделенных из зерновых сельскохозяйственных культур путем растворения анализируемой пробы в 0,05 моль/л трисхлоридном растворе,центрифугирования,нанесения полученного раствора на колонку анализатора и элюирования 0,05 моль/л трисхлоридным раствором с последующей детекцией ультрафиолетом, отличающийся тем,что в качестве анализатора используют сорбент из карбонизованных абрикосовых косточек.