Средство, обладающее гепатопротекторным действием

(51) 61 35/407 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, хирургии и может быть использовано при лечении острых и хронических гепатитов в эксперименте. В качестве гепатопротекторного средства в эксперименте предложено применение надосадочной жидкости фетальных клеток Предлагаемое средство обеспечивает восстановление структуры и функций печени при токсических гепатитах.(76) Букеева Жанар Каналбаевна , Стикеева Райхан Куандыковна , Тажибаева Дамира Сабировна , Жетимкаринова Айгуль Даутхановна 19898 Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, хирургии и может быть использовано при лечении острых и хронических гепатитов в эксперименте. В терапии заболеваний гепатобилиарной системы используют большое количество лекарственных препаратов. Это витаминные средства,аминокислоты и гидролизаты белков, противовоспалительные и иммунотропные средства, а также гепатопротекторы. Роль последних очень важна вследствие того, что эта группа веществ способствует стабилизации структуры и функции гепатоцитов. Современная терапия многих заболеваний не дает удовлетворительного результата, в частности, из-за отсутствия эффективных препаратов, стимулирующих регенерацию печени (Катикова О.Ю. Эксперим. и клин, фармакол. 2002/6 Мамаев С.Н. с соавт. Иммунол. 2001/2). Известен ряд препаратов из расторопши пятнистой Силимарин Легалон, Карсил,Силибор, Гепабене, Гепатофальк планта и др. За наиболее близкий аналог мы взяли лекарственное средство с гепатопротекторным действием Карсил получаемое из расторопши пятнистой. Применение препарата Карсил как гепатопротектора основывается на трх основных биологических эффектах мембраностабилизирующем, антиоксидантном и метаболическом.(Растительные лекарственные средства./ Под ред. Н.П. Максютиной. - Киев. Здоровье, 1985.с.85-102.) Однако у препаратов расторопши имеется существенный недостаток,т.к. флавоноиды способствуют накоплению аскорбиновой кислоты в печени и одновременно замедляют выведение се из организма. Флавоноиды усиливают ферментативное окисление аскорбиновой кислоты до дегидроаскорбиновой кислоты и таким образом предохраняют ее от дальнейшего окисления и выведения из организма. Дегидроаскорбиновая кислота растворяется в жирах лучше аскорбиновой и, проникая через мембраны, интенсивнее накапливается в органах. Следствием этого является снижение регенеративной активности гепатоцитов. Таким образом, известные на сегодняшний день гепатопротекторы не могут полностью защитить или восстановить нарушенные функции гепатоцитов, поскольку любой из них влияет лишь на отдельные звенья патогенеза гепатоцитов. В связи с чем, современные гепатопротекторы используются в комплексной терапии. Однако такой подход опасен взаимодействием препаратов вследствие полипрагмазии и осложнением течения заболевания. Задачей изобретения является разработка нового гепатопротекторного средства, которое полностью защищает или восстанавливает нарушенные функции печени. Технический результат расширение арсенала гепатопротекторных средств. Технический результат достигается применением надосадочной жидкости фетальных клеток в 2 качестве гепатопротекторного средства в эксперименте. Гепатопротекторное средство получают следующим образом Для выделения надосадочной жидкости фетальных клеток использовали абортивный материал,полученный при искусственном прерывании беременности (18-20 недель) у здоровых женщин,предварительно обследованных на наличие вирусных и бактериальных инфекций. Извлеченную печень плода человека погружали в 70 раствор этанола, и после фламбирования - помещали в раствор Хенкса, содержащий 500 ед/см 3 пенициллина и 500 мкг/см 3 стрептомицина. Орган переносили в чашки Петри, удаляли капсулу,желчный пузырь, кровеносные сосуды и измельчали на фрагменты размером 2-3 мм. Измельченную массу печени переносили в колбу и тщательно отмывали раствором Хенкса с антибиотиками, от форменных элементов крови и остатков соединительной ткани - до получения прозрачного раствора Хенкса. Дезагрегацию осуществляли в 0,10 растворе трипсина. Процесс трипсинизации(7-9 циклов) проводили при 37 С на магнитной мешалке, с продолжительностью одного цикла трипсинизации 8-10 мин и до полного истощения ткани. Процесс отщепления клеток от кусочков печени вызывает мутность раствора трипсина. Степень мутности раствора трипсина является критерием окончания одного цикла трипсинизации. Приготовленную суспензию клеток переносили во флаконы (объемом 0,5 дм 3) содержащие до 10 сыворотки, необходимой для нейтрализации действия трипсина. Суспензию фильтровали через 3-х слойный марлевый фильтр, 5 минут центрифугировали в режиме 1000 (для освобождения от трипсина) и извлекали клеточный надосадок,содержащий биологически активные медиаторы. Полученную надосадочную жидкость разливали (по 10,0 мл) в полиалломерные пробирки с коническим дном и винтовой крышкой. Пробирки помещали в специальный герметичный контейнер, имеющий соответствующие маркировку и паспорт, и хранили в низкотемпературном (-96 С) холодильнике для дальнейшего использования в эксперименте. Надосадочная жидкость, полученная при заготовке фетальных клеток, содержит медиаторные вещества. Медиаторные веществабиомолекулярная масса, содержащая гормоны, альфафетопротеин, факторы роста, пептиды, цитокины,иммуноглобулины, электролиты и др. (состав определн в клинико-диагностической лаборатории НЦ г.Астаны) Гепатопротекторное действие исследуемого вещества изучено на белых беспородных крысахсамцах массой 180-220 г. на модели острого токсического поражения парацетамолом и на модели хронического поражения печени четыреххлористым углеродом. Это средство вводили животным внутрибрюшинно в дозе 0,1 мл/кг массы тела до введения парацетамола и затем 1 раз в 2 дня в течение 10 дней на фоне воспроизведения острого парацетамолового 19898 гепатита. Другой группе животных средство вводили до введения четыреххлористого углерода и затем 1 раз в два дня в течение 45 дней на фоне воспроизведения хронического гепатита. В качестве препарата срав-нения использовали гепатопротектор- эссенциале в терапевтической дозе 0,14 мл/кг. Эффективность гепатозащитного действия оценивали по нормализации функциональных и биохимических показателей состояния печени,которые являются наиболее информативными тестами активности АлАт, , ЩФ, ГГТП,общего билирубина в сыворотке крови, содержанию белка, триглицеридов. Уже на второй день эксперимента в группе животных, получавших медиаторы в дозе 0,1 мл/кг, уровень АЛТ составил 111,4630,47, что достоверно ниже показателя контрольной группы в 3 раза (Р 10,05). Дальнейшее наблюдение в этой экспериментальной группе показало еще большее снижение показателя АЛТ,что к 10-му дню привело к снижению его до уровня контрольной группы. Значительный гепатопротекторный эффект наблюдается на десятые сутки эксперимента в экспериментальной группе животных, пролеченных с применением надосадочной жидкости фетальных клеток. При микроскопии препаратов данной группы животных мы наблюдали отсутствие полей некроза в печени. Снизилась активность дистрофических изменений гепатоцитов, сохранилась лишь зернистая дистрофия,апоптоз. Ход печеночных балок был сохранен. Воспалительные инфильтраты исчезли. Восстановилась относительно нормальная структура печени. Применение надосадочной жидкости фетальных клеток благоприятно влияло на течение токсического парацетамолового гепатита, о чем свидетельствует нормализация биохимических показателей активности гепатоцитов и восстановление морфологической картины печени. В большей части препаратов наблюдалась относительно сохранная структура печеночных балок, повышенная пролиферативная активность клеток стромы и эпителия междольковых желчных протоков, умеренное расширение синусоидных капилляров долек. Данная картина является признаком значительной положительной динамики. Таким образом, в экспериментальной группе животных, у которых за час до моделирования хронического гепатита и в последующем проводили лечение надосадочной жидкостью фетальных клеток в дозе 0,1 мл/кг 3 раза в неделю в течение 45 суток наблюдались значительные положительные сдвиги в сторону уменьшения воспалительных и дистрофических изменений в печеночной ткани. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Применение надосадочной жидкости фетальных клеток в качестве гепатопротекторного средства в эксперименте.