Селективная питательная среда для выделения культуры гриба FUSARIUM SOLANI

(51) 12 1/02 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ штаммов гриба. от посторонних микроорганизмов. Селективная питательная среда для выделения, достигается тем, что в качестве составляющих в питательную среду вводят азотнокислый натрий,двузамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний,хлористый калий, сернокислое железо закисное,агар и воду, в качестве питательной углеводной составляющей в не включают сахарозу и с целью подавления развития посторонних микроорганизмов в нее дополнительно включают левомицетин,тинидазол, метронидазол, причем компонеты содержатся в среде в следующем соотношении,вес. Азотнокислый натрий 0,15-0,20 Двузамещенный фосфорнокислый калий 0,10-0,15 Хлористый калий 0,03-0,05 Сернокислый магний 0,03-0,05 Сернокислое железо закисное 0,001-0,002 Сахароза 2,5-3,0 Агар 1,5-2,0 Левомицетин 0,01-0,02 Тинидазол 0,015-0,025 Метронидазол 0,010-0,015 Вода остальное(72) Михалев Александр Николаевич Жабаева Динара Болатпековна Сапко Ольга Александровна Утарбаева Айжан Шарельевна(73) Дочернее государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Институт молекулярной биологии и биохимии им. М.А. Айтхожина Республиканского государственного предприятия на праве хозяйственного ведения Центр биологических исследований Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) СЕЛЕКТИВНАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ КУЛЬТУРЫ ГРИБА(57) Изобретение относится к области сельского хозяйства и биотехнологии и может быть использовано для выделения культуры грибаи очистки ее от заражения посторонними микроорганизмами. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении селективной питательной среды, пригодной для очистки 22594 Изобретение относится к области сельского хозяйства и биотехнологии и может быть использовано для выделения культуры грибаи очистки ее от заражения посторонними микроорганизмами. Известен способ получения питательной среды для определения зараженности почвыи, которая содержит,вес. Азотнокислый натрий 0,15-0,20 Двузамещенный фосфорнокислый калий 0,10-0,15 Хлористый калий 0,03-0,05 Сернокислый магний 0,03-0,05 Сернокислое железо закисное 0,001-0,002 Галактоза 1,5-2,0 Агар 1,5-2,0 Пентахлорнитробензол 0,05-0,1 Стрептомицин 0,03-0,05 Желчь медицинская 12-16 мл/л среды Вода остальное В данной среде в качестве углеводной составляющей применяется галактоза, в качестве противомикробной составляющей применяется стрептомицин, для угнетения роста посторонних грибов применяется пентахлорнитробензол, а для ограничения роста колоний грибов с целью облегчения их подсчета применяется желчь медицинская А.с 763468 кл. С 12 К 1/06, 1980 г. Недостатком данного способа является высокая стоимость среды,высокая токсичность и экологическая опасность входящего в ее состав хлорорганического соединения и неэффективность против посторонней микрофлоры картофеля,которой заражается грибпри его выделении с промышленных образцов картофеля. Задачей изобретения является расширение ассортимента сред, пригодных для очистки штаммов гриба .от посторонних микроорганизмов. Поставленная задача достигается тем, что в питательную д для выделения и очистки от посторонних микроорганизмов культур грибавключают азотнокислый натрий,двузамещенный фосфорнокислый калий,сернокислый магний, сахарозу, хлористый калий,сернокислое железо закисное,левомицетин,тинидазол, метронидазол, агар и воду. Технология приготовления среды Готовят среду следующего состава О 3,К 2 НРО 4, КС, 4, 4, сахароза, агар,автоклавируют 20-30 мин при 1 атм. В охлажденную до 45-47 С среду перед разливкой в пробирки добавляют левомицетин, тинидазол и метронидазол. После застывания на скошенный агар проводят посев смыва с загрязненной культуры гриба. Засеянные пробирки со скошенным агаром инкубируют 7-10 суток при 25-27 С. . образует пышный ватообразный мицелий беловатокремового цвета. Пример 1. Загрязненную культуру грибавысевают в 5 пробирок на 2 скошенный агар на стерилизованную среду следующего состава Азотнокислый натрий 0,15-0,20 Двузамещенный фосфорнокислый калий 0,10-0,15 Хлористый калий 0,03-0,05 Сернокислый магний 0,03-0,05 Сернокислое железо закисное 0,001-0,002 Сахароза 2,5-3,0 Агар 1,5-2,0 Вода остальное После 7 суток инкубации наблюдают рост гриба. На поверхности агара образуется сероватая слизистая пленка. При микроскопировании