Способ получения аллергена для диагностики диктиокаулеза овец

(51) 61 39/00 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Способ получения аллергена для диагностики диктиокаулеза овец, включающий сбор слизи с трахей больных диктиокаулезом овец, разведение физиологическим раствором, обработку раствором уксусной кислоты, фильтрацию, нейтрализацию раствором пищевой соды и стерилизацию на водяной бане, физиологическим раствором слизь с трахей больных диктиокаулезом овец фильтруют через фильтровальную бумагу,фильтрат концентрируют в роторном испарителе при температуре 46 С в течение 18 часов, полученный концентрат автоклавируют при 1,0 атм в течение 40 минут, затем смесь двукратно центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут, осадок удаляют, а в полученный супернатант добавляют физиологический раствор и доводят содержание белка в нем до 5,0 мг/мл, после чего полученную смесь консервируют в 0,2 растворе пропионовой кислоты, лиофилизирут и используют в качестве целевого продукта.(72) Аманжол Рафилбек Аманжоллы Сулейменов Маратбек Жаксыбекович Тулеуханов Али(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(56) Шихобалова Н.П. Вопросы иммунитета при гельминтозах. М.-Л. Издательство АН СССР, 1950,с. 118-119(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛЛЕРГЕНА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ДИКТИОКАУЛЕЗА ОВЕЦ(57) Изобретение относится к ветеринарной гельминтологии, в частности к способам получения аллергена для диагностики диктиокаулеза овец. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в повышении выявляемости больных диктиокаулезом овец. 25244 Изобретение относится к ветеринарной гельминтологии, в частности к способам получения аллергена,применяемого для диагностики диктиокаулеза овец. Известен способ получения аллергена для диагностики диктиокаулеза овец, включающий сбор слизи с трахей больных диктиокаулезом овец,разведение физиологическим раствором, обработку раствором уксусной кислоты, фильтрацию,нейтрализацию раствором пищевой соды,стерилизацию на водяной бане (Шихобалова Н.П. Вопросы иммунитета при гельминтозах. - М. -Л. Издательство АН СССР, 1950.-. 118- 119). Недостатком данного способа является не высокая специфичность чувствительности получаемого аллергена. Задачей изобретения является разработка способа получения высокоактивного аллергена для выявления диктиокаулеза овец и снижения себестоимости и трудоемкости технологического процесса. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в повышении выявляемости больных диктиокаулезом овец. Способ получения аллергена для диагностики диктиокаулеза овец, включающий включающий сбор слизи с трахей больных диктиокаулезом овец,разведение физиологическим раствором,обработку раствором уксусной кислоты,фильтрацию, нейтрализацию раствором пищевой соды и стерилизацию на водяной бане, разведенную физиологическим раствором слизь с трахей больных диктиокаулезом овец фильтруют через фильтровальную бумагу, фильтрат концентрируют в роторном испарителе при температуре 46 С в течение 18 часов, полученный концентрат автоклавируют при 1,0 атм в течение 40 минут,затем смесь двукратно центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут, осадок удаляют, а в полученный супернатант добавляют физиологический раствор и доводят содержание белка в нем до 5,0 мг/мл, после чего полученную смесь консервируют в 0,2 растворе пропионовой кислоты, лиофилизирут и используют в качестве целевого продукта. Способ получения аллергена для диагностики диктиокаулеза овец осуществляют следующим образом. Собирают слизь с трахей больных диктиокаулезом убойных овец в стерильную посуду, разводят физиологическим раствором 11, и проводят фильтрацию этой жидкости через фильтровальную бумагу, полученный фильтрат концентрируют па ротационном испарителе типа ИР-1 М 3 при температуре 46 С в течение 18 часов. Затем концентрат автоклавируют в течение 12 часов при 1,0 атм в течение 40 минут, полученную смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут, удаляют осадок, а надосадочную жидкость сливают и вновь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут, затем осадок удаляют, в полученный супернатант разводят стерильным физиологическим раствором, при этом конечную 2 концентрацию белка доводят до 5,0 мг/мл. После чего полученный аллерген консервируют 0,02 раствором пропионовой кислоты, разливают в ампулы по 1,0 мл в стерильных условиях и лиофилизируют. Стерильность препарата проверяют путем посева на питательные среды МПА, МПБ в количестве 0,10,15 мл аллергена, который вносят стерильной пипеткой. Среды помещают в термостат при 37 С на 10 суток. При этом на поверхности питательных сред должен отсутствовать рост бактерий. Безвредность препарата проверяют на белых мышах весом 18-20 г в количестве 3 особей,которым препарат вводят подкожно в область брюшка по 0,5 мл. Наблюдение осуществляют в течение 5-10 суток. При осмотре места введения видимых изменений не обнаруживают. Общее физиологическое состояние мышей, при этом,должно быть удовлетворительным. Активность проверяют на 6 кроликах в возрасте 3-3,5 месяцев, разделенных на две группы по 3 в каждой. Животные первой группы служат контролем, они не подвергаются сенсибилизации,им в область спины подкожно вводят физиологический раствор. Кроликам второй группы в область спины подкожно вводят аллерген в дозе по 1,0 мл, двукратно, с интервалом двое суток. Через двое суток после последнего введения аллергена проводят аллергическое исследование. Для этого аллерген вводят внутрикожно в дозе по 0,1 мл всем опытным кроликам в область поясницы. Учет аллергической реакции осуществлялся через 3 часа после введения препарата. У животных первой группы (контроль) видимых изменений не наблюдается. У кроликов второй группы (опытной) на месте введения аллергена отмечается гиперемия и утолщение кожной складки на 12,0-19,0 мм. Активность и специфичность аллергена проверяется в производственных условиях. Животным препарат вводят шприцем объемом 1,02,0 см 3 и иглой для внутрикожного введения с соблюдением правил асептики и антисептики. Препарат вводят внутрикожно в подхвостовую складку в дозе 0,2 мл. Результаты аллергической пробы учитывают через 24 часа, при утолщении кожной складки на 17,0-22,0 мм, аллергическая реакция считается положительной. Таким образом, применение способа получения аллергена позволит повысить выявляемость больных диктиокаулезом овец и профилактировать данную инвазию. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения аллергена для диагностики диктиокаулеза овец, включающий сбор слизи с трахей больных диктиокаулезом овец, разведение физиологическим раствором, обработку раствором уксусной кислоты, фильтрацию, нейтрализацию раствором пищевой соды и стерилизацию на водянной бане,отличающийся тем,что 25244 разведенную физиологическим раствором слизь с трахей больных диктиокаулезом овец фильтруют через фильровальную бумагу,фильтрат концентрируют в роторном испарителе при температуре 46 С в течение 18 часов, полученный концентрат автоклавируют при 1,0 атм в течение 40 минут, затем смесь двукратно центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут, осадок удаляют, а в полученный супернатант добавляют физиологический раствор и доводят содержаение белка в нем до 5,0 мг/мл, после чего полученную смесь консервируют в 0,2 растворе пропионовой кислоты, лиофилизируют и используют в качестве целевого продукта.