Способ получения диагностической сыворотки против Brucella ovis

(51) 61 39/10 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ при диагностике инфекционного эпидидимита баранов. Способ заключается в иммунизации кроликов взвесью инактивированных клеток 48-часовой агаровой культуры бруцелл штамма 424/2 или 10/2 с содержанием 180-220 млрд., м.к. на 1 см 3, иммунизацию осуществляют трехкратно, с интервалом 5-7 дней, с введением культур бруцелл внутривенно в объеме 0,2 см 3 и смесь культур бруцелл с равным объемом геля гидроокиси алюминия, в подушечки лапок в общем объеме 0,8 см 3 (по 0,2 см 3 на каждую лапку) и взятием крови через 14 после последней иммунизации, отделением сыворотки центрифугированием и е инактивацией. Изобретение позволяет ускорить процесс получения готового препарата, снизить его себестоимость при достижении высоких значений чувствительности получаемого препарата.(72) Иванов Николай Петрович Хусаинов Дамир Микдатович(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Вита-СТ , Иванов Николай Петрович , Хусаинов Дамир Микдатович(56) Регламент производства сыворотки диагностической бруцеллезной агглютинирующей сухой 273-82, утв. ГУ по производству бактерийных и вирусных препаратов МЗ СССР,08.04.92 ТУ-316-82 от 01.06.82 от 01.06.82., утв. ГУ по производству бактерийных и вирусных препаратов МЗ СССР(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ ПРОТИВ(57) Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в производстве сыворотки 20773 Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в производстве сыворотки при диагностике инфекционного эпидидимита баранов. Известен способ получения диагностической бруцеллезной сыворотки, заключающийся в иммунизации антигеном крупного рогатого скота в возрасте от 2 до 5 лет, при этом используют некастрированных самцов-продуцентов. До начала иммунизации животных выдерживают в течение 1 месяца на карантине, после чего проводят грундиммунизацию путем однократного введения 10 см 3 бруцеллезного антигена подкожно и через 1 месяц после этого приступают к иммунизации,Иммунизацию осуществляют в 2-4 цикла с интервалами 20-30 суток. В течение полного цикла проводят 5 ежедневных инъекций антигена в объемах 10, 15, 20, 30, 40 см 3 антигена. Для иммунизации животного применяют антигены,инактивированные нагреванием при температуре 80 С в течение 2 часов с последующим выдерживанием при 37 С 48 часов. Антигены представляют собой взвеси культур 544,16-,1330(регламент производства сыворотки диагностической бруцеллезной агглютинирующей сухой 273-82, утв. ГУ по производству бактерийных и вирусных препаратов МЗ СССР,08.04.92 ТУ-316-82 от 01.06.82., утв. ГУ по производству бактерийных и вирусных препаратов МЗ СССР). Недостатком способа является длительность,трудоемкость процесса и недостаточная активность конечного продукта при диагностике инфекционного эпидидимита баранов. Задачей изобретения является получение диагностической сыворотки против. Техническим результатом изобретения является ускорение процесса изготовления и снижение себестоимости готового препарата при сохранении достаточно высокой активности. Цель достигается путем иммунизации кроликов взвесью инактивированных клеток 48-часовой агаровой культуры бруцелл штамма 424/2 или 10/2 с содержанием 180-220 млрд. м.к. на 1 см 3, иммунизацию осуществляют трехкратно, с интервалом 5-7 дней, с введением культур бруцелл внутривенно в объеме 0,2 см 3 и смесь культур бруцелл с равным объемом геля гидроокиси алюминия, в подушечки лапок в общем объеме 0,8 см 3 (по 0,2 см 3 на каждую лапку) и взятием крови через 14 после последней иммунизации, отделением сыворотки и е инактивацией. Способ получения сыворотки для диагностики инфекционного эпидидимита баранов осуществляется следующим образом. Пример. 1. Техника изготовления бруцеллезного антигена для иммунизации животных- доноров. Бруцеллы штамма 424/2 или 10/2 высевают на твердую питательную среду посевную четверть. Посев культуры производят путем увлажнения питательной среды посевным материалом, для чего используют 2-суточную агаровую культуру бруцелл. Засеянные четверти помещают в термостат при температуре 37 С на 48 часов. После окончания выращивания культуры смывают стерильным 0,85-ным фенолизированным раствором хлористого натрия с рН 7,0-7,2 из расчета 35-50 см 3 на одну бутыль. Смытые культуры слипают в бутыли по 10 л,доводят концентрацию 0,5-ным раствором фенола до 180-220 млрд. м.к./см 3 и прогревают при 80 С в течение 60 минут. Прогретую суспензию проверяют на чистоту и стерильность путем микроскопии мазков, окрашенных по Грамму или Козловскому, и высева на МПБ, МПА, печеночно-мартеновский агар и бульон с переваром Хоттингера, МППБ под вазелиновым маслом и среду Сабуро - по две пробирки и два флакона с 50 см 3 бульона на каждый образец. За высевами наблюдают в течение 10 дней. 2. Техника получения сыворотки. Кроликов породы Шиншилла массой 2,5-3 кг иммунизируют полученной убитой суспензией (180220 млрд. м.к./см 3) 48-часовой агаровой культурой бруцелл штамма 424/2 или 10/2. Животным вводят суспензию бруцелл внутривенно в объеме 0,2 см 3 и смесь культур бруцелл с равным объемом геля гидроокиси алюминия, в подушечки лапок в общем объеме 0,8 см 3 (по 0,2 см 2 на каждую лапку). Иммунизацию осуществляют трехкратно, с интервалом 5-7 дней. Через 14 суток проводят эксфузию крови, отделяют сыворотку. Сыворотку инактивируют прогреванием при 56 С в течение 30 минут и добавляют фенол до конечной концентрации 0,5. Через 24-48 часов проверяют титр сыворотки, отсутствие специфического роста(бактериологический и биологический контроль стерильности препарата), после чего разливают по ампулам или флаконам. Полученная сыворотка против инфекционного эпидидимита баранов - слегка опалесцирующая жидкость, при длительном стоянии может образовывать незначительный осадок, легко разбивающийся при встряхивании. Сыворотка хранится при температуре 4 С. Специфический титр сыворотки в РДСК составляет 180-1160. Таким образом, заявляемый способ имеет значительные преимущества перед известным по трудоемкости, себестоимости и срокам получения при достижении высоких титров готового препарата. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения диагностической сыворотки при диагностике инфекционного эпидидимита баранов, включающий изготовление антигенов,иммунизацию животных-доноров,взятие и обработку крови с последующим выделением и стерилизацией сыворотки, отличающийся тем, что для гипериммунизации кроликов в качестве антигена используют суспензию инактивированной 20773 48-часовой агаровой культуры бруцелл штамма 424/2 и 10/2 с содержанием 180-220 млрд. м.к. на 1 см 3, иммунизацию осуществляют трехкратно, с интервалом 5-7 дней, с введением культур бруцелл внутривенно в объеме 0,2 см 3, и смесь культур бруцелл с равным объемом геля гидроокиси алюминия, в подушечки лапок в общем объеме 0,8 см 3 (по 0,2 см 3 на каждую лапку) и взятием крови через 14 дней после последней иммунизации.