Способ антимутагенной защиты организма

(51) 61 36/00 (2006.01) 61 39/06 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(54) СПОСОБ АНТИМУТАГЕННОЙ ЗАЩИТЫ ОРГАНИЗМА(57) Изобретение относится к области медицины, в частности фармакологии. Сущность изобретения состоит в том, что разработан способ антимутагенного воздействия на организм, включающий введение масляного экстракта из листьев крапивы в качестве вещества, снижающего кластогенное действие химических мутагенов алкилирующего агента - циклофосфамида и прооксиданта диоксидина. Изобретение расширяет арсенал способов защиты живого организма от мутагенного воздействия окружающей среды.(72) Кузденбаева Раиса Салмаганбетовна Искакова Сауле Сагынгалиевна Алдабергенова Куляш Утемисовна(73) Республиканское государственное казенное предприятие Западно-Казахстанская государственная медицинская академия им. Марата Оспанова Министерства здравоохранения Республики Казахстан(56) Белоголовская Е.Г. Изучение антимутагенной активности комбинации аспартама и -каротина в эксперименте. Дисс. на соискание ученой степени канд. биол. наук. М., 2002 19901 Изобретение относится к медицине, а именно фармакологии и может быть использовано для защиты организма от мутагенного воздействия химических факторов окружающей среды. Известен способ защиты генома от мутационных повреждений с помощью жирорастворимого каротина - естественного компонента ряда лекарственных растений (в дозах 0,15 1,5 15 мг/кг) в эксперименте (Е.Г. Белоголовская. Изучение антимутагенной активности комбинаций аспартама и каротина в эксперименте. Дисс. на соискание ученой степени канд. биол. наук. М., 2002.). Опыты проведены в 3-х режимах 1) острый экспериментоднократное совместное введение мутагена и каротина 2) предобработка - пятидневное введение-каротина,последнее введение которого сочеталось с однократным введением мутагена 3) совместное пятидневное введение мутагена и каротина. Полученные автором данные показали,что -каротин обладал протекторной активностью против мутаций, индуцированных классическими мутагенами циклофосфамидом (ЦФ) и диоксидином(ДН). Результаты изучения антимутагенного эффекта (АМЭ) жирорастворимого -каротина представлены в следующей таблице. Таблица Антимутагенный эффект -каротина Режим введения Жирорастворимый каротин- статистически достоверная редукция эффектов мутагена при применении антимутагена во всех используемых дозах (АМЭ против ДН - 2227, против ЦФ - 33-43)/- - АМЭ проявился в дозах -каротина 1,5 и 15 мг/кг и только по отношению к ДН (42-57)- - отсутствие антимутагенного эффекта. Недостатком этого способа является то, что каротин не оказывал своей антимутагенной активности в условиях острого эксперимента ни в одной из испытанных доз, а в режиме предобработки АМЭ проявлялся только в максимальных дозах и только против одного мутагена - ДН. Ещ одним существенным недостатком этого способа является недоступность препарата для населения, вследствие отсутствия его на прилавках наших аптек. Задача изобретения - изыскание более эффективного способа защиты от мутагенных повреждений с помощью поликомпонентных растительных препаратов, богатых как -каротином, так и другими антимутагенными биологически актив-ными веществами (БАВ). Таким требованиям наиболее соответствует созданный на кафедре фармакологии ЗападноКазахстанской государственной медицинской академии имени Марата Оспанова лекарственный препарат Масло крапивное (Регистрационное удостоверение РК - ЛС-3 -008662). Масло крапивное масляный экстракт из листьев крапивы(МЭЛК) содержит сумму каротиноидов, в перерасчте на -каротин не менее 0,8-1 мг, а также токоферол, полиненасыщенные жирные кислоты и другие БАВ. Способ антимутагенной защиты включает в себя введение крысам МЭЛК в трех режимах эксперимента однократно совместно с мутагеном(острый эксперимент), профилактически в течение 5 и 14 дней до введения мутагена (предобработка),совместно с мутагеном в течение 5 дней (совместное введение). Во всех режимах опыта МЭЛК вводили в дозах 1,25 2,5 5 мл/кг. В качестве мутагенов использовали противоопухолевый препарат из 2 группы алкилирующих агентов - циклофосфамид(ЦФ) и антибактериальный препарат, производный хиноксалина-диоксидин (ДН). Способ осуществлялся следующим образом беспородные крысы-самцы массой тела 160-200 г содержались на общевиварном корме при 12-ти часовом световом режиме и свободном доступе к воде и пище. МЭЛК вводили внутрижелудочно через зонд однократно в суточных дозах 1,25 2,5 и 5 мл/кг. Мутагены вводили внутрибрюшинно ЦФ в дозе 20 мг/кг, ДН в дозе 200 мг/кг. Эксперименты проводили при введении МЭЛК в трех вышеописанных режимах. Животных забивали через 24 часа после инъекции мутагена в условиях острого опыта и предобработки, а также через 6 часов в режиме совместного введения. Цитогенетическое обследование проводили методом учта микроядер в полихроматофильных эритроцитах (ПХЭ) костного мозга. Каждая экспериментальная группа включала по 6 животных, от каждой крысы проанализировано по 2000 ПХЭ. Контролем служили интактные животные, а также крысы, получавшие подсолнечное масло внутрижелудочно в тех же дозах, что и МЭЛК (контроль на растворитель). Оценка мутагенного эффекта МЭЛК проводилась согласно методическим указаниям по оценке мутагенной активности химических веществ(Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М., 2000). Статистическая обработка результатов исследований проведена с помощью компьютерной программы 6.0. Степень достоверности различия между двумя сравниваемыми рядами вариант (р) определяли с помощью критерия Стьюдента . Полученные результаты считали достоверными при р 0,05. АМЭ рассчитывали по формуле 19901 мутагена , М 2 - количество ПХЭ с микроядрами при действии мутагена и МЭЛК . Пример 1. Влияние МЭЛК на цитогенетические эффекты ЦФ в ПХЭ костного мозга крыс. Установлено 1. В условиях острого эксперимента МЭЛК в дозе 5 мл/кг уменьшает эффект мутагена на 35,7. 2. 5-дневная предобработка экспериментальных животных МЭЛК во всех дозах способствовала снижению уровня клеток с микроядрами на 52,3654,96. Защитный эффект МЭЛК в данном режиме более выражен, чем в остром опыте. 3. На фоне 14-дневной предобработки животных МЭЛК в 3-х указанных дозах оказывал защитный эффект. При этом в дозах 1,25 и 2,5 мл/кг антимутагенная активность составила 56,76 и 60,38 соответственно, то есть превышала протекторный эффект МЭЛК в тех же дозах при 5-дневной предобработке. 4. В условиях совместного 5-дневного введения МЭЛК в дозах 2,5 и 5 мл/кг оказывал приблизительно одинаковое протекторное действие(43,6 и 46,52 соответственно). Однако АМЭ в этих условиях эксперимента был ниже, чем в режиме предобработки. Полученные данные позволяют заключить, что МЭЛК обладает антимутагенным действием по отношению к промутагену ЦФ. Причем, МЭЛК наиболее эффективен при предобработке животных. Пример 2. Влияние МЭЛК на цитогенетические эффекты ДН в ПХЭ костного мозга крыс. Установлено 1. В условиях острого эксперимента антимутагенная активность МЭЛК в дозе 5 мл/кг составила 39,0. 2. В опытах с предварительным 5-дневным введением МЭЛК в 3-х вышеуказанных дозах наблюдалась статистически достоверное уменьшение мутагенного эффекта ДН на 48,62-59,4. 3. На фоне 14-дневного введения МЭЛК его антимутагенная активность во всем диапазоне исследованных доз колебалась в пределах 48,7771,0, что значительно превышало показатели,полученные при 5-дневной предобработке. 4. Протекторная активность МЭЛК в дозах 1.25 2,5 и 5 мл/кг в режиме совместного 5-дневного введения была практически на одном уровне и составила 53,9 56,04 и 52,13 соответственно. Обобщая результаты, установленные в экспериментах с ДН, можно констатировать, что МЭЛК значительно снижал повреждающее действие мутагена при различных режимах введения и наиболее эффективно при предобработке животных. Сравнительная оценка модифицирующего влияния МЭЛК на цитогенетическую активность ЦФ и ДН показала, что наибольший АМЭ МЭЛК проявляется на мутациях, индуцированных ДН. Таким образом, можно утверждать, что у МЭЛК обнаружено антимутагенное действие по тесту учета микроядер в отношении двух модельных мутагенов - непрямого мутагена ЦФ и прямого мутагена, прооксиданта ДН. Данный эффект в количественном отношении выше антимутагенного эффекта прототипа - -каротина и проявляется не только в режиме предобработки и совместного 5-ти дневного прима, но и в условиях однократного введения в максимальной дозе. Внедрение способа позволит повысить антимутагенную защиту организма от средовых генотоксикантов более эффективным и доступным по сравнению с -каротином лекарственным средством - масляным экстрактом из листьев крапивы, протекторный эффект которого составляет 35,7 до 71 в зависимости от режима введения. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ антимутагенной защиты организма,включающий введение лекарственного средства,отличающийся тем, что в качестве лекарственного средства вводят препарат Масло крапивное,содержащее -каротин в концентрации не менее 0,81,0 мг, -токоферол и полиненасыщенные жирные кислоты (Регистрационное удостоверение РК Л-3008662), в дозе 5,0 мл/кг массы тела в сутки перорально. 2. Способ по пункту 1, отличающийся тем, что масляный экстракт из листьев крапивы вводят однократно в условиях контакта организма с мутагенами. 3. Способ по пункту 1. отличающийся тем, что масляный экстракт из листьев крапивы вводят в течение 5 дней в условиях контакта организма с мутагенами. 4. Способ по пункту 1, отличающийся тем, что масляный экстракт из листьев крапивы вводят в течение 5 дней до контакта организма с мутагенами. 5. Способ по пункту 1, отличающийся тем, что масляный экстракт из листьев крапивы вводят в течение 14 дней до контакта организма с мутагенами.