наблюдаются отдельные скопления клеток и множественные точечные объекты, в том числе подвижные. Следовательно, наблюдается развитие посторонних микроорганизмов. Пример 2. Загрязненную культуру грибавысевают в 5 пробирок на скошенный агар на стерилизованную среду следующего состава, вес. Азотнокислый натрий 0,15-0,20 Двузамещенный фосфорнокислый калий 0,10-0,15 Хлористый калий 0,03-0,05 Сернокислый магний 0,03-0,05 Сернокислое железо закисное 0,001-0,002 Сахароза 2,5-3,0 Агар 1,5-2,0 Вода остальное Среду автоклавируют 20 мин при 1 атм. В охлажденную до 45-47 С среду перед разливкой в пробирки добавляют стрептомицин из расчета 0,030,05 вес После 7 суток инкубации наблюдают рост гриба. На поверхности агара образуется сероватая слизистая пленка. При микроскопировании наблюбдаются отдельные скопления клеток и некоторое количество точечных объектов, в том числе подвижных. Следовательно, наблюдается развитие посторонних микроорганизмов. Пример 3. Загрязненную культуру грибавысевают в 5 пробирок на скошенный агар на стерилизованную среду следующего состава, вес. Азотнокислый натрий 0,15-0,20 Двузамещенный фосфорнокислый калий 0,10-0,15 Хлористый калий 0,03-0,05 Сернокислый магний 0,03-0,05 Сернокислое железо закисное 0,001-0,002 Сахароза 2,5-3,0 Агар 1,5-2,0 Вода остальное Среду автоклавируют 20 мин при 1 атм. В охлажденную до 45-47 С среду перед разливкой в пробирки добавляют левомицетин из расчета 0,010,02 вес После 7 суток инкубации наблюдают рост гриба. 22594 На поверхности агара образуется сероватая слизистая пленка. При микроскопировании наблюбдаются отдельные скопления клеток, слабо развитый мицелий и некоторое количество точечных объектов, в том числе подвижных. Следовательно, наблюдается развитие посторонних микроорганизмов. Пример 4. Загрязненную культуру грибавысевают в 5 пробирок на скошенный агар на стерилизованную среду следующего состава, вес. Азотнокислый натрий 0,15-0,20 Двузамещенный фосфорнокислый калий 0,10-0,15 Хлористый калий 0,03-0,05 Сернокислый магний 0,03-0,05 Сернокислое железо закисное 0,001-0,002 Сахароза 2,5-3,0 Агар 1,5-2,0 Вода остальное Среду автоклавируют 20 мин при 1 атм. В охлажденную до 45-47 С среду перед разливкой в пробирки добавляют левомицетин из расчета 0,010,02 вес. и тинидазол из расчета 0,015-0,025 вес После 7 суток инкубации наблюдают рост гриба. На поверхности агара образуется белый тонкий газон. При микроскопировании наблюбдаются развитый мицелий и некоторое количество точечных объектов, в том числе подвижных. Следовательно, наблюдается развитие посторонних микроорганизмов. Пример 5. Загрязненную культуру грибавысевают в 5 пробирок на скошенный агар на стерилизованную среду следующего состава, вес. Азотнокислый натрий 0,15-0,20 Двузамещенный фосфорнокислый калий 0,10-0,15 Хлористый калий 0,03-0,05 Сернокислый магний 0,03-0,05 Сернокислое железо закисное 0,001-0,002 Сахароза 2,5-3,0 Агар 1,5-2,0 Вода остальное Среду автоклавируют 20 мин при 1 атм. В охлажденную до 45-47 С среду перед разливкой в пробирки добавляют левомицетин из расчета 0,010,02 вес., тинидазол из расчета 0,015-0,025 вес. и метронидазол из расчета 0,010-0,015 вес После 7 суток инкубации наблюдают рост гриба. На поверхности агара образуется белый пушистый газон. При микроскопировании наблюдаются развитый мицелий. Посторонних объектов не наблюдается. Следовательно, развитие посторонних микроорганизмов отсутствует. Таким образом, питательная среда, включающая азотнокислый натрий,двузамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний,хлористый калий, сернокислое железо закисное,левомицетин, тинидазол, метронидазол, агар и воду,пригодна в качестве питательных сред для выделения штаммов гриба . и для их очистки от посторонних микроорганизмов. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Селективная питательная среда для выделения культуры гриба, содержащая азотнокислый натрий,двузамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний,хлористый калий, сернокислое железо закисное,агар и воду, отличающаяся тем, что содержит сахарозу, левомицетин, тинидазол, метронидазол в следующем соотношении компонентов, мас. азотнокислый натрий 0,15-0,20 двузамещенный фосфорнокислый калий 0,10-0,15 хлористый калий 0,03-0,05 сернокислый магний 0,03-0,05 сернокислое железо закисное 0,001 -0,002 сахароза 2,5-3,0 агар 1,5-2,0 левомицетин 0,01-0,02 тинидазол 0,015-0,025 метронидазол 0,010-0,015 вода остальное