Способ получения медиаторов фетальных изолированных гепатоцитов человека

(51) 61 35/407 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к экспериментальной медицине. Медиаторы фетальных изолированных гепатоцитов человека получают из надосадочной жидкости клеточной суспензии фетальных изолированных гепатоцитов. Извлеченные из надосадочной жидкости клеточной суспензии медиаторы фетальных изолированных гепатоцитов человека в дальнейшем будут использоваться в качестве биологически активных веществ.(76) Доскалиев Жаксылык Акмурзаевич ,Байгенжин Абай Кабатаевич , Григоревский Владимир Петрович, Жетимкаринова Айгуль Даутхановна , Сапарбаев Самат Сагатович(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕДИАТОРОВ ФЕТАЛЬНЫХ ИЗОЛИРОВАННЫХ ГЕПАТОЦИТОВ ЧЕЛОВЕКА 19900 Изобретение относится к экспериментальной медицине. Известен способ получения фетальных изолированных гепатоцитов, включающий механическую обработку ткани печени с применением устройства для обработки.(Алиев М.А., Доскалиев Ж.А., Омарова К.П.,Сундетов Ж.С., Исаев Г.И., Куспакова .Ш.,Искаков А.Ж. Способ отделения печеночных клеток от стромы и устройство для его осуществления, патент РК 28906 от 04.08.2000). Известный способ эффективен в измельчении и удалении стромы, несущей до 90 антигенов печени, способных вызвать реакцию отторжения. Недостатком данного способа является повреждение клеток устройством для механической обработки печени, ведущее к потере части фетальных гепатоцитов. Известный способ не предусматривает получения из клеточной суспензии биологически активных веществ, так называемых медиаторов фетальных изолированных гепатоцитов. При проведении поиска аналогов способу получения медиаторов фетальных изолированных гепатоцитов нами не найдено. Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа получения медиаторов фетальных изолированных гепатоцитов человека. Технический результат - медиаторы фетальных изолированных гепатоцитов человека будут использоваться в экспериментальной медицине в качестве новых биологически активных веществ. Предлагаемый способ получения медиаторов фетальных изолированных гепатоцитов человека основан на методике ферментативной обработки фетальной ткани печени. Преимуществом ферментативной обработки печеночной ткани является высокая (до 93) жизнеспособность фетальных гепатоцитов и высокий уровень (до 250350 мл) выхода надосадочной жидкости,содержащей биологически активные медиаторы фетальных гепатоцитов. Способ осуществляется следующим образом. Для выделения фетальных клеток используют абортивный материал,полученный при искусственном прерывании беременности (18-20 недель) у здоровых женщин, предварительно обследованных на наличие вирусных и бактериальных инфекций. Извлеченную печень плода человека погружают в 70 раствор этанола, и после фламбирования - помещают в раствор Хенкса,содержащий 500 ед/см 3 пенициллина и 500 мкг/см 3 стрептомицина. Орган переносят в чашки Петри,удаляют капсулу, желчный пузырь, кровеносные сосуды и измельчают па фрагменты размером 2-3 мм. Измельченную массу печени переносят в колбу и тщательно отмывают раствором Хенкса с антибиотиками, от форменных элементов крови и остатков соединительной ткани - до получения прозрачного раствора Хенкса. Дезагрегацию осуществляют в 0,10 растворе трипсина. Процесс трипсинизации (7-9 циклов) проводят при 37 С на магнитной мешалке, с продолжительностью одного цикла трипсинизации 8-10 мин и до полного истощения ткани. Процесс отщепления клеток от кусочков печени вызывает мутность раствора трипсина. Степень мутности раствора трипсина является критерием окончания одного цикла трипсинизации. Приготовленную суспензию клеток переносят во флаконы (объемом 0,5 дм 3) содержащие до 10 сыворотки, необходимой для нейтрализации действия трипсина. Суспензию фильтруют через 3-х слойный марлевый фильтр, 5 минут центрифугируют в режиме 1000 (для освобождения от трипсина) и извлекают клеточный надосадок - биологически активные медиаторы. Полученные медиаторы (в среднем 250-350 мл) разливают (по 10,0 мл) в полиалломерные пробирки с коническим дном и винтовой крышкой. Пробирки с медиаторами помещают в специальный герметичный контейнер, имеющий соответствующие маркировку и паспорт, и хранят в низкотемпературном (-96 С) холодильнике в качестве биологически активного материала. Таким образом, извлеченные из надосадочной жидкости клеточной суспензии медиаторы фетальных изолированных гепатоцитов человека могут в дальнейшем использоваться в качестве биологически активных веществ. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения медиаторов фетальных изолированных гепатоцитов человека, отличающийся тем, что медиаторы извлекают из надосадочной жидкости клеточной суспензии фетальных изолированных гепатоцитов.