Способ диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота в прямой реакции Сайдулдина

(51) 01 33/53 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ скота путем использования в реакции конглютинирующего комплекса, содержащегося в самой испытуемой сыворотке, без внесения извне этого дополнительного фактора реакции. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в эффективном выявлении бруцеллезных антител в сыворотке крови больного животного при помощи собственного конглютинирующего комплекса (конглютинина и комплемента), который содержится в самой испытуемой сыворотке. Испытуемую сыворотку крови крупного рогатого скота разводят физиологическим раствором 110 и разливают в 2 ряда пробирок в объеме от 0,1 см 3 до 0,5 см 3 с интервалом по 0,05 см 3. Общий объем в каждой пробирке доводят физиологическим раствором до 0,5 см 3. В один ряд пробирок добавляют по 0,25 см 3 физиологического раствора, а в другой ряд - столько же бруцеллезного антигена в рабочем титре для . Смесь выдерживают в водяной бане 30 мин. при 37 С, добавляют во все пробирки по 0,25 см 3 индикаторной системы и снова выдерживают в водяной бане в течение 1 часа и учитывают результаты. За титр принимают наименьшее количество сыворотки,обуславливающее полную конглютинацию эритроцитов. Оценка результатов реакции проводится по разнице титров испытуемой сыворотки при наличии бруцеллезного антигена и без него. Если титр сыворотки в присутствии бруцеллезного антигена снижается на 1 интервал (0,05 см 3) по сравнению с контролем без антигена, результат реакции считается сомнительным. Если эта разница составляет 2 интервала (0,1 см 3), результат считается положительным. Если титр сыворотки в присутствии бруцеллезного антигена не изменится и остается на уровне контроля без антигена, результат реакции считается отрицательным.(72) Сайдулдин Тлеуберды Кисиков Туарбай Кабылтаевич Отарбаев Бауыржан Камалович(56) Предварительный патент РК 15633, 01 33/53, 2005(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В ПРЯМОЙ РЕАКЦИИ САЙДУЛДИНА(57) Изобретение относится к ветеринарии, а именно к диагностике инфекционных болезней животных и может найти широкое применение для серологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота. Известен способ диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота в реакции Сайдулдина(Предварительный патент РК 15633 на изобретение. Название Способ диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота в реакции Сайдулдина, 15.04.2005, бюл. 4). В способе диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота в реакции Сайдулдинаисследование испытуемой сыворотки крови проводится путем добавления к ней бруцеллезного антигена,конглютинирующей сыворотки и индикаторной системы. Конглюнитирующая сыворотка служит дополнительным фактором,содержащим конглюнитирующий комплекс(конглютинин и комплемент). Индикаторной системой служат эритроциты барана,сенсибилизированные гемолизином.основана на связывании комплексом антиген-антитело конглютинирующего комплекса. Результат реакции учитывают по конглютинации эритроцитов. Наличие конглютинации принимается за отрицательный результа, а ее задержка - за положительный результат. Задачей изобретения является разработка способа диагностики бруцеллеза крупного рогатого 22945 Изобретение относится к ветеринарии, а именно к диагностике инфекционных болезней животных и может найти широкое применение для серологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота. Известен способ диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота в реакции Сайдулдина(Предварительный патент РК 15633 на изобретение. Название Способ диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота в реакции Сайдулдина. 15.04.2005, бюл.4). В способе диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота в реакции Сайдулдинаисследование испытуемой сыворотки крови проводится путем добавления к ней бруцеллезного антигена,конглютинирующей сыворотки и индикаторной системы. Конглюнитирующая сыворотка служит дополнительным фактором,содержащим конглюнитирующий комплекс(конглютинин и комплемент). Индикаторной системой служат эритроциты барана,сенсибилизированные гемолизином.основана на связывании комплексом антиген-антитело конглютинирующего комплекса. Результат реакции учитывают по конглютинации эритроцитов. Наличие конглютинации принимается за отрицательный результат, а ее задержка - за положительный результат. Недостаткомявляется необходимость внесение в реакцию конглютинирующей сыворотки,технология приготовление которой весьма сложная и трудоемкая. Задачей изобретения является разработка способа диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота путем использования в реакции конглютинирующего комплекса, содержащегося в самой испытуемой сыворотке, без внесения извне этого дополнительного фактора реакции. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в эффективном выявлении бруцеллезных антител в сыворотке крови больного животного при помощи собственного конглютинирующего комплекса (конглютинина и комплемента), который содержится в самой испытуемой сыворотке. В способе диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота в прямой реакции Сайдулдина (ПРС) серологическое исследование испытуемой сыворотки крови проводится путем добавления к ней бруцеллезного антигена и индикаторной системы из сенсибилизированных гемолизином эритроцитов барана, при этом результат учитывают по изменению конглитинирующей активности испытуемой сыворотки по сравнению с контролем без бруцеллезного антигена. Способ диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота в прямой реакции Сайдулдина состоит в следующем. Пример 1. Реакцию ставят в пробирках в объеме 1,0 см 3. Необходимы следующие компоненты испытуемая сыворотка крови крупного рогатого скота, свежая в день взятия или консервированная одним из способов консервации комплемента- единый бруцеллезный антиген для РА и РСК- физиологический раствор. Для приготовления индикаторной системы взвесь эритроцитов и гемолизина смешивают в равных объемах и выдерживают при 37-38 С в течение 15-20 минут. Испытуемую сыворотку крови крупного рогатого скота разводят физиологическим раствором 110 и разливают в 2 ряда пробирок в объеме от 0,1 см 3 до 0,5 см 3 с интервалом по 0,05 см 3. Общий объем в каждой пробирке доводят физиологическим раствором до 0,5 см 3. В один ряд пробирок добавляют по 0,25 см 3 физиологического раствора, а в другой ряд - столько же бруцеллезного антигена в рабочем титре для . Смесь выдерживают в водяной бане 30 мин. при 37 С,добавляют во все пробирки по 0,25 см 3 индикаторной системы и снова выдерживают в водяной бане в течение 1 часа и учитывают результаты. За титр принимают наименьшее количество сыворотки, обуславливающее полную конглютинацию эритроцитов. Оценка результатов реакции проводится по разнице титров испытуемой сыворотки при наличии бруцеллезного антигена и без него. Если титр сыворотки в присутствии бруцеллезного антигена снижается на 1 интервал (0,05 см 3) по сравнению с контролем без антигена, результат реакции считается сомнительным. Если эта разница составляет 2 интервала (0,1 см 3), результат считается положительным. Если титр сыворотки в присутствии бруцеллезного антигена не изменится и остается на уровне контроля без антигена, результат реакции считается отрицательным. Пример 2. Из неблагополучного по бруцеллезу хозяйства были исследованы сыворотки крови 151 коровы в ПРС, , реакции аглютинации (РА),реакции связывания комплемента (РСК), роз бенгал пробе (РБП), результаты которых приведены в таблице. 135 проб сывороток реагировали по всем тестам отрицательно. 16 сывороток крови дали положительный результат в ПРС, из них подтверждены вв 11 случаях. Лишь 5 проб сывороток реагировали положительно по РА, РСК и РБП, и еще одна проба - по РА и РСК. Пример 3. При исследовании сывороток крови 118 коров из благополучного по бруцеллезу хозяйства по всем вышеуказанным 5 тестам (ПРС РБП, РСК, РА) получен отрицательный результат. Таблица Результаты серологических исследований 151 коровы на бруцеллез 2 Число 16 11 положительных результатов Примечаниеположительный результат(-) - отрицательный результат ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота, включающий добавление к испытуемой сыворотке крови бруцеллезного антигена и индикаторной системы, отличающийся тем, что оценку результата проводят по снижению титра конглютинирующей активности испытуемой сыворотки под действием бруцеллезного антигена по сравнению с контролем без бруцеллезного антигена